气滞胃痛颗粒中柴胡的质量控制方法研究

程似锦 ，李 恒 ，晏菊姣 △

（1．长江职业学院生物医药学院，湖北 武汉 430064； 2．武汉药品医疗器械检验所，湖北 武汉 430075）

气滞胃痛颗粒为柴胡、延胡索(炙)、枳壳、香附(炙)、白芍、炙甘草6味药材组方的中药制剂，主要用于治疗胃炎、反流性胃炎、肠易激综合征等[1－2]。方中柴胡功用为调达肝气、舒理气滞，是本制剂中治“气滞”的主药[2]，但现行质量标准中没有对柴胡的控制指标。本研究中参照文献[3－7]，选择柴胡对照药材、柴胡皂苷a、柴胡皂苷b2、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d对照品为指标，对柴胡建立薄层色谱或高效液相色谱鉴别方法，并探讨柴胡皂苷b2作为表征方中柴胡指标的可能性。

1 仪器与试药

1．1 仪器

Camag TLC Visualizer薄层色谱照相仪，U3000型液相色谱仪（DAD检测器，美国Dionex公司）；BP211D型电子 天 平 （赛 多 利 斯 公司，感 量 为 0．1 ／0．01 mg）；SK250LHC型超声清洗仪；DK－S26型电热恒温水浴锅；Simplicity超纯水机；硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂分厂）。

1．2 试药

气滞胃痛颗粒（有糖型或无糖型，辽宁本溪三药有限公司）；柴胡皂苷a对照品（批号为110777－201108），柴胡皂苷d对照品（批号为110778－200404），柴胡对照药材（批号为120992－201108），均购于中国食品药品检定研究院；柴胡皂苷b2对照品（批号为51／120507），柴胡皂苷c对照品（批号为51／120507）均购于Shanghai Standard Biotech Co，Ltd．。乙腈为色谱纯；甲醇，正丁醇，氢氧化钠，氨水，对二甲氨基苯甲醛，硫酸均为分析纯；水为超纯水。

2 方法与结果

2．1 溶液制备

供试品溶液：取气滞胃痛颗粒 15 g或 7 g（无糖型），研细，加甲醇 50 mL，超声处理30 min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20 mL，合并正丁醇液，以2%氢氧化钠溶液洗涤2次，每次30 mL，弃去碱液，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20 mL，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇5 mL使溶解，即得。

阴性对照品溶液:取缺柴胡药材的其他药味，按处方比例制成缺柴胡阴性样品，再按供试品溶液方法制备，即得。

对照品溶液：取柴胡皂苷a、柴胡皂苷b2、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的混合溶液，即得。

对照药材溶液：取柴胡对照药材0．5 g，加水煎煮1 h，滤过，滤液浓缩至约20 mL，自“用水饱和的正丁醇振摇提取3次”起同供试品溶液方法制备，即得对照药材溶液Ⅰ。照2015年版《中国药典(一部)》柴胡项下含量测定方法[8]，取柴胡对照药材 0．5 g，置具塞锥形瓶中，加入含5%浓氨试液的甲醇溶液25 mL，密塞，30℃水温超声处理（功率为200 W，频率为40 kHz）30 min，滤过，用甲醇20 mL分2次洗涤容器及药渣，洗液与滤过合并，回收溶剂至干。残渣加甲醇溶解，转移至5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得对照药材溶液Ⅱ。

2．2 薄层色谱法

按 2015年版《中国药典(四部)》通则[9]试验，吸取上述除对照药材溶液Ⅱ的4种溶液各2～10 μL，分别点于同一硅胶薄层板上，以乙酸乙酯－乙醇－水（8∶2∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，在60℃加热至斑点显色清晰，分别置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品溶液色谱中，在与柴胡皂苷b2对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点或荧光斑点，在与柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d对照品溶液色谱相应位置上未显相同颜色的斑点或荧光斑点，阴性对照品（缺柴胡）溶液色谱相应位置无干扰，分离度良好。见图1。

2．3 验证试验

2．3．1 薄层色谱验证

分别吸取供试品溶液、对照品溶液、对照药材溶液Ⅰ和Ⅱ4种溶液，照2．2项下方法试验。对照药材溶液Ⅱ色谱可检出柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d斑点或荧光斑点，但未见柴胡皂苷b2斑点或荧光斑点；对照药材溶液Ⅰ色谱柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d斑点颜色变淡，同时新出现了柴胡皂苷b2的斑点。见图2。

2．3．2 高效液相色谱验证

溶液制备：按本品水煎煮提取工艺模拟投料的自制小样，照2．1项下方法制备供试品溶液。

图1 鉴别薄层色谱图

图2 验证薄层色谱图

色谱条件及与系统适用性试验：色谱柱为戴安Acclaim 120 C18柱（250 mm × 4．6 mm，5 μm）；流动相：乙腈(A)－水(B)，梯度洗脱(表1)；检测波长为210 nm；柱温为30℃；进样量为10 μL。同时，采用DAD进行检测。理论板数按柴胡皂苷a峰计算应不低于10 000。

表1 流动相梯度洗脱表

测定与结果：照2015年版《中国药典(四部)》通则中高效液相色谱法[8]测定。分别精密吸取2．1．1项下供试品溶液，对照品溶液、对照药材溶液Ⅰ及2．3．2项下供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，即得。结果供试品溶液色谱图中，呈现与柴胡皂苷b2对照品色谱峰保留时间相的色谱峰，未呈现与柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d对照品色谱峰保留时间相同的色谱峰。

图3 验证高效液相色谱图

3 讨论

图2显示，本次收集到的多批柴胡药材及来源于中国食品药品检定研究院的柴胡对照药材经水煎煮后，柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d斑点颜色变淡，同时新出现柴胡皂苷b2的斑点，而成品中仅检视出柴胡皂苷b2的斑点。

图3表明，柴胡药材甲醇提取，均有柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d成分；但柴胡药材经水煎煮后，其成分发生变化，柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d减少，产生柴胡皂苷b2。气滞胃痛颗粒各药材混合煎煮后提取的自制样品中柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d几乎完全消失。

柴胡皂苷a、柴胡皂苷d会随水煎煮时间的延长而减少，柴胡皂苷d甚至完全消失；柴胡皂苷a、柴胡皂苷d在受热或酸性条件下也会转化为与之对应的柴胡次级皂苷 b1，b2[10－13]，这与本试验结果相同。柴胡皂苷b2也是柴胡发挥药效的有效成分[14－16]，从柴胡的用药历史上看，多数情况下是与其他药共煎入药，也就是说柴胡是通过其次生皂苷发挥药效。

综上所述，柴胡药材按照本品种的工艺进行水煎煮提取后，相关柴胡皂苷会消失或转化，产生柴胡皂苷b2。综合本制剂的制法、有关文献资料和模拟试验结果，选取柴胡皂苷b2作为表征方中柴胡的特征是可行和有意义的。同时，该方法也为含柴胡药味经水煎煮的同类制剂中柴胡药材的鉴别提供了参考依据。