结肠镜检查人群肛门HPV感染情况调查及危险因素分析*

唐湘嫘，张志强，夏宇

（新疆医科大学第一附属医院，新疆 乌鲁木齐 830054）

人类乳头状病毒（human papillomavirus, HPV）感染是人类常见的性传播疾病之一，它不仅可以引起人类皮肤、黏膜等部位发生良性病变，还可以引起恶性肿瘤的发生。已有大量研究证明，HPV感染与宫颈癌的发生、发展密切相关。而肛门和直肠在细胞组织学结构方面与宫颈存在着一定的相似性，并且肛门腺体丰富、易发生黏膜破损，有利于HPV病毒的侵入与生长，越接近肛门部位，HPV感染率越高[1]。近年来研究表明，HPV感染与结直肠癌的发生存在一定的相关性。肛门癌虽然不常见，但近年来发病率呈现出逐渐增高的趋势，尤其在年轻人群中逐渐增加[2]。王海江等[1]对新疆75例肛门癌手术切除的标本行HPVDNA检测发现，HPV阳性率达73.3%，提示肛门HPV感染与新疆人群肛门癌密切相关，其可能是新疆人群肛门癌发生发展的重要原因之一。

目前已发现200种以上不同类型的HPV。HPV在不同病变中的亚型分布不同，低危型如6和11型，通常与尖锐湿疣等良性病变相关，高危型如16和18型，与宫颈癌、阴茎癌、肛门癌等恶性肿瘤关系密切[3]。因此，HPV的检测和基因分型对HPV相关疾病的早期防治有着非常重要的意义。

研究发现，肛门癌与HPV感染的类型、病毒感染量、宿主的免疫状态等多种因素相关。国外研究发现，某些消化系统疾病，包括腹泻、肛周疾病、炎症性疾病、免疫抑制剂、不良性生活、年龄、性别、吸烟等均能增加肛门HPV感染的风险[4]。但国内尚无此类研究报道，本研究是首次在国内采用HC2法联合基因芯片法调查结肠镜检查病人肛门HPV感染情况并分析其危险因素。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选取2014年11月-2016年11月新疆医科大学第一附属医院内镜中心行结肠镜检查的同期所有检查患者273例，年龄≥18岁。

1.2 调查方法

通过发放问卷调查表的方式进行相关因素调查，调查问卷内容包括年龄、性别、吸烟饮酒史、文化程度、消化系统病症、免疫抑制剂、性生活等。调查问卷由本研究的研究人员在参考国内外类似研究的基础上自行设计和制定。

1.3 标本收集

在行结肠镜检查前，用毛刷在肛门周围采集脱落上皮细胞，取样后的毛刷刷在玻璃片上，然后放入4%多聚甲醛中固定待测。

1.4 病毒形态学分析

玻璃片经巴氏染色，显微镜下观察病理学改变。

1.5 HPV-DNA检测

1.5.1 试剂及仪器 上海凯杰公司生产的HC2 HPVDNA检测试剂及信号分析仪。

1.5.2 方法 DNA提取：标本中加指示剂及裂解液，水浴。杂交：吸混合液及探针至孔板，静置，振荡。65℃孵化，冷却。捕获：将液体转移至捕获孔，振荡，吸出液体弃掉。反应：吸检测试剂1至各孔，静置，倒掉液体，冲洗。收集信号：吸检测试剂2至各孔，黑暗处静置。判读：DML2000系统上判读分析结果。

1.6 HPV分型检测

1.6.1 试剂及仪器 晶芯HPV分型检测试剂盒（微阵列芯片法）、BioMixer杂交仪、LuxScan 10K-B微阵列芯片扫描仪均购自北京博奥公司。

1.6.2 方法 DNA提取：样品离心，加裂解液及蛋白酶K，静置。加异丙嗪，加75%乙醇洗涤沉淀，离心，倒掉乙醇，干燥。加TB缓冲液，静置。PCR扩增：扩增试剂A、B，融化混匀，加样本，扩增仪中行扩增反应。杂交：扩增产物加入杂交缓冲管，混匀，离心。混合物加到芯片上，放于50℃的杂交仪器中，60 min。芯片于42℃洗涤液I中，震荡。洗涤液Ⅱ中，震荡。芯片于微阵列离心管，离心，甩干。扫描：芯片扫描仪和HPV分型检测系统行信号读取和判断。

1.7 统计学方法

数据分析采用SPSS 17.0统计软件，计数资料用率（%）表示，比较采用χ2检验，多因素分析用Logistic回归分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 患者的一般临床特征

273例患者中，男性156例，女性117例；年龄18～75岁；汉族217例，维吾尔族36例，回族16例，其他民族4例；未婚10例，已婚263例，以及其他一般临床特征见表1。

2.2 影响肛门HPV感染的相关危险因素分析

273例标本中检测HPV-DNA阳性8例，总感染率为2.93%，标本同时行基因分型，其中4例（52+58）型，2例16型，1例35型，1例39型，均为高危型，273例标本显微镜下观察未见明显病理改变。单因素分析表明，影响肛门HPV感染的相关危险因素分别是患者的年龄、文化程度、消化道症状等因素。见表2。

2.3 影响肛门HPV感染的危险因素分析

将上述单因素分析具有统计学意义的危险因素，以年龄、文化程度、消化道症状为自变量，以肛门HPV感染结果为因变量行多因素Logistical回归分析，结果表明年龄、文化程度、消化道症状是影响肛门HPV感染的危险因素（P＜0.05）。见表3。

表1 患者的一般临床特征

表2 影响肛门HPV感染的相关危险因素分析

表3 影响肛门HPV感染的多因素Logistical回归分析

3 讨论

流行病学调查显示，性行为是主要的HPV传播途径，性伴侣数量多、性伴侣不固定、性接触频率高、不洁性生活都是生殖道HPV感染的高危因素，而特殊性交行为，如肛门性交可增加肛门HPV感染的风险[5]。据报道，异性恋男性肛门HPV感染率为12%，同性恋男性肛门HPV感染率为47%[6]。本研究显示，特殊性生活并不是肛门HPV感染的风险因素。但是，考虑我国社会对于特殊性生活的接受程度，不排除由于受试者对该问题的敏感性，因此未能如实回答。

另外，研究发现年龄与宫颈HPV感染有关，宫颈HPV感染最常见于＞55岁及＜25岁的女性，其原因为55岁以上女性的免疫力较差，女性激素的变化可导致处于潜伏期病毒复活，而25岁以下年轻女性性生活较频繁，可通过不洁的性生活增加宫颈HPV感染[7]。相关研究显示，男性生殖器HPV感染多见于21～40岁，可能与这个年龄段的男性性生活相对频繁有关[8]。本研究显示，肛门HPV感染多见于31～40岁。这与以往的研究结果是基本一致的。

国内学者姚吾等[9]的研究结果显示，文化程度和经济收入低、营养状况差以及健康卫生习惯缺乏与生殖道高危HPV感染具有一定的相关性。本研究结果显示，文化程度是影响肛门HPV感染的危险因素。低等文化程度人群中HPV感染率高于中等及高等文化患者。其原因可能在于文化程度低，导致了健康卫生习惯的缺乏，导致更加容易接触和感染HPV。因此，应加大卫生保健知识的宣传和教育，降低HPV的感染率[10-11]。

另外，本研究还显示，消化道症状也是影响肛门HPV感染的危险因素。HPV阳性患者均有消化道症状，多数有消化道疾病病史。其原因可能在于消化系统疾病可降低肠道黏膜抵抗力，减弱局部清除病原体能力而增加感染HPV的风险。这是首次发现消化道症状是影响肛门HPV感染的危险因素。

本研究方法采用HC2法联合基因芯片法行HPVDNA检测及基因分型[12-13]，能检测22种HPV基因型，其中包含高危型17种：16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、73和82。 低危型5种：6、11、53、70和81。该方法简单易行、安全性强、诊断迅速，癌细胞检出率较高，适合大规模普查，不仅可以对HPV 感染者进行准确的早期诊断，而且可以对HPV进行快速分型检测。研究结果将为抗HPV疫苗的研制、肛门癌的预防、筛查、及肛门癌的早期诊断和治疗提供客观、准确、科学的依据。

综上所述，结肠镜检查人群肛门有一定的HPV感染率，但感染率较低。年龄、文化程度、消化道症状是影响肛门HPV感染的独立危险因素。