IL-26在慢性盆腔炎中的表达及对CD4+T细胞功能的影响

张 莉，薛 炜

(马鞍山市中心医院 检验科，安徽 马鞍山 243000 )

慢性盆腔炎是女性生殖器官中常见的疾病，免疫紊乱在慢性盆腔炎的发病机制中起重要作用。现有研究在一定程度上阐述了慢性盆腔炎患者固有免疫和适应性免疫之间的关系[1-2]。

有报道Th17细胞主要通过其产生的IL-17、IL-22和IL-26等在自身免疫性疾病和炎症性疾病的发病机制中发挥效用[3]。IL-26是IL-10家族中的一员[4]，在慢性盆腔炎中作用于单核细胞并产生其他促炎介质，如IL-1β、IL-6和TNF-α。IL-10蛋白家族可通过抑制一系列细胞因子、趋化因子和受体的表达而参与介导炎症反应的负性调控[5-6]。IL-26是一个多效细胞因子，在肠道和肺中同时具有促炎和抗炎的作用，并参与了自身免疫性疾病的进程调控、组织修复和致病性炎症。研究表明，它在感染和炎症期间对机体具有一定的保护性作用[7]。上皮细胞和免疫细胞，包括肺泡巨噬细胞、Th1、Th17、NK细胞和巨噬细胞，是IL-26的主要来源。IL-26可激活各种免疫细胞，以促进抗病毒和抗菌反应。如IL-26通过诱导人外周血NK细胞TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)从而杀死丙型肝炎病毒感染的肝细胞[8]。此外，CD68+肺泡巨噬细胞及Th17细胞来源的IL-26分别通过招募中性粒细胞及效应性免疫细胞至肺部细菌感染部位及诱导DC细胞产生IFN来激发抗菌效应[9]。本文通过对慢性盆腔炎中IL-26表达的研究，观察IL-26在其中所发挥的作用，并探究其具体作用机制，为临床治疗慢性盆腔炎提供一定的理论基础。

1 资料与方法

1.1 病例采集 收集临床60例慢性盆腔炎患者[平均年龄(35.4 ± 6.7)岁]和60例健康对照者[平均年龄(35.9 ± 8.2)岁]的血清及盆腔液样品，其中9例慢性盆腔炎患者处于急性发作期。此项研究得到了医院伦理委员会的批准，并获得了所有患者的书面同意。

1.2 体液中各种炎症因子的ELISA检测 采用人ELISA试剂盒(R&D Systems)检测血清和盆腔液中IL-26、IL-17和IL-37的表达，操作均按照试剂盒说明严格执行。

1.3 细胞分离与培养 使用Ficoll Hypaque梯度离心法从9例慢性盆腔炎患者和随机选取的10例健康对照者的外周血中分离出单核细胞，再用磁珠分选获得纯化的CD14+单核细胞，通过磁珠和流式细胞仪分选获得CD4+CD45ROT细胞，将1×105/mL密度的CD4+CD45ROT细胞和5×103/mL密度的CD14+单核细胞在含有2 % FCS、100 U / mL青霉素和链霉素的RPMI 1640培养基中共培养，并加入IL-26和抗-CD3单抗进行刺激。培养7 d后，检测培养上清液IL-17和IL-37的水平。

1.4 C-反应蛋白的测定 采用常规贝克曼生化自动分析仪，采用免疫比浊法测定CRP。正常范围的上限为5 mg/L。

1.5 统计分析 使用Graphpad 5.0对数据进行统计分析。计量资料采用均数±标准差表示。两变量间采用直线相关分析，多组间采用方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 IL-26在慢性盆腔炎中表达上调 收集慢性盆腔炎患者(60名，含51名非急性期患者和9名急性发作期患者)及健康对照者血清和盆腔液样本，ELISA检测IL-26表达情况。结果表明慢性盆腔炎患者较健康对照者血清(t=5.25,P<0.001)和盆腔液中(t=4.16,P<0.01) IL-26表达水平上调(见图1A、C)。在对慢性盆腔炎患者急性期(51例)和非急性期(9例)的血清IL-26水平的比较发现，慢性盆腔炎急性发作期时血清中IL-26水平较非急性发作期低(见图1B，t=3.27,P<0.05)。

A.慢性盆腔炎患者与健康对照者血清IL-26水平(P<0.001);B.慢性盆腔炎急性发作患者与非急性发作患者血清IL-26水平(P<0.05);C.慢性盆腔炎患者与健康对照者盆腔液IL-26水平(P<0.01)。1.慢性盆腔炎；2.健康对照者；3.慢性盆腔炎急性发作；4.慢性盆腔炎非急性发作。

*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001。

图1 IL-26在慢性盆腔炎中表达上调

2.2 血清及盆腔穿刺液中IL-26的表达与IL-17及IL-37表达的相关性 收集慢性盆腔炎患者血清及盆腔穿刺液，ELISA分别测定样本中IL-26、IL-17、IL-37的表达，分析IL-26与IL-17及IL-37表达的相关性。结果表明，在血清及盆腔液中IL-26的表达与IL-17的表达呈正相关(图2A、B)，而与IL-37的表达呈负相关(图2 C、D)。

2.3 IL-26促进Th17型细胞因子的产生并抑制Treg型细胞因子的产生 将9例慢性盆腔炎急性发作患者和健康对照者的CD4+T细胞和单核细胞分别共培养，并加入IL-26和抗-CD3抗体刺激，通过ELISA检测培养上清中IL-17(F=49.53,P<0.01)、IL-23(F=17.26,P<0.01)、IL-10(F=69.97,P<0.01)和TGF-β1(F=11.15,P<0.01)的水平。结果表明IL-26可促进Th17型细胞因子(IL-17、IL-23)的分泌而抑制Treg型细胞因子(IL-10、TGF-β)的产生。

A.患者血清中IL-17与IL-26相关性分析；B.患者盆腔液中IL-17与IL-26相关性分析；C.患者血清中IL-37与IL-26相关性分析；D.患者盆腔液中IL-37与IL-26相关性分析。

图2 两种体液中IL-26与IL-17及IL-37含量的相关性分析

A.细胞培养上清中IL-17的表达；B.细胞培养上清中IL-23的表达；C.细胞培养上清中IL-10的表达；D.细胞培养上清中TGF-β1的表达。

*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001。

图3 ELISA检测IL-17、IL-23和IL-10、TGF-β1的表达

3 讨论

本研究通过对慢性盆腔炎患者体内IL-26及与Th17细胞和调节T细胞有关的细胞因子的检测，结果显示，和健康对照组相比，慢性盆腔炎患者血清中IL-26增高，且增高程度与该病活动度呈正相关。并且，IL-26的表达促进Th17细胞相关因子IL-17和IL-23的表达水平，抑制调节T细胞有关的细胞因子IL-10和TGF-β的表达。

慢性盆腔炎是女性生殖系统中常见的疾病，是由于生殖器官被病原体感染发生炎症导致。有研究发现，在病人血清和人工培养的外周淋巴细胞中致炎因子IL-17、 TNF-α、 IL-6 和IL-1β抑制因子均增多[10-11]。但是目前为止，引起这些促炎因子产生的因素还不明确，在血清、盆腔穿刺液中，IL-26与IL-17均呈正相关，与IL-26和IL-17呈负相关的IL-37可能在慢性盆腔炎中起到抗炎作用。

鉴于IL-26和 IL-17、IL-23、IL-10、TGF-β在免疫调控中的相互关联性，有研究报道其能够诱导Th17细胞和促炎细胞因子的产生，推测IL-26可能处于炎症反应中的上游[12]。而Th17相关细胞因子在慢性盆腔炎的病理生理中起到重要作用，这种作用在 IL-10 和TGF-β表达降低时更为显著[13]。

IL-26通过诱导IL-17和IL-23的产生，进而诱导炎症细胞的生成，有研究表示TNF-β可以诱导Th17细胞的生成，也有研究表示IL-26不能促进TNF-β的产生，并且TNF-β可以反过来抑制IL-26产生[14]。我们的研究显示，TNF-β和IL-10的低表达提示Th17相关细胞因子分泌增强和调节T细胞相关细胞因子分泌降低。

IL-37是一种抗炎因子，实验发现IL-37与IL-26存在相关性，有文献认为IL-26具有抗炎和致炎双向作用，原始致炎因子和炎症细胞的趋化作用引起IL-26的基因表达和蛋白分泌[15]，本实验也证明IL-26是一种致炎因子。有关外周血中Th17细胞的研究中发现IL-26的基因表达与IL-17A存在相关性[16]，另外，有关类风湿关节炎的研究认为，炎症部位的Th17细胞能产生IL-26，CD4+T记忆细胞可以促进IL-17A的表达和分泌[17]。

本研究发现IL-26对炎症介质还有正调节作用，从而形成局部炎症反应中放大环路，已经有研究发现Th17细胞分泌IL-26受Th17细胞的分化阶段和细胞微环境的影响。之前有研究在克罗恩病病人的病变结肠和牛皮癣患者的病变皮肤中发现IL-26表达，在一个基因相关研究中发现，IL-26基因存在单核苷酸多态性(SNP)是炎性肠病和关节炎的易感因素。IL-26还可以促进PDC分泌INF-α进而激活固有免疫引起细胞和组织损伤，这些发现均提示IL-26在自身免疫中起一定作用[10,12,15]。本实验中，慢性盆腔炎患者体内IL-26过度表达，IL-26促进表皮细胞分泌炎症因子和Th17细胞的生成，说明IL-26在慢性炎性疾病的发病机制中起到了促进作用。

综上所述，我们的研究表明慢性盆腔炎患者体内IL-26表达增强并且与疾病活动性有关，可能位于炎症瀑布式放大反应的上游，IL-26也许可以成为慢性盆腔炎新的治疗靶点。