热休克蛋白70在肾癌中的表达及临床意义

黄春梅 卢童 周治军 徐康 龚娟

肾癌(renal cell tumors, RCC)是肾脏最常见的实质性肿瘤，其中肾透明细胞癌最为多见，据统计其发病率每年约增长2%～4%[1-3]。目前，外科手术(肾癌根治性切除或保留肾单位的肾部分切除)仍然是RCC最常用的治疗手段。但是，RCC的发生和发展表现非常多样化，不同患者的预后差异很大，由于缺乏预测患者预后的方法，给临床工作中为患者制定个体化治疗方案带来诸多困难。因此，找到一种适用于评估RCC预后的生物学指标显得非常重要。

热休克蛋白70(heat shock protein 70, HSP70)是一种钙结合蛋白，在细胞质功能蛋白的折叠、转运和降解中发挥着重要作用。有研究表明，HSP70在肿瘤组织中的高表达往往提示此类肿瘤具有更强的增殖能力和侵袭性，可作为肿瘤预后判断的指标[4-5]。本研究中，我们采用免疫组化方法对肾透明细胞癌组织中HSP70的表达水平进行了检测，并结合患者的临床进展情况初步探讨HSP70在判断RCC患者预后中的作用。

对象与方法

一、研究对象

选取天门市第一人民医院2011年5月至2012年5月期间收治的51例RCC患者手术标本，其中男39例，女12例；平均年龄(66.5±7.1)岁，临床分期均为Ⅰ～Ⅱ期(AJCC分期)。所有患者均接受手术治疗切除肿瘤病灶(肾癌根治或肾部分切除)，术后病检均确诊为肾透明细胞癌，其中Fuhrman分级Ⅰ～Ⅱ级17例，Ⅲ～Ⅳ级34例，术后均接受了规范的免疫治疗(乌苯美司30 mg/次，每周2～3次，使用10个月；或重组人白细胞介素-2 50万IU皮下注射，每周2次，共4周)。同时选取5例癌旁组织作为免疫组化对照组。

二、免疫组化检测

采用SABC法对肿瘤标本进行免疫组化检测，所用标本经固定、包埋、切片后，经脱蜡入水并阻断内源性过氧化物酶，随后微波处理进行抗原修复。所有切片经兔抗人HSP70抗体(CST公司，美国)孵育过夜(1∶1 000)，再经洗脱处理后，使用SABC试剂盒(博士德公司，武汉)按二抗孵育流程处理后显色，并在显微镜下观察HSP70表达情况，HSP70主要表达于细胞质，每张切片随机选取5个视野，以高倍镜下呈中度到深度棕黄显色，并且此类细胞在视野中超过25%定为HSP70高表达，其余定为低表达[6]。

三、随访

所有患者经过5～60个月随访，每2～3个月复查泌尿系及肝脏B超，每6个月复查胸片及腹部CT，观察并记录患者无进展生存时间(progress free survival, PFS)，然后统计患者的无进展生存率。其中PFS为患者以接受手术时间为起点，直至发生肿瘤进展(如复发、转移、死亡等)的时间间隔。

四、统计学方法

统计软件采用SPSS 19.0，免疫组化表达率的比较采用卡方检验，患者无进展生存率的比较采用Kaplan-Meier生存分析法进行比较，以P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

一、HSP70在RCC中的表达及其与病理分级的关系

在51例RCC标本中，有30例HSP70呈高表达，21例呈低表达，高表达率为58.8%。其中Fuhrman Ⅰ～Ⅱ级RCC组织中有6例呈高表达(35.3%)，Fuhrman Ⅲ～Ⅳ级RCC组织中有24例呈高表达(70.6%)，两组间高表达率差异有统计学意义(P=0.016，表1)，而所有癌旁组织中HSP70均为低表达(图1)。

表1 HSP70表达与RCC病理分级的关系[例(%)]

二、RCC中HSP70表达水平与患者无进展生存率的关系

经过5～60个月随访，所有患者的中位PFS为35个月，至随访结束时，HSP70高表达患者的无进展生存率为22.6%，HSP70低表达患者的无进展生存率为55.0%，两组患者的无进展生存率差异有统计学意义(P=0.004，图2)。

A：部分RCC组织中呈低表达；B：多数RCC组织中呈高表达；C：在所有对照组癌旁组织中呈低表达

图1 HSP70在RCC组织及癌旁组织中的表达(SABC法，×100)

图2 HSP70高表达与低表达患者无进展生存率对比

讨 论

当前，RCC的首选治疗是手术切除病灶，由于肾透明细胞癌对于放疗及化疗并不敏感，因此术后多采用免疫治疗。但是，RCC的预后在不同的患者表现差异很大，在临床工作中缺乏合适的预后判断指标，为制定合理的治疗方案带来许多困难，本研究中我们以HSP70为指标初步探讨其与肾透明细胞癌预后的关系。

HSP70是一类主要存在于胞质内的可溶性蛋白，是一类结构高度保守的蛋白质分子，基于表达情况可分为结构型HSP70和应激型HSP70，细胞内所表达的主要为结构型HSP70，亦称为葡萄糖调节蛋白78[7]。HSP70的N端结构域具有ATP酶活性，C端的疏水结构可结合多种新合成肽链，可帮助蛋白分子完成折叠及转运[8]。HSP70在细胞内发挥着分子伴侣、抗氧化、抗细胞凋亡等重要作用，在很多肿瘤细胞中呈高表达，并常常对肿瘤的进展和增殖起促进作用[9-10]。

本研究中，我们首先采用免疫组化染色对肾透明细胞癌组织中HSP70的表达进行了检测，结果显示，多数RCC组织中HSP70呈高表达，而且，较高病理分级的RCC组织中HSP70的高表达率(70.6%)明显高于较低病理分级的RCC组织(35.3%)，表明肿瘤细胞的分化越差、恶性度越高，其HSP70表达越强。同时，我们研究了HSP70表达水平与患者无进展生存率之间的关系，结果显示，HSP70高表达的患者，其无进展生存率明显低于HSP70低表达患者。上述结果说明，HSP70高表达提示患者细胞分化程度较低，而其预后则较差，因此，HSP70可以作为判断肾透明细胞癌预后的一项生物指标。

综上所述，HSP70与RCC的预后密切相关，且具备成为RCC治疗靶点潜在价值，可在今后的研究中进一步加以探索。