非小细胞肺癌治疗中EGFR与VEGFR—2的临床意义及相关性分析

顾晶晶 李珂珂

摘要 目的：探讨非小细胞肺癌治疗中EGFR与VEGFR-2的临床意义及相关性。方法：收治非小细胞癌症患者60例，记录其年龄、性别、吸烟史、分化程度、病理类型等信息，通过液相芯片技术分析基因突变及VEGFR-2和EGFR水平。结果：EGFR基因19外显因子突变和患者吸烟史有关，而EGFR基因21外显因子突变和患者的病理类型、分化程度均有关，EGFE基因和VEGFR-2基因表达水平与患者病理类型、分化程度相关，EGFR和VEGFR-2表达水平有显著相关性（P<0.05）。结论：对非小细胞肺癌治疗中EGFR和VEGFR-2的相关性研究，对临床治疗和借鉴有非常重要的意义。

关键词 非小细胞肺癌；EGFR；VEGFR-2；相关性

非小细胞肺癌有其特有的性质与特征，有诸多的相关因素，对其展开的临床治疗也应该从各个相关因素分析研究而攻破，对症下药，才能提高整体的治疗效果以达到预期目标[1]。

资料与方法

2015年1月-2016年6月收治非小细胞肺癌患者60例。所有患者均没有接受过靶向治疗或放化疗等抗癌治疗，有完整的入院诊断资料，无其他合并肿瘤疾病情况。其中男33例，女27例，年龄<60岁者39例，>60岁者21例；16例患者有吸烟史；包括腺癌51例，鳞癌5例，腺鳞癌2例，大细胞癌l例和神经内分泌癌l例；有7例肿瘤细胞低分化患者，35例中分化患者以及18例高分化患者；根据2009年美国癌症联合委员会及国际抗癌联盟联合制定的分期标准判定TNM分期I期39例，Ⅱ期7例，Ⅲ期14例。

研究方法：①提取DNA：采用DNA提取试剂盒，提取组织切片标本基因组DNA，再采用分光广度定量DNA浓度，确保样本的浓度> 20ng/υL且总量>200ng。②聚合酶链式反应预扩增：委托相关单位合成引物，进行聚合酶链式反应预扩增，得到目标基因片段。具体过程为在95℃条件下预变性3min，94℃条件下变性30s，56℃条件下退火30s，72℃条件下反复延伸35次30s，最终保持72℃条件下延伸10min，存放于4℃条件环境下。③消化处理：通过核酸外切酶酶切和碱性磷酸酶水解，将多余引物与核苷酸消除，预防与其他物质结合。加入PCR扩增产物到PCR管内，对应反应参数为37℃条件下持续30min，80℃条件下持续20min，存放4℃环境中[2]。④等位基因特异引物延伸反应：根据特定性序列能特异识别方法对等位基因型进行识别，确保延伸引物能与酶切产物结合并形成延伸产物。具体步骤：96℃条件下预变性2min，打开DNA双链，94℃条件下变陛30s，52℃条件下退火lmin，74℃条件下延伸2min，依次进行40次。⑤杂交反应：混合微球与杂交液混合液30s，确保其充分混合后放入96孔板当中，加入ASPE产物产生杂交反应，再加入SA-PE孵育，确保引物的Tag序列标签和聚苯乙烯微球的Anti-Tag序列互补配对。⑥读取数据：采用Lummex阅读仪读取和分析数据，根据样品中位荧光值确定基因突变的情况。最后还要采用分支-DNA液相芯片法检测组织样品的基因表达水平。

统计学方法：采用SPSS 21.0统计学软件处理分析，建立并录入数据信息到数据库，采用X2检验基因突变与临床因素之间的关系，基因表达关系系数通过R表示，分析与各因素间的相关程度，P<0.05为差异有统计学意义。

结果

EGFR基因、VEGFR-2基因表达水平和患者的关系：ECFE基因和VECFR-2基因表达水平与患者病理类型、分化程度相关（P<0.05），见表l。

EGFR基因和VEGFR-2基因表达水平相关性分析：EGFR和VEGFR-2表达水平有显著相关性（P<0.05），见表2。

讨论

从相关性因素方面来看，有研究结果显示发生EGFR突变在性别和病理类型方面差异均存在统计学意义[3]，有女性突变高于男性的结论，非吸烟者的突变率比吸烟者的概率更高。在本研究顯示的数据为无吸烟史的患者发生基因突变的概率接近35%，而吸烟者仅6%，差距明显，证实两者之间存在相关性（P<0.05）。此外，突变因子还与患者的病理类型及分化程度有关（P<0.05），均在本研究中证实，但却与患者性别无关，这是与其他研究者研究结果不相符的方面，原因可能与统计对象的基因突变亚型相关。

VECF即血管内皮细胞生长因子在肿瘤血管生成过程中发挥重要的调控作用。VECFR-2是受体VEGFR家族五大成员之一，其由激酶插入区受体基因编码，于患者血管内皮细胞与淋巴内皮细胞中存在。不少研究均显示其在介导VEGF信号转导导致的肿瘤血管生成中发挥主导作用，此外还能对血管内皮细胞增殖、诱导血管平滑肌细胞迁移以及血管构建、加速基底膜水解等进行调控。此外，临床还发现靶向药物在其中应用的重要性，为癌症患者的治疗提供了新的方向，将分子靶向药物进行合理的联用或许能为临床带来更好的效果，有所期待。

综上所述，对于肿瘤生长而言，ECFR与VEGF信号通路都有着非常重要的作用，能为其临床治疗提供重要的借鉴价值和意义。

参考文献

[1]肖旺.早期非小细胞肺癌ECFR/KRAS/BRAF突变的初步临床研究[D].南方医科大学，2015.

[2]石丹.非小细胞肺癌EGFR突变与CST-π高表达与临床参数的关系及预后[D].南昌大学，2013.

[3] 白晓燕.Hedgehog信号通路在EGFR-TKI敏感和耐药非小细胞肺癌细胞中的作用机制研究[D].南方医科大学，2013.