BCL6共抑制因子样蛋白1在老年非小细胞肺癌患者组织中表达及其对远期预后的影响

朱晓菡 田 杰

(郑州铁路职业技术学院，河南 郑州 451460)

非小细胞肺癌(NSCLC)是常见的恶性肿瘤之一，占肺癌总数的80%～85%〔1〕。流行病学显示，约75%的NSCLC老年患者发现时已处于中晚期，5年生存率很低〔2〕。上皮钙黏素属于钙黏素家族，可介导同型细胞黏附。研究表明〔3〕，上皮钙黏素表达的异常可能导致肿瘤细胞上皮表型缺失。BCL6共抑制因子样蛋白(BCORL)1是一种转录共抑制因子。BCORL1可以与C-末端结合蛋白协同或者结合启动子区域特定位点抑制上皮钙黏素基因转录〔4〕。本研究探讨BCORL1在NSCLC组织中表达及其对老年患者远期预后的影响。

1 资料与方法

1.1一般资料 79例手术后NSCLC癌组织标本及其癌旁组织标本，收集时间2010年1月至2014年3月。年龄60～76岁，平均(66.4±5.5)岁，分化程度：高分化13例、中分化24例、低分化42例。

1.2纳入、排除标准 纳入标准：①实验标本均来源于手术切除标本，术后实施病理学检测确诊为肺癌；②手术治疗前无免疫治疗、放射治疗及化疗史；③年龄<79岁；④本研究获得医学伦理委员会的批准。排除标准：①转移性肺癌；②放化疗治疗史；③临床资料缺失。

1.3检测方法 采用免疫组化SP法检测经过石蜡包埋的组织切片中BCORL1蛋白表达，将临床上收集的术后NSCLC癌组织及其癌旁组织标本，二甲苯脱蜡、梯度乙醇水化处理，使用10 mmol/L 柠檬酸盐缓冲液(pH6.5)中孵育20 min，温度为98℃进行抗原修复。冷却至室温后，使用3%H2O2封闭内源性过氧化物酶，3%牛血清蛋白封闭1 h，将1∶100稀释的兔抗人BCORL1多克隆抗体加入(武汉艾美捷科技有限公司)，4℃过夜。冲洗后滴加生物素标记的驴抗兔IgG工作液(武汉艾美捷科技有限公司)，室温孵育1 h，滴加辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素工作液，37℃孵育1 h。二氨基联苯胺(DAB)显色处理3～10 min，终止反应,双蒸水充分洗涤。苏木素复染1 min，脱色后显微镜下观察。

1.4结果判断 免疫染色后结果判定：BCORL1蛋白主要定位在细胞质中，阳性染色的细胞质中可见黄色、褐色的颗粒，①根据细胞质染色程度进行计分，无色0分、淡黄色1分、棕黄色2分、深褐色3分；②在一个视野内根据阳性染色细胞所占比例进行计分：≤10%(1分)、 11%～50%(2分)、 51%～75%(3分)、如果>75%(4分)，取染色程度积分与染色阳性的细胞比例积分进行乘积计算，总分<3分(阴性)、总分≥3分(阳性)。总分<3分则判断为“-”；为3～5分则判断为“+”；为6～9分则判断为“”；>9分则判断为“”。

1.5统计学方法 采用SPSS16.0统计软件进行χ2检验和多因素分析。

2 结 果

2.1两类组织标本BCORL1蛋白表达率比较 癌组织中BCORL1蛋白阳性表达率(70.89%，+18例、31例、7例)明显高于癌旁组织(25.32%，+19例、1例、0例；χ2=32.858，P<0.001)。

2.2癌组织标本中BCORL1蛋白阳性表达率与老年患者临床病理特征的关系 BCORL1蛋白阳性表达与NSCLC老年患者的年龄、性别、病灶直径、病理学类型无关(P>0.05)；与TNM分期、分化程度、淋巴结转移具有相关性(P<0.05)；见表1。

2.3随访情况及多因素分析 12～36个月随访观察，BCORL1蛋白阳性表达者3年生存率〔21.42%(14/56)〕显著低于阴性表达者〔47.83%(11/23)；χ2=5.505，P=0.019〕。采用Cox比例风险回归模型进行分析，结果显示分化程度减低、淋巴结转移、BCORL1蛋白阳性表达是NSCLC老年患者不良预后的独立危险因素(P<0.05)；见表2。

表1 癌组织标本中BCORL1蛋白阳性表达率与老年患者临床病理特征的关系〔n(%)〕

表2 Cox多因素分析结果

3 讨 论

肺癌根据病理学类型大体分为NSCLC和小细胞肺癌(SCLC)，两者分别约占肺癌发病总数的80%和20%〔5〕。临床上，由于NSCLC确诊时多数老年患者已发展为晚期或局部晚期，不适合手术切除，此时需进行全身的化疗和放疗。

转移是肿瘤恶化的主要原因，肿瘤转移是一个多种基因结构和功能异常参与的多步骤复杂过程〔6〕。上皮钙黏素属于钙黏素家族，主要分布于非神经上皮组织。上皮钙黏素可介导同型细胞黏附，参与胚胎发育及正常组织中上皮细胞层形成和维持〔7〕。Cui等〔8〕研究表明，上皮钙黏素表达异常可能是肿瘤细胞上皮侵袭、转移潜能增加的原因。Liu等〔9〕研究显示，上皮钙黏素还能抑制肿瘤细胞产生基质金属蛋白酶，从而抑制肿瘤细胞中各种蛋白降解。上皮钙黏素在肿瘤发生、发展过程中可能具有多方面作用。Eberlein等〔10〕研究发现，在NSCLC中，上皮钙黏素启动子甲基化状态与其基因表达调控相关。

肿瘤发展过程涉及多种基因功能的概念，上游基因可能是下游基因改变的原因。BCORL1是近年来受到关注的一种转录共抑制因子，具有抑制上皮钙黏素基因转录的作用。BCORL1通过结合启动子区域特定位点抑制 E-cadherin基因转录，另外，BCORL1也可以与 C端结合蛋白(CtBP)协同作用〔11〕。研究显示，BCORL1在正常组织中呈现低表达或表达缺失，仅仅在睾丸和前列腺组织中呈现高表达〔12〕。BCORL1在胃癌组织中具有较高表达，且与肿瘤恶化程度呈负相关〔13〕。此外，在肝细胞癌中BCORL1表达水平明显高于癌旁组织〔14，15〕。免疫组化法具有精确定位和定性的特点，常用于肿瘤学的检测。本研究提示BCORL1蛋白在肺癌的发生、发展中可能起重要作用。初步推测BCORL1在肺癌中可能是一个癌基因，能通过转录抑制上皮钙黏素发挥促癌功能，但具体功能及精确的分子机制有待研究。本研究说明BCORL1与分化程度、淋巴结是否转移协同影响NSCLC患者预后，BCORL1可能作为NSCLC 预后判断的分子指标，并可能成为其治疗的潜在靶点。