亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性对老年冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血浆同型半胱氨酸水平的影响

房大广

(承德医学院附属医院心脏外科，河北 石家庄 067000)

冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)，主要危险因素有性别、年龄、肥胖、饮食习惯、生活环境、血脂代谢异常、血压升高、糖尿病、遗传因素等，近年来，大量研究发现高同型半胱氨酸(Hcy)血症也是冠心病的独立危险因素〔1,2〕。体内Hcy水平受多种因素影响亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性阻碍Hcy的代谢过程，使体内Hcy水平升高〔3,4〕，补充叶酸可以安全有效地降低血浆Hcy水平〔5〕。本文对MTHFR基因多态性与冠心病及血浆Hcy水平的关系及叶酸治疗对血浆Hcy水平的影响进行研究。

1 资料与方法

1.1临床资料 选择徐州市中心医院2015年1月至2016年12月老年冠心病患者200例作为冠心病组，年龄和性别与冠心病组匹配的老年健康体检者200例作为健康对照组，冠心病组年龄(67.24±5.46)岁，男104例，女96例；对照组年龄(67.18±5.73)岁，男101例，女99例。冠心病组患者随机分为叶酸治疗组和常规治疗组，每组100例。所有研究对象签署知情同意书。纳入标准：所有患者同意参与研究，资料完整；健康对照组血液生化检查、心脏超声、心电图检查结果均正常，无冠心病证据。排除标准：近期有糖皮质激素应用史，近期有抗生素及免疫抑制剂应用史，患严重肝肾疾病者，患恶性肿瘤者，患内分泌代谢性疾病者，患感染性疾病者，患结缔组织疾病者，患免疫系统疾病者，拒绝参与研究者。试剂和仪器：MTHFR基因检测试剂盒和血液基因组DNA提取试剂盒(美国Sigma公司)，MTHFR基因型分析软件(Baio公司)。

1.2研究方法 冠心病组患者入院后给予硝酸酯类、抗凝、β受体阻滞剂、抗血小板及抗凝等药物进行常规治疗，其中叶酸治疗组患者在常规治疗的基础上给予叶酸(5 mg/d，口服)，共治疗8 w。

1.3检测方法 冠心病患者入院第二天抽取清晨空腹血进行MTHFR基因型测定和血浆Hcy水平测定，治疗8 w后抽取清晨空腹血进行血浆Hcy测定；健康对照组体检时抽取清晨空腹血进行MTHFR基因型测定和血浆Hcy水平测定。根据血液DNA提取试剂盒说明书提取血液DNA，根据MTHFR基因检测试剂盒采用 PCR芯片杂交法测定MTHFR基因型，采用MTHFR基因型分析软件进行数据分析。采用荧光偏振法测定血浆Hcy水平。

1.4统计学方法 采用SPSS20.0软件，率的比较采用χ2检验，两组均数比较采用t检验，多组均数比较采用方差分析，组内两两比较采用LSD检验。

2 结 果

2.1MTHFR基因型 MTHFR基因型酶切后电泳结果显示三种结果：CC基因型、CT基因型、TT基因型。CC基因型为野生纯合子型，为201 bp单一条带；CT基因型为突变杂合子基因型，为一个177 bp条带和一个201 bp条带；TT基因型为突变型纯合子基因型，为177 bp条带。

2.2冠心病组和健康对照组MTHFR基因多态性分布 冠心病组T等位基因、C等位基因分布和健康对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)，冠心病组T等位基因比例高于健康对照组；冠心病组TT、CT和CC基因型和健康对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)，冠心病组TT基因型比例高于对照组。见表1。

表1 冠心病组和健康对照组MTHFR等位基因和基因型分布〔n(%),n=200〕

2.3冠心病组和健康对照组血浆Hcy水平比较 冠心病组患者血浆Hcy水平〔(15.24±2.15)μmol/L〕显著高于健康对照组〔(9.32±1.24)μmol/L，t=34.254,P=0.000〕。

2.4冠心病患者中不同性别血浆Hcy水平比较 冠心病患者中男性血浆Hcy水平〔(17.31±2.24)μmol/L〕显著高于女性〔(14.02±2.13)μmol/L，t=23.154,P=0.000〕。

2.5冠心病患者中高血压患者和非高血压患者血浆Hcy水平比较 冠心病患者高血压组血浆Hcy水平〔(17.28±2.30)μmol/L〕显著高于非高血压组〔(13.54±1.21)μmol/L，t=21.647,P=0.000〕。

2.6冠心病组中不同MTHFR基因型患者血浆Hcy水平比较 冠心病组不同MTHFR基因型患者血浆Hcy水平比较差异有统计学意义(P<0.05)，其中TT基因型血浆Hcy水平〔(19.24±7.02)μmol/L〕显著高于CT基因型〔(14.93±6.64)μmol/L〕和CC基因型〔(12.54±6.02)μmol/L，P<0.05〕，CT基因型血浆Hcy水平显著高于CC基因型(P<0.05)。

2.7叶酸治疗前后不同MTHFR基因型血浆Hcy水平变化情况 除叶酸治疗组TT基因型治疗后血浆Hcy水平和治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05)以外，其余冠心病各亚组治疗后血浆Hcy水平均较治疗前略下降，但差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 叶酸治疗前后不同MTHFR基因型血浆Hcy水平变化

3 讨 论

Hcy是半胱氨酸和蛋氨酸代谢过程的中间产物，为含硫基氨基酸，在体内的存在形式有三种，绝大部分通过二硫键和血浆白蛋白结合，少数以Hcy-半胱氨酸二硫化合物或自身二聚体形式存在，极少数以游离巯基形式存在。当Hcy代谢过程受到阻碍，其生成和代谢平衡状态被打破，体内的Hcy聚集过多，可形成高Hcy血症。高Hcy血症是动脉血管疾病的危险因素，Hcy水平与冠状动脉病变严重程度有关，是冠心病的独立危险因素〔6～8〕。血浆Hcy水平受多种酶、酶作用底物、辅助因子的调节，影响血浆Hcy代谢的因素很多，年龄、性别、甲状腺功能低下等疾病、叶酸等维生素摄入不足等营养因素、遗传因素等是影响Hcy代谢的常见因素，血浆Hcy水平升高损伤血管内皮细胞，使血管平滑肌细胞异常增生，体内的纤溶和凝血平衡状态被打破，脂质代谢障碍，从而使心血管疾病的发生风险增加。MTHFR遗传缺陷也阻碍Hcy代谢过程，升高血浆Hcy水平〔9，10〕。MTHFR基因型分为TT、CT、CC三种基因型，MTHFR基因多态性使MTHFR活性下降，TT和CT基因型活性下降，TT基因型的活性最低，最容易引起高Hcy血症的形成。MTHFR基因多态性引起的高Hcy水平使机体处于血栓前状态，从而增加冠心病的发生风险〔11，12〕。本研究发现，老年冠心病患者血浆Hcy水平升高，血浆Hcy水平和性别及高血压有关，MTHFR基因多态性和老年冠心病及其血浆Hcy水平有关，老年冠心病患者TT基因型比例高，TT基因型冠心病患者血浆Hcy水平高于其他基因型，考虑MTHFR基因多态性可能通过升高血浆Hcy水平，从而增加冠心病的发生风险。

叶酸是降低血浆Hcy水平最有效、安全、便宜的方法，在脑梗死患者的治疗中被普遍应用。食用叶酸比较安全，叶酸可以预防结直肠癌，减少冠心病的发生风险，减少唇腭裂畸形、神经管畸形、痴呆等的发病率，减少妊娠期并发症，叶酸对血浆Hcy水平也有重要影响作用，可降低血浆Hcy水平〔13～15〕。本研究表明叶酸可以降低老年冠心病患者血浆Hcy水平，其中对TT基因型血浆Hcy水平的作用最显著。

综上所述，高Hcy水平是冠心病的危险因素，MTHFR基因型影响Hcy水平，TT基因型血浆Hcy水平最高，叶酸能够降低血浆Hcy水平，其中TT基因型对叶酸的治疗效果最敏感。