复方黄连膏中雄黄的质量控制

曾祖平 李彧 谭征 韩旭阳 彭冰 王宏 何薇

摘要：目的 控制复方黄连膏中雄黄的质量。方法 对雄黄中毒性成分三氧化二砷采用古蔡氏法进行限度检查；对雄黄主要成分二硫化二砷利用硫酸钾、硫酸铵和硫酸消解后采用滴定法进行定量分析。结果 复方黄连膏中可溶性砷含量不高于15.6 μg/g，二硫化二砷含量不低于2.21 mg/g。结论 本方法简便易行，可以有效控制制剂中雄黄的质量。

关键词：复方黄连膏；雄黄；三氧化二砷；二硫化二砷

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2018.03.015

中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2018）03-0068-04

Abstract： Objective To control the quality of realgar in compound Huanglian Ointment. Methods As2O3 which is the toxic component of realgar was carried limit test by Gutzeit's test； Potassium sulfate， ammonium sulfate and sulfuric acid were used to digest， and then titration method was used to determine the content of As2S2 in compound Huanglian Ointment. Results The content of the soluble As in compound Huanglian Ointment was no higher than 15.6 μg/g. The content of As2S2 in compound Huanglian Ointment was no less than 2.21 mg/g. Conclusion The method is simple and easy， which can be applied as the quantity control method of compound Huanglian Ointment.

Keywords： compound Huanglian Ointment； realgar； As2O3； As2S2

复方黄连膏是首都医科大学附属北京中医医院的院内制剂（京药制字Z20053395），具有清热止痒、解毒消肿止痛的功效，用于湿毒蕴结、瘀血留滞证，证见局部红肿瘙痒或热痛，皮损潮红灼热、瘙痒，舌红，苔黄，脉数，及脓疱病、湿疹、丹毒见上述证候。复方黄连膏由黄连、醋炙乳香、醋炙没药、雄黄、冰片等11味药组成。方中雄黄是国务院《医疗用毒性药品管理办法》中规定的28种毒性中药之一，具有明显的肝、肾毒性；研究表明，无机砷可诱发人类癌症，对人体有危害[1-2]。为此，本研究对雄黄进行质量控制，采用滴定法对主要成分二硫化二砷进行含量测定，采用古蔡氏法对毒性成分三氧化二砷进行限度检查，为临床安全用药提供依据。

1 仪器与试药

分析天平（PB 203-N，METTLER TOLEDO），超声波清洗器（SK7210HP，上海科导超声仪器有限公司），水浴锅（SYQ-4，常州朗越仪器制造有限公司），电子调温电热套（DZTW，北京中仪泓瑞科技发展有限公司）。

复方黄连膏（批号120140911、20140922、20141029），首都医科大学附属北京中医医院；雄黄，北京同仁堂，按2015年版《中华人民共和国药典》（一部）方法测定，其中二硫化二砷含量为91.66%；0.050 30 mol/L碘液、0.25 mol/L硫酸，北京世纪科博有限公司，容量分析；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 可溶性砷检查

2.1.1 标准砷溶液的制备

称取三氧化二砷0.132 g，置1000 mL量瓶中，加20%氢氧化钠溶液5 mL溶解，用适量稀硫酸中和，再加稀硫酸10 mL，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。

临用前，精密量取贮备液10 mL，置1000 mL量瓶中，加稀硫酸10 mL，用水稀释至刻度，摇匀，即得（每1 mL相当于1 μg砷）。

2.1.2 标准砷斑的制备

采用古蔡氏法[3]。分別精密量取标准砷溶液2 mL，置砷斑装置的磨口锥形瓶中，加盐酸5 mL、水21 mL，再加入碘化钾试液5 mL与酸性氯化亚锡试液5滴，室温放置10 min后，加锌粒2 g，立即将装有醋酸铅棉花60 mg的导气管（旋塞的顶端平面上放1片溴化汞试纸）密塞于磨口锥形瓶上，并将其置于25～40 ℃水浴中反应45 min，取出溴化汞试纸，即得标准砷斑。

2.1.3 供试品的制备

取复方黄连膏3.20 g，共3批，精密称定，加稀盐酸20 mL，40 ℃水浴保温2 h，再振摇10 min，超声处理（350 W，53 kHz）30 min，过滤（取稀盐酸适量湿润定量滤纸），残渣用稀盐酸洗涤2次，每次10 mL，搅拌10 min，洗液与滤液合并，置50 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。

2.1.4 供试品测定

精密量取供试品溶液2 mL，按“2.1.2”项下方法制备并测定，结果3批复方黄连膏所显砷斑颜色均不深于标准砷斑，表明每1 g复方黄连膏中可溶性砷含量不高于15.6 μg。

2.2 二硫化二砷含量测定

2.2.1 供试品制备方法考察

2.2.1.1 去除软膏基质的溶剂选择

复方黄连膏的主要基质为凡士林，根据其溶解特性，选择石油醚（60～90 ℃）作为溶解基质的溶剂。取复方黄连膏约10 g，共2份，精密称定，置于离心管中，加石油醚30 mL，60 ℃水浴加热15 min，3000 r/min离心5 min，快速弃去上清液，底部剩余部分重复上述操作2次。最终残渣用少量石油醚洗涤并转移至锥形瓶中，水浴加热挥尽石油醚，放冷，加硫酸钾2.0 g、硫酸铵5.0 g、硫酸30 mL[4-6]，电热套中加热至溶液澄明，放冷，缓缓加水100 mL，加热微沸5 min，放冷。加酚酞指示剂4滴，用氢氧化钠溶液（40→100）中和至微显红色后放冷，用0.25 mol/L硫酸溶液中和至褪色，加碳酸氢钠5 g，摇匀后用0.05 mol/L碘液滴定，临近终点时，加淀粉指示液3 mL，滴定至溶液显棕褐色。每1 mL碘液相当于5.348 mg二硫化二砷。经计算，二硫化二砷的平均转移率为76.29%，接近理论推算值，表明方法可行。

2.2.1.2 溶解温度考察

加热有利于凡士林在石油醚中的溶解。分别考察60、80 ℃水浴温度對测定结果的影响，按“2.2.1.1”项下方法操作，结果80 ℃水浴的平均转移率较高于60 ℃水浴，故选择80 ℃作为水浴温度，见表1。

2.2.1.3 溶解次数考察

取复方黄连膏10 g，共6份，置于离心管中，精密称定，按“2.2.1.1”项下方法操作，80 ℃水浴，结果溶解1次的平均转移率高于溶解2、3次，故选择加石油醚处理1次，见表2。

2.2.2 方法学考察

2.2.2.1 线性关系考察

分别取雄黄粉末0.013 7、0.034 0、0.062 0、0.092 0、0.120 0 g，精密称定，分别置于锥形瓶中，加硫酸钾2.0 g、硫酸铵5.0 g与硫酸30 mL，加热至溶液澄明，放冷，缓缓加水50 mL，加热5 min后放冷，加酚酞指示液2滴，用氢氧化钠（40→100）中和至微显红色后放冷，用0.25 mol/L硫酸溶液中和至褪色，加碳酸氢钠5.0 g，摇匀后用0.05 mol/L碘液滴定，临近终点时，加淀粉指示液3 mL，滴定至溶液显棕褐色，见表3。以消耗碘滴定液的体积（mL）为纵坐标，以雄黄粉末的取样量（g）为横坐标，得回归方程Y=176.8X-0.479，r=0.999 0，表明二硫化二砷取样量在12.6～110 mg范围内与碘滴定液消耗体积呈良好的线性关系。

2.2.2.2 空白试验

按处方量制备缺雄黄的阴性样品，加30 mL石油醚，80 ℃水浴15 min，3000 r/min离心5 min，弃去上清液后按“2.2.1.1”项下方法测定，结果消耗的碘滴定液（0.1 mol/L）为4滴，说明样品中除雄黄外的其他成分对二硫化二砷的测定基本无干扰。

2.2.2.3 重复性试验

取同一批号（批号20140911）样品约10 g，精密称定，共6份，分别加30 mL石油醚，80 ℃水浴15 min，3000 r/min离心5 min，弃去上清液后按“2.2.1.1”项下方法测定。结果二硫化二砷平均含量为2.714 mg/g，RSD=1.96%，表明本方法的重复性良好。

2.2.2.4 加样回收率试验

取同一批号（批号20140911）已知含量（2.714 mg/g）样品约5 g，精密称定，共6份，分别精密加入已知二硫化二砷含量（91.6%）的雄黄粉末约14.80 mg，置于离心管中，分别加入石油醚30 mL，80 ℃水浴15 min，3000 r/min离心5 min，弃去上清液后按“2.2.1.1”项下方法测定，计算加样回收率，结果平均回收率为93.71%，RSD=1.87%，见表4。

2.2.3 样品含量测定

取复方黄连膏10 g，共3批，每批3份，精密称定，置于离心管中，加30 mL石油醚，80 ℃水浴15 min，3000 r/min离心5 min，弃去上清液，残渣用少量石油醚洗涤并转移至锥形瓶中，水浴加热挥尽石油醚，放冷，加硫酸钾2.0 g、硫酸铵5.0 g、硫酸30 mL，电热套中加热至溶液澄明，放冷，缓缓加水100 mL，加热微沸5 min，放冷。加酚酞指示剂4滴，用氢氧化钠溶液（40→100）中和至微显红色后放冷，用0.25 mol/L硫酸溶液中和至褪色，加碳酸氢钠5.0 g，摇匀后用0.05 mol/L碘液滴定，临近终点时加淀粉指示液3 mL，滴定至溶液显棕褐色，见表5。

由处方得知，每1 g复方黄连膏中含雄黄3.07 mg。考虑药品制备过程中损失，假定为20%，同时考虑雄黄纯度（药典规定雄黄中二硫化二砷含量不得少于90.0%），则暂定每1 g复方黄连膏中二硫化二砷不低于2.21 mg。检测的3批复方黄连膏均符合要求，说明雄黄原料按工艺处方基本足额投料。

3 讨论

雄黄入药始载于《神农本草经》（称黄食石）。许多中药制剂均含有雄黄，如安宫牛黄丸、牛黄解毒丸（片）、局方至宝散等。雄黄的主要成分是二硫化二砷，而所含的微量三氧化二砷（俗称砒霜）是其毒性成分[7]。因此，有效控制含雄黄制剂中二硫化二砷和三氧化二砷的含量具有必要性。

进行三氧化二砷限度检查时，本研究采用2015年版《中华人民共和国药典》（四部）通则0822收载的可溶性砷盐检查方法第一法（古蔡氏法），利用无砷金属锌与酸反应产生新生态的氢，再与样品中微量亚砷酸盐反应生成具有挥发性的砷化氢，砷化氢遇溴化汞试纸产生黄色至棕色的砷斑，将其与同一条件下定量的标准砷溶液所产生的砷斑进行比较，来判断样品中砷盐的限度。与标准砷斑比较后，经计算，每1 g复方黄连膏中可溶性砷盐含量不高于15.6 μg。

进行二硫化二砷含量测定时，首先将药品消解，再采用滴定法测定。复方黄连膏中存在大量软膏基质凡士林，会干扰含量测定结果[8]，预试验也验证了这一结论，因此有必要去除软膏基质。根据相似相溶原理，应选取非极性溶剂去除基质。石油醚具有挥发快、沸点低且不与样品药物发生反应的特点，故本研究选取石油醚（60～90 ℃）作为去除复方黄连膏中基质的溶剂。

在建立二硫化二砷含量测定方法时发现，样品的消解过程对测定结果影响较大。起初按药典方法加入消解过程所需试剂量，结果反应不彻底，测定结果偏低；而后参考文献方法加大了试剂用量，反应基本完全，方法学考察结果表明所建立的方法可行。

参考文献：

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[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：四部[M].北京：中国医药科技出版社，2015：102.

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[5] 吴辉彬，陈志成，王晓云，等.牛黄清心丸（局方）中朱砂和雄黄的含量测定[J].中国药业，2012，21（14）：44-46.

[6] 耿素枝，张喜.滴定法测定蒙药筋骨风痛膏中二硫化二砷的含量[J].中外医疗，2011，30（33）：134-135.

[7] 张伟，余伯阳，寇俊萍，等.雄黄活性物质的毒效相关性初步研究[J].中国天然药物，2004，2（2）：123-125.

[8] 石天松.软膏剂药品含量测定方法的现状[J].右江医学，2004，32（3）：280-281.

（收稿日期：2017-09-26）

（修回日期：2017-10-17；编辑：陈静）