犬猫弓形虫病的流行病学调查与防控

许凤娟 杨 荣 张海云 唐艳荣

（北京市朝阳区动物疫病预防控制中心，北京 100018）

弓形虫病是由刚地弓形虫引起的一种人畜共患病，宿主种类十分广泛，人和动物感染率都很高。犬猫弓形虫病真球虫目，弓形虫科，弓形虫属的龚地弓形虫引起的一种原虫病，多数为隐性感染，但也有出现临床症状甚至死亡的。

1 病原体

龚地弓形虫，根据不同发育阶段，其形态各异，滋养体和包囊出现在中间宿主体内，例如犬；裂殖体、配子体和卵囊只出现在终末宿主体内，例如猫。

1.1 滋养体（又称速殖子）

呈弓形、月牙形或香蕉型，一端偏尖，一端偏顿圆，平均大小为长4～7µm，宽2～4µm，经姬姆萨氏液染色或瑞氏染色后，主要见于急性病例的腹水中，常可见到游离的（细胞外的）单个虫体在有核细胞（单核细胞、内皮细胞、淋巴细胞等）内可见到正在进行内双芽增殖的虫体；有时在宿主细胞的细胞浆里，许多滋养体簇集在一个囊内形成“假囊”。

1.2 包囊（又称组织囊）

见于慢性病例的脑、骨骼肌、心肌和视网膜等处。包囊呈卵圆形，有较厚的囊膜，囊中的虫体称为慢殖子，数目可由数十个至数千个；包囊的直径为50～60µm，可在患者体内长期存在，并随虫体的繁殖而逐渐增大，可大至100µm，慢殖子的形态与速殖子形态相似，仅是前者的细胞核的位置稍偏后。

卵囊见于猫粪内，呈圆形或椭圆形，卵壁两层，无色，无微孔。大小为长8～10µm，宽1～14µm，平均为10µm ×12µm。

2 生活史

弓形虫的整个发育过程需要两个宿主；在终末宿主（猫科中的猫属和山猫属）肠内进行球虫型发育，在中间宿主（哺乳类、鸟类）体内进行肠外期发育。

猫吞食了弓形虫的包囊或卵囊，子孢子或速殖子和慢殖子侵入小肠的上皮细胞，进行类似球虫发育的裂殖生殖和配子生殖，最后产生虫卵，随粪便排出体外，在外界适宜条件下，经2～4d，孢子发育完成，形成感染性卵囊（内含两个孢子囊，每个孢子囊内有4个子孢子）。弓形虫也可在猫体内进行弓形虫相发育，即被猫吞食的子孢子、慢殖子偶速殖子有一些可以进入淋巴、血液循环，被带到全身各脏器和组织中，侵入有核细胞，以内出芽增殖进行无性繁殖，最后生成包囊（内含许多滋养体，也称之为假包囊），包囊破裂释放出滋养体。每个滋养体又能侵入新的细胞内重新进行内出芽增殖。弓形虫不仅可以在细胞浆内繁殖，有时也能侵入细胞核内繁殖。经一段时间的繁殖之后，由于宿主产生免疫力，或者其他因素，使其繁殖变慢，一部分滋养体被消灭，一部分滋养体在宿主的脑和骨骼肌等处形成包囊，内含慢殖子，包囊有较强的抵抗力，在宿主体内可存活数年之久。

在外界成熟的孢子化卵囊污染食物和水源而被中间宿主（包括人和多种动物）食入或饮入后释放出的子孢子，和通过口、鼻、咽、呼吸道黏膜、眼结膜和皮肤侵入中间宿主体内的滋养体，均将通过淋巴血液循环侵入有核细胞在胞浆中以内出芽的方式进行繁殖。如果感染的虫株毒力很强，而且宿主又未能产生足够的免疫力，或者还由于其他因素的作用，即可引起弓形虫病的急性发作；反之，如果虫株的毒力弱，宿主又能很快产生免疫力，则弓形虫的繁殖受阻，疾病发作得较缓慢，或者成为无症状的隐性感染，这样，存留的虫体就会在宿主的一些脏器组织（尤其是脑组织）中形成包囊型虫体。

犬吞食了弓形虫感染性卵囊或包囊后，子孢子或慢殖子在其体内进行弓形虫相发育，最后形成包囊，存留在犬的一些脏器和组织中。

3 症状

犬和猫患弓形虫病的症状，大都与中枢神经系统、视觉、呼吸、胃肠系统有关。据观察，犬的症状类似犬瘟热，包括发热，厌食，精神委顿，呼吸困难，咳嗽，贫血，下痢，妊娠早产或流产，运动共济失调等。

猫的症状包括发热黄疸，呼吸急促，咳嗽，贫血，运动失调，后肢麻痹，肠梗阻等。也有出现脑炎症状和早产或流产的病例。

4 流行病学调查

弓形虫病的临床表现、病理变化和流行病学虽有一定的特点，但仍不足以作为诊断的依据，而必须在实验室诊断中查出病原体或特异性抗原抗体，方可做出结论。目前笔者在临床对于弓形虫的诊断有以下四个方面进行综合判断：

4.1 间接血凝试验材料与方法

4.1.1 试剂及仪器：弓形虫抗体的间接血凝检测试剂：IHA冻干抗原（试剂批号：20111108），稀释液（试剂批号：20111108），阳性对照血清（试剂批号：20110421），阴性对照血清（试剂批号：20110911），均购自中科院兰州兽医研究所。96（12×8）孔血凝反应板，振荡器，离心机等。

4.1.2 间接血凝试验方法：按照兰州兽医研究所提供的弓形虫抗体正向间接血凝试验操作说明进行。a.血清检测法反应在96 孔V型微量有机玻璃板上进行，每块血凝板设阴性血清、阳性血清、空白和稀释液对照孔。b.加稀释液：每孔加75µl。c.加样品：阳性、阴性对照血清 第1孔加相应血清25µl。d.稀释：阴、阳性对照血清稀释至第7孔，样品稀释至第3孔。阴、阳性对照血清的第8孔和样品的第4孔为稀释液对照。e.加抗原：冻干抗原，按说明书要求稀释，1500 r/ min～2 000 r/ min 离心5～10 min，弃去上清液，加等量稀释液摇匀，置4℃冰箱24 h 后使用，每孔加25µl，加完后将反应板置于微量振荡器上振荡1～2 min，盖上一块与反应板大小相等的玻璃板以防灰尘落入和水分蒸发，置37℃下作用3 h 后，判定结果。f.结果判定方法：结果判定：在阳性对照血清滴度不低于1：1 024（第5 孔）；阴性对照血清除第1 孔允许存在前滞现象“+”外，其余各孔均为“－”；稀释液对照为“－”的前提下，对被检血清进行判定。血清抗体效价达到或超过1：64者判为阳性，“++”为阳性终点。效价低于1：64 者判为阴性。

2011年对北京市朝阳区动物疫病预防控制中心对朝阳区范围内50家宠物医院（诊所）弓形虫病检测结果见表1、表2

表1 不同季节猫血清弓形虫lgG阳性率

表2 不同季节犬血清弓形虫lgG阳性率

4.2 胶体金快速检测技术

4.2.1 检测设备：弓形虫（TOX-IgG）金标检测卡；弓形虫（TOX-IgM）金标检测卡

4.2.2 实验过程：加入150µl血清样品于加样孔中；15min内于光线明亮处观察结果。血清样品应注意以下方面：遇热失活的样品可导致溶血和蛋白变性，因此应该避免；浑浊的血清应在大约1000ref的离心机上离心15min；样品如需储存，需去掉红细胞，在2℃～8℃储存72h，如实验前将检测板和样品平衡至室温。

4.2.3 结果观察：

有效：在对照区（C）出现一条色线，表明实验有效，且操作正常。

无效：对照区（C）没有线条出现，无论试验区（T）线是否显示红色色带，此检测均无效，需要重新做一遍。

阳性：对照区（C），在对照区出现一条色线，在试验区（T），出现一条色线表明试验呈阳性。

阴性：对照区（C），在对照区出现一条色线，在试验区（T），没有出现色线表明试验呈阴性。

表4 抗体检测结果科学判读

IgM IgG 说明阴性 阳性 过去的感染阴性 阴性 没有感染或刚刚被感染阳性 阴性 早期感染或者先天性感染阳性 阳性 目前正在感染，慢性感染，再次感染，或感染后数月可能IgM阳性

4.3 V8实时快速荧光PCR检测体系

V8实时荧光PCR检测体系”是由北京世纪元亨公司研制，可用于多种人畜共患病的快速检测，如犬猫流感、犬棘球蚴病、布鲁氏菌病、弓形体病、钩端螺旋体病等。

该技术根据宠物临床检测“病例零散、临时加样、检测项目交叉繁杂，结果及时”等特点，具有先进的个体设计1拖8专利设计，可同时分别控制8个检测孔，每个检测孔自带独立微电脑运行模块，随时添加样品，检测不同疾病。同时，检测试剂单份装配、操作简便、灵敏度高、特异性强、抗PCR污染能力强、另一方面，该专利技术着眼于提高反应的升温降温速度，提高仪器对样品的识别能力。检测时间短（仅30min，而普通荧光PCR检测需要60～90min），更加符合宠物临床诊断的时限要求，便于基层诊疗机构及实验室操作及使用，使该技术有更广的应用范围

4.4 直接检查法

对其中状态较差的23只流浪猫实施安乐死，采集直肠内粪便及心、肝、脾、肺、肾、脑、舌等用于虫体分离，饱和蔗糖漂浮法检测粪便中弓形虫的卵囊。胃蛋白酶消化法消化猫的心、脑、舌，并将消化的组织腹腔注射给小鼠，采取颌下淋巴结、肺脏、肝脏做涂片检查。自然干燥后，甲醇固定。姬姆萨氏染色，置显微镜1000倍油镜下镜检，可发现弓形虫虫体。

表5 以上四种检测方法优缺点对比

5 治疗

在临床治疗方面，抗弓形虫滋养体药物的疗效尚满意，但在获得性弓形虫病的治疗中，经常出现复发。

5.1 对症治疗

根据临床症状来采取的相应治疗措施，例如患病动物出现发热时，应作退热处理，必要时给予退热药；不食者，可给予静脉补液，以保体液平衡；颅内压增高者，可给予20%甘露醇，进行脱水治疗；对于呼吸困难者可给予吸氧或者呼吸中枢兴奋剂来处理等等。

5.2 抗弓形虫治疗

目前公认有效的抗弓形虫病药物有乙胺嘧啶、磺胺嘧啶（或黄安吡嗪、磺胺二甲氧嘧啶）和螺旋霉素、氯林可霉素等。弓形虫病不管是先天性、获得性的、急性、亚急性和慢性急性发作的均需治疗，应注意在发病初期及时用药，如用药较晚，虽可使临床症状消失，但不能抑制虫体进入组织形成包囊，结果使病畜成为带虫者。

6 公共卫生

6.1 加大宣传力度，普及动物疫病的防控知识

通过各种媒介大力宣传动物疫病相关的防控方法及正确的饲养管理技术，提高动物饲养者的防疫意识，普及动物传染病的预防知识，动物的健康状况与主人的饲养方法有直接关系，如是否定期进行体检、环境消毒、是否饲喂健康食品，由于动物主人并不知道应如何合理地饲养宠物，导致宠物经常患病，通过宣传推广正确的饲养方法，倡导以预防为主，控制动物疫病的发生。

6.2 尽快研制和推广猫用预防弓形虫病的疫苗

弓形虫病在世界各地发病率都比较高，大多在10%～70%之间，防控形势严峻，但从太平洋岛屿调查来看，在无猫岛上，人和动物均没有发现弓形虫，这足以证明猫在传播本病的作用。因此猫就成为防止弓形虫病工作中的重要管制对象。

目前在国际上有弓形虫疫苗，但未被批准进入中国境内销售，此疫苗给猫注射之后，只能阻止猫体内的弓形虫孢子化，并不能保护猫不感染弓形虫。

我国并没有预防猫弓形虫病符合标准的疫苗，使猫弓形虫病的预防及治疗遇到了一定的困难，生物制品科研单位与兽药审核单位配合应尽早研制出符合标准的高效的预防猫弓形虫病疫苗，以满足广大动物诊疗单位的需求及更好地控制猫弓形虫病的发生。

6.3 养成良好的饮食习惯

弓形虫病的最主要传染源首先是人吃了未煮熟的肉，特别是猪、羊肉等。几乎所有哺乳动物和鸟类，如鼠类、猪、羊、牛、家兔、狗和鸡、鸭、鹅等都可以传染弓形虫，而且感染率很高。人的传染来源主要来自于这些动物的肉类，如火锅温度不够或涮7成熟，煎牛排保留一半生等，肉中的弓形虫包囊没有被杀死（加热到71℃包囊即可死亡），就有传染给人的危险，家中生肉或切肉案板的污染同样可以传染给人，污染的羊和牛奶也可以传染。我国人口的弓形虫感染率较低，可能与中国人喜欢熟食肉类的饮食习惯有关。

另外，狗狗也可以传染弓形虫，但是它们的粪便和排泄物都没有传染性，如果不吃狗肉就不会传染，所以养狗的宠主们不用担心会感染。

6.4 提高自我防护意识，不与宠物有过分亲密的接触

与犬猫保持一定距离，不过分亲热，接触犬、猫咪后和饭前勤洗手，与犬猫玩耍时避免被其抓伤、咬伤。孕妇应远离犬猫，有资料显示，异常妊娠的孕妇、畸形儿、弱智儿等的弓形虫感染率显著高于正常妊娠的孕妇及正常儿，不孕症妇女中弓形虫感染率有逐年上升趋势。最近几年，家庭饲养宠物越来越多，使育龄妇女感染弓形虫的机会增加，必须定期对孕妇作弓形虫常规检查。

6.5 养成良好的生活方式，减少弓形虫传播

6.5.1 猫粪传染：感染的猫粪里有弓形虫的囊合子，人接触这种猫粪可以传染。猫主要通过感染的猫、食用被感染的而且未经加工的生肉、捕食老鼠和鸟类获得弓形虫感染。在室内圈养，不吃活物的猫不会被传染。猫感染包囊后经过2～7d开始由粪便排出囊合子，喂入卵囊后，经21～41d排出囊合子，食入滋养体后，经7～10d排出囊合子，粪便排出囊合子的时间不长，只有10～20d，高峰期是5～8d，1g粪便中有数百万到数千万个卵囊。囊合子需要在外界发育1～2d或更长时间，才可以形成孢子化卵囊，才具有传染性，所以要每天清除猫砂或猫粪，猫咬伤不会传染弓形虫病。孢子化卵囊对外界环境有很强的抵抗力，在常温下，可保持感染力1～1.5年，实验中要注意避免污染和自身感染。加热50℃、30min；55℃、15min；70℃、2min或者80℃、1min均可杀死卵囊的孢子。

6.5.2 土壤污染和昆虫机械传染：囊合子抵抗力强，在外界环境——土壤、水和草地的生存时间很长，在潮湿的土壤里可活数月乃至数年。苍蝇和蟑螂可沾染囊合子，机械携带。这些都可以造成传染。因此尽量不要让猫外出，遛狗时，需要牵犬链，避免其在草地乱闻乱舔而感染。

6.5.3 做好孕前检查：先天性感染：最后也是最重要的一种，孕妇在怀孕期间发生感染，可以通过胎盘传染给胎儿，如果在怀孕前已经感染过，就不再有传染胎儿的危险。因此，在备孕期间，做好弓形虫检测，怀孕期间将上述问题排除后，可以避免感染弓形虫。