片姜黄质量标准再评价研究

朱红梅，刘　涛，韩　啸

(成都大学 药学与生物工程学院，四川 成都　610106)

0　引　言

片姜黄为姜科植物温郁金的干燥根茎，主产于浙江温州瑞安等地[1].片姜黄具有破血行气，通经止痛之功效，临床上常用于胸胁刺痛、胸痹心痛、痛经经闭、风湿肩臂疼痛、跌扑肿痛等症治疗[2].在《中国药典》2015版一部中，片姜黄的现行标准仅包括性状鉴别、薄层鉴别及挥发油的含量测定，而未对其中某个指标成分含量进行控制.相关研究表明，片姜黄中含有莪术醇、莪术酮、莪术二酮、吉马酮与呋喃二烯等成分，且吉马酮具有抗肿瘤、抗病毒、抗菌、抗炎等药理作用[3-4].对此，本研究拟在片姜黄的现行质量标准中增加吉马酮的含量测定，拟为其质量控制提供依据.

1　材料与仪器

1.1　材　料

实验所用材料包括：片姜黄(批号，20170226、20171028、20171102)，分别购自北京同仁堂药业有限公司与安国药源商贸有限公司；吉马酮对照品(批号，150810，HPLC>98%)，购自四川省维克奇生物科技有限公司；薄层层析硅胶G(批号，20151023)，购自青岛海洋化工厂；羧甲基纤维素钠(批号，20130821)、石油醚(30～60 ℃，批号，2016092201)、乙酸乙酯(批号，2016071501)、甲醇(批号，2017070501)，购自成都科隆化学品有限公司；HPLC用甲醇、乙腈为色谱纯，水为怡宝纯净水，其余试剂均为分析纯.

1.2　仪　器

实验所用仪器包括：BS-6KH电子天平(上海友声衡器有限公司)；BJ-150型高速多功能粉碎机(拜杰公司)；FA2004型分析电子天平(上海良平仪器仪表有限公司生产)；ichrom-5100型高效液相色谱仪(大连依利特分析仪器有限公司)；KQ-100E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；HH-6型数显恒温水浴锅(常州国华电器有限公司).

2　方法与结果

2.1　性状鉴别

观察发现：片姜黄呈长圆形或不规则的片状，大小不一，长3～6 cm，宽1～3 cm，厚0.1～0.4 cm；外皮灰黄色，粗糙皱缩，有时可见环节及须根痕；切面黄白色至棕黄色，有一圆环纹及多数筋脉小点；质脆而坚实，断面呈灰白色至棕黄色，略呈粉质；气味特异，味微苦而辛凉.

2.2　薄层鉴别

取片姜黄粉末1 g，加石油醚(30 ℃～60 ℃)5 mL，振摇，约30 min，滤过，滤液转移至5 mL量瓶中，加石油醚(30 ℃～60 ℃)至刻度，作为供试品溶液.另取片姜黄对照药材，同法制成对照药材溶液.

参照薄层色谱法[2]进行实验，具体步骤为：吸取上述2种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30 ℃～60 ℃)—乙酸乙酯(17∶3)为展开剂展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，于100 ℃加热至斑点显色清晰，结果见图1.

注：1、2，片姜黄对照药材；3，样品20170226；4，样品20171028；5、6，样品20171102

图1片姜黄薄层鉴别色谱图

由图1可见，供试品溶液中与对照药材色谱相应的位置上，显现相同颜色的斑点.

2.3　挥发油含量测定

挥发油含量测定步骤为：取供试品适量(相当于含挥发油0.5～1.0 mL)，准确称定(准确至0.01 g)，置烧瓶中，加水300～500 mL(或适量)与玻璃珠数粒，摇匀混合后，连接挥发油测定器与回流冷凝管，自冷凝管上端加水使其充满挥发油测定器的刻度部分并溢流入烧瓶时为止；然后置电热套中或用其他适宜方法缓缓加热至沸，并保持微沸约5 h，至测定器中油量不再增加，停止加热，放置片刻，开启测定器下端的活塞，将水缓缓放出，至油层上端到达刻度线0线上面5 mm处为止.放置1 h以上，再开启活塞使油层下降至其上端恰与刻度0线平齐，读取挥发油量，并计算供试品中挥发油的含量(%).实验结果见表1.

表1　3批片姜黄挥发油含量测定结果

根据《药典》2015版一部项下相关规定，确定本品含挥发油不得少于1.0%(mL/g).

2.4　吉马酮含量测定

2.4.1色谱条件.

实验色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈—水(60∶40)为流动相，检测波长为215 nm，流速为1 mL/min.

2.4.2对照品溶液制备.

取吉马酮对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含367.2 μg的对照品溶液.精密量取上述对照品溶液，配制成浓度分别为73.44 μg/mL、29.376 μg/mL、14.688 μg/mL、5.8275 μg/mL的对照品溶液.

2.4.3供试品溶液制备.

取片姜黄粉末约2.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加25 mL甲醇，称定，超声处理30 min，放冷，称定，用甲醇补足减少的质量，过滤，制得供试品溶液.

2.4.4线性关系考察.

分别吸取“2.4.2”项下5种对照品溶液，按照“2.4.1"项下色谱条件进样，测定峰面积．以峰面积为纵坐标，吉马酮进样量为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为，y=2881.9x+11.709(R2=1).结果表明，吉马酮在0.058～3.672 μg范围内与峰面积呈良好线性关系(见图2).

图2吉马酮对照品线性关系图

2.4.5精密度实验.

精密量取吉马酮对照品溶液10 μL，按照“2.4.1”项下色谱条件连续重复进样6次，测定吉马酮峰面积，计算其RSD为0.78%．结果表明，仪器的精密度良好.

2.4.6稳定性实验.

称取片姜黄适量(批号，20170226)，按照“2.4.3"项下方法制备供试品溶液，分别于0、1、2、4、8、12、16 h时按“2.4.1"项下色谱条件进样10 μL，测定吉马酮峰面积，计算其RSD为2.60%.结果表明，供试品溶液在16 h内基本稳定.

2.4.7重复性实验.

称取同一批片姜黄适量(批号，20170226)，按照“2.4.3"项下方法制备方法制备供试品溶液，平行6份，按“2.4.1"项下色谱条件各进样10 μL，测定吉马酮峰面积，计算其RSD为2.90%.结果表明，本方法具有良好的重复性.

2.4.8加样回收实验.

精密称取已知含量的片姜黄(批号，20170226)，精密加入对照品溶液0.8 mL(367.2 μg/mL)，按照“2.4.3"项下方法制备供试品溶液，平行6份，按“2.4.1"项下色谱条件各进样10 μL，测定吉马酮峰面积，计算得其平均回收率为94.8%、RSD为4.50%，结果见表2.结果表明，本方法回收率良好.

表2　加样回收实验

2.4.9吉马酮含量测定及限量确定.

取3批片姜黄样品(批号，20170226、20171028、20171102)，按照“2.4.3"项下方法制备供试品溶液，按“2.4.1"项下色谱条件各进样10 μL，测定吉马酮含量，结果见表3、图3.

表3　3批样品中吉马酮含量测定结果

图3片姜黄HPLC色谱图

根据实验结果，本研究认为，可暂规定本品含吉马酮(C15H22O)不得少于0.020%.

3　结　论

本研究根据《中国药典》一部项下相关规定对3批片姜黄样品进行性状鉴别、薄层鉴别及挥发油的含量测定检验，样品均合格.在此基础上，本研究建立了高效液相色谱法直接测定片姜黄中吉马酮含量的方法，通过方法学考察表明，线性关系、精密度、稳定性、重复性及加样回收率均较好，同时测定了3批不同批次的片姜黄中吉马酮的含量并规定其限度.实验结果表明，该定量检测方法可靠性较强，可为片姜黄中吉马酮的分析提供可信的检测手段，同时，也为其进一步的质量控制提供了依据.