C-反应蛋白检测在犬多种疾病中的应用

王 凡，白 羽，于咏兰

(中国农业大学动物医学院，北京 100193)

急性期反应被认为是宿主先天防御系统中重要的一部分，该反应的发生远早于获得性免疫，任何破坏体内稳态的组织刺激都可能导致其发生。C-反应蛋白(C-reactive protein，CRP)是一种急性期反应蛋白，最早在人体中被发现，因其对肺炎球菌C多糖体产生反应而被命名为“C-反应蛋白”。当出现急性期反应时，CRP浓度上升十分迅速，在24 h～48 h即可达到峰值。因CRP的半衰期很短，所以当急性期反应的诱因被处理后，CRP又可被迅速清除[1]，所以CRP被用于人类多种疾病的诊断中。与人类疾病相似，CRP也是犬疾病过程中一个主要的急性期反应蛋白，其血清浓度不受年龄和性别因素影响[1]，健康的怀孕犬和肥胖犬中可能会有轻度升高[2]。

虽然已证实，手术、创伤、某些感染性疾病、血液寄生虫病、某些免疫介导性疾病、肿瘤性疾病会导致犬CRP浓度升高[1,3-6]，但目前兽医临床工作中，仍急需犬在患有对其危害很大、发病率较高的细小病毒、冠状病毒、犬瘟热病毒及寄生虫等感染时，CRP对疾病诊断与预后的应用指导。本文通过检测与分析犬患有上述疾病时血液样本中CRP的变化，弥补了这一空白。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物与分组 选取2016年10月至2017年6月间，经中国农业大学教学动物医院确诊的、患有犬细小病毒50例、犬冠状病毒13例、消化道寄生虫感染8例、胰腺炎17例、其他原因(非犬细小病毒、犬冠状病毒、寄生虫感染、胰腺炎)导致的胃肠炎10例、犬瘟热病毒32例、非犬瘟热病毒引起的呼吸道感染病例27例，分设为试验组，同时选取15只健康犬为健康对照组。所有患病动物的确诊通过临床检查、实验室诊断等综合进行。对照组犬只通过临床检查、血常规、生化检查及电话寻访采样前后各10 d生活状态均无异常而确定。

1.1.2 主要仪器设备 犬C-反应蛋白分析仪，北京勤邦生物技术有限公司生产，型号KIA0601Y；全自动动物血液分析仪，日本希森美康株式会社生产，型号pocH-100i；全自动血细胞分析仪，美国爱德士生物科技公司生产，型号ProCyte DxTM；生化分析仪，美国爱德士生物科技公司生产，型号VetTestTM；显微镜，日本奥林巴斯公司生产，型号CX21；胶体金试纸条(犬细小病毒、犬冠状病毒、犬瘟热病毒)，韩国ASAN PHARM公司生产；犬胰腺炎快速检测试剂，美国爱德士生物科技公司生产，型号SNAP cPLTM；X线摄影系统，西班牙赛德科医疗设备有限公司生产，型号3000-F；PCR仪，台湾金瑞鸿捷生物科技有限公司生产，型号tacoTM。

1.2 方法

1.2.1 C-反应蛋白检测方法 CRP的检测使用北京勤邦生物技术有限公司出产的C-反应蛋白检测试纸板及分析仪进行。采集犬外周静脉血，制备血浆或血清样本后立即测定或在-80℃保存，3个月内检测完毕。检测时取4 μL血浆/血清样本于稀释管内，充分混匀。再取10 μL稀释样本滴于试剂板上相应部位反应5 min，后使用配套免疫层析分析仪读取检测结果。本次的犬CRP检测采用双抗体夹心法原理进行。

该方法下厂家给出的CRP检测范围为5 mg/L～200 mg/L。对于在检测中出现的检测值低于5 mg/L的数值都以5 mg/L来计算，使检测组与对照组的差异显著性比较更合理。

1.2.2 数据处理 采集所有实验动物的血液，进行CRP测定，同时进行白细胞总数的检测，并比较在整个病程中同一检测时间点的CRP和WBC数值与变化趋势，WBC正常范围使用通用标准(5.05～16.76)×109/L。所有数据使用SPSS 17.0 统计软件进行数据分析，采用非参数检验的方法，通过卡方检验比较二分类资料间的差异性，分析差异性时，P<0.05时为差异显著，P<0.01时为差异极显著，具有统计学意义。同时，使用GraphPad Prism 软件进行绘图。

2 结果

2.1 各种疾病组CRP值与差异性分析

细小病毒感染、冠状病毒感染、胰腺炎、消化道寄生虫感染、其他原因导致的胃肠炎、犬瘟热病毒感染、非犬瘟热病毒(CDV)引起的呼吸道感染均可见不同程度的CRP值上升。与健康对照组相比，除了消化道寄生虫组外的所有检测组CRP平均值都有显著升高。冠状病毒组，胰腺炎组，消化道寄生虫组，其他原因引起的胃肠炎组间的CRP平均值没有显著性差异。消化道寄生虫组中，检测到了毛滴虫、贾第虫、绦虫、球虫，在本研究中毛滴虫和贾第虫感染患犬的CRP值升高趋势显著。犬瘟热病毒组、非CDV引起的呼吸道感染组的CRP平均值之间没有显著性差异(表1和表2)。

2.2 疾病预后与CRP值

细小病毒组共有13例患犬死亡(26.00%)，37例患犬存活(74.00%)。细小病毒存活组的CRP平均值为65.35 mg/L±3.53 mg/L，为健康组CRP浓度的12.54倍，死亡组为93.74 mg/L±6.50 mg/L，为健康组CRP浓度的18倍。与存活组相比较，死亡组CRP平均值显著上升(P<0.01)。

表1 有消化道症状相关疾病组的CRP范围和平均值

注：同行中标有不同小写字母的均数间差异显著，即P<0.05；同行中有一个字母相同的均数间表示差异不显著，即P>0.05。

Note：In the same row,values with different small letter superscripts mean significant difference，P<0.05,while with the same letter superscripts mean no significant difference，P>0.05.

表2 犬瘟热病毒组和非CDV引起的呼吸道感染组的CRP范围和平均值

注：同行中标有不同小写字母的均数间差异显著，即P<0.05；同行中有一个字母相同的均数间表示差异不显著，即P>0.05。

Note：In the same row,values with different small letter superscripts mean significant difference，P<0.05,while with the same letter superscripts mean no significant difference，P>0.05.

冠状病毒组出现1例死亡(7.69%)，CRP浓度为该组最高值113.68 mg/L，犬瘟热组共有4例患犬死亡(12.50%)，其中2例患犬为早期出现高水平的CRP值(≥104 mg/L)，另外2例为在犬瘟热病程末期出现抽搐时，测得的CRP值依旧高于正常范围(>10 mg/L)。

本次研究中，非CDV引起的呼吸道疾病组、其他原因导致的胃肠炎组、胰腺炎组、消化道寄生虫组的CRP最高值分别为 109.07,125.96,111.60，81.37 mg/L。在这4组中均未出现病例死亡。

2.3 CRP与WBC变化趋势分析

2.3.1 细小病毒组 细小病毒患犬的CRP浓度均出现升高，白细胞总数变化不定。有30.38%的白细胞总数低于正常范围，8.89%的白细胞总数高于正常范围，其余白细胞总数均在正常范围内。图1中，CRP值在病程早期均处于高位，而白细胞总数不定。但是，当犬得到有效治疗后，CRP的变化快于WBC变化，变化幅度明显大于WBC。在图2中，死亡犬的CRP值在监测过程中居高不下，WBC也低于正常值。

图1 三例存活犬的CRP值和WBC变化趋势

图2 3例死亡犬的CRP值和WBC变化趋势

2.3.2 犬瘟热病毒组 感染犬瘟热后，病程时间长，疾病变化复杂，典型病例如下。在图3的病例中， CRP持续上升，这提示了治疗效果不明显，通过改变治疗方案(D10)，CRP值开始出现持续下降，到第45天(D45)CRP已恢复正常，同时进行犬瘟热病毒复查为阴性，犬恢复良好。疾病的变化与CRP的变化趋势相同。

2.3.3 胰腺炎组 组内有1例病例进行了约1个月的胰腺炎治疗，在治疗初期的CRP值为46.5 mg/L，但在最后一次就诊时，该患犬已无明显的临床表现，但cPL检测依然异常，WBC高于正常值，血液CRP浓度<5 mg/L。本次就诊为该犬最后一次进行检查，几天后回访发现该犬精神食欲均良好，无其他异常表现。

图3 1例犬瘟热患犬的CRP浓度和WBC趋势图

3 讨论

本研究所使用的北京勤邦犬C-反应蛋白检测试纸条的正常值参考范围为CRP浓度<10 mg/L。笔者通过对于健康犬只的血液CRP浓度测定得出在健康犬中CRP值范围为<5 mg/L～6.76 mg/L。

在病毒感染中，急性期反应通常十分微弱[7-8]。本次研究中，细小病毒组CRP平均值与4种其他消化道疾病组相比都有极显著升高，显示了最为剧烈的急性期反应，可见细小病毒感染时患犬易出现其他并发症。既往研究也发现，细小病毒感染时患犬肠道被严重损伤，极易引起二次细菌感染，从而导致败血症的发生[7-8]。本次研究发现，并发的细菌感染在通过抗生素治疗而得以迅速控制时，CRP值下降幅度明显且其反应早于WBC总数变化。所以，在细小病毒治疗中，监测日间CRP值有助于预知病情发展方向，便于调整治疗方案和进行病情转归的预后。

本研究中的冠状病毒组、胰腺炎组、消化道寄生虫组、其他原因引起的胃肠炎组间CRP值没有显著性差异， 可见单独使用CRP不能用于区分这几种消化道疾病的病因，但与健康对照组相比，CRP值的上升可提示炎性反应已经发生。在冠状病毒组中出现的一例死亡病例，其初诊CRP值为113.68 mg/L，于就诊当天死亡，根据其表现推测该犬可能为冠状病毒致命株感染或合并感染了细小病毒等其他病原。

现有研究已发现，在犬自发性急性胰腺炎时，CRP浓度会上升，且与温和状态相比，患有严重胰腺炎时(如胰腺坏死等)CRP浓度上升更高[10]。本次胰腺炎组中，通过B超判定患犬胰腺的状态后亦发现，CRP值的高低与胰腺炎症的严重程度有关。同时发现，在急性胰腺炎的恢复期，CRP恢复早于cPL，可见CRP的变化比cPL更快更敏感。

犬瘟热病毒组与非CDV引起的呼吸道感染组间CRP没有显著性差异，但二者均高于健康对照组，这提示无论是否由CDV引起的呼吸道感染，都需要给以积极有效的治疗。本次研究中，呼吸道症状已消失但出现了神经症状的犬瘟热患犬，其CRP未恢复者均死亡，这提示中枢神经系统的破坏会导致CRP值无法恢复正常。这也同时提醒了临床兽医，对出现神经症状的犬瘟热患犬必须进行CRP检测 ，CRP值居高不下者预后不良。

本次研究结果表明，虽然不能使用CRP进行疾病的归因诊断，但在临床工作中，监测CRP值有助于判断多种疾病治疗效果。在判断疾病转归方向时，CRP浓度的变化幅度比白细胞总数更加明显，反应也更早发生。犬CRP的检测为临床兽医对犬类疾病的诊断和治疗提供了新的手段。

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