布拉酵母菌散对轮状病毒肠炎患儿血清和粪便IL-6、TNF-α及IFN-γ的影响

朱志萍，王朝阳，陈建群，万晓龙

婴幼儿腹泻是儿童发病率仅次于呼吸道感染的常见消化道疾病。该病广泛分布于世界不同的国家和地区，发病率不一[1-2]。我国婴幼儿腹泻的发病以秋冬季为主，因此被称为婴幼儿秋季腹泻[3-4]。经病原学研究证实，40%～50%的婴幼儿腹泻是由轮状病毒肠炎引起的，患儿易出现发热、呼吸急促等症状，严重者会发生水、电解质紊乱和酸碱失衡等，甚至危及生命安全[5]。目前关于婴幼儿轮状病毒肠炎的发病机理及免疫机制尚未明确，有大量研究发现，轮状病毒感染肠上皮细胞可以表达和分泌大量白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)[6-7]。鉴于IL-6、TNF-α和IFN-γ在轮状病毒肠炎发病过程中的关键作用，本研究采用布拉酵母菌散对轮状病毒肠炎患儿进行治疗，并分析其对患儿血清和粪便IL-6、TNF-α和IFN-γ的影响，具体报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2015年6月—2017年4月于我院接受治疗的118例轮状病毒肠炎患儿作为观察对象。①纳入标准：均符合《儿童腹泻病诊断治疗原则的专家共识》中有关轮状病毒肠炎的诊断标准[8]，且具有典型的临床症状及体征，大便粪轮状病毒抗原经胶体金法检测为阳性；患儿家属均了解研究内容和目的，明确治疗风险，愿意签署知情同意书。②排除标准：消化道畸形、重度脱水或电解质紊乱、慢性腹泻以及霍乱和菌痢等法定传染性腹泻；合并心脑血管、肝、肾、肺及造血系统原发疾病、原发免疫缺陷疾病；合并精神、神经疾病；不能完成结果评估者。将所选患儿根据治疗方式不同分为研究组和对照组，每组59例。研究组男31例，女28例；年龄5.1～23.4(13.3±3.1)个月；病程(2.2±0.4)d；体质量8.41～14.23(9.43±1.48)kg；脱水程度：轻度脱水39例，中度脱水20例。对照组男32例，女27例；年龄5.3～24.1(13.8±2.9)个月；病程(2.3±0.3)d；体质量8.36～14.33(9.38±1.52)kg；脱水程度：轻度脱水38例，中度脱水21例。两组性别、年龄、病程、体质量和脱水程度比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2治疗方法 两组均给予饮食指导、抗病毒、口服或静脉补液、预防及纠正电解质紊乱、维持酸碱平衡等常规治疗。研究组在常规治疗基础上给予布拉酵母菌散剂(Laboratoires BIOCODEX，注册证号：S20100086)温水冲服，对于年龄<12个月的患儿，每次0.125 g，1/d；对于年龄≥12个月的患儿，每次0.25 g，2/d。两组均治疗3 d。

1.3实验室检查

1.3.1标本采集：所选患儿均于入院当天清晨采集粪便1 g与空腹静脉血4 ml，分别装于无菌采集管和3.8%枸橼酸抗凝管中，粪便用pH=7.4的PBS缓冲液1 ml稀释。血液与粪便标本均以4000 r/min离心15 min，取上清液，置于-30℃冰箱中冷冻保存，待测。

1.3.2标本检测：血清和粪便IL-6、TNF-α和IFN-γ水平均采用美国贝克曼库尔特有限公司生产的UniCel DxI 800全自动免疫发光分析仪通过双抗体夹心酶联免疫吸附法进行测定，试剂盒由武汉博士德公司提供，具体操作方法严格按照说明书进行。

1.4观察指标 ①根据临床疗效评估标准评价疗效[9]，显效：患儿大便次数、频率恢复正常，外观成形或软便，临床症状及体征完全消失，大便常规检查结果无明显异常；有效：患儿大便次数、频率、外观较治疗前均明显好转，临床症状及体征基本消失，大便常规检查结果较治疗前有明显改善；无效：患儿大便次数、频率、外观均较治疗前无明显好转，临床症状及体征无改善甚至加重，大便常规检查结果较治疗前无明显变化。总有效率=(显效+有效)/总例数×100%。②比较两组治疗前后血清和粪便的IL-6、TNF-α和IFN-γ水平。③观察记录两组治疗后的不良反应发生情况，并进行对比。

2 结果

2.1临床疗效比较 研究组临床总有效率明显高于对照组(χ2=8.316，P=0.004)。见表1。

表1 两组轮状病毒肠炎患儿的临床疗效比较[例(%)]

注：对照组给予常规治疗，研究组在常规治疗基础上给予布拉酵母菌散剂；与对照组比较，aP<0.05

2.2血清和粪便的IL-6、TNF-α及IFN-γ水平比较 治疗前，两组血清和粪便的IL-6、TNF-α及IFN-γ水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后，两组血清和粪便的IL-6、TNF-α水平均明显低于治疗前，IFN-γ水平明显高于治疗前(P<0.05)；且研究组血清和粪便的IL-6、TNF-α水平明显低于对照组，IFN-γ水平明显高于对照组(P<0.05)。见表2和3。

表2 两组轮状病毒肠炎患儿治疗前后血清IL-6、TNF-α和IFN-γ水平比较

注：对照组给予常规治疗，研究组在常规治疗基础上给予布拉酵母菌散剂；IL-6为白介素-6，TNF-α为肿瘤坏死因子-α，IFN-γ为干扰素-γ；与治疗前比较，aP<0.05；与对照组比较，cP<0.05

表3 两组轮状病毒肠炎患儿治疗前后粪便IL-6、TNF-α和IFN-γ水平比较

注：对照组给予常规治疗，研究组在常规治疗基础上给予布拉酵母菌散剂；IL-6为白介素-6，TNF-α为肿瘤坏死因子-α，IFN-γ为干扰素-γ；与治疗前比较，aP<0.05；与对照组比较，cP<0.05

2.3不良反应发生情况 经治疗后，研究组发生恶心3例、腹部不适2例、口干2例、皮疹1例，不良反应总发生率为13.56%；对照组发生口干2例、腹部不适2例、皮疹1例，不良反应总发生率为8.47%。两组不良反应总发生率比较差异无统计学意义(χ2=0.778，P=0.378)。两组的不良反应均较轻微，经对症治疗或随用药时间的延长，均得到缓解。

3 讨论

轮状病毒肠炎是指由轮状病毒感染引起的急性消化道疾病，轮状病毒是儿童秋冬季急性腹泻的常见病原体，主要通过消化道进行传播[10]。目前，婴幼儿轮状病毒肠炎的发病机理及免疫机制尚未明确，但随着近年来医学技术的不断发展和进步，发现轮状病毒主要侵犯肠黏膜上皮细胞，而肠上皮集合淋巴结中大部分为T淋巴细胞，B淋巴细胞所占比例不到10%[11]。同时有研究证实，IL-6、TNF-α和IFN-γ参与了轮状病毒肠炎的发病过程[12]。

布拉酵母菌散是一种新型的真菌类口服微生态制剂，进入人体后可在宿主结肠处定植，暂时充当肠道有益菌，可与肠道致病菌发生竞争性作用，发挥抑制肠道致病菌生长繁殖的作用[13-15]。同时还能促进肠道上皮细胞分化、成熟，保护肠道黏膜结构和功能的完整性，达到止泻的功效[16]。有大量研究报道证实，布拉酵母菌散剂对婴幼儿轮状病毒肠炎的临床疗效较好[17-18]，但关于其对IL-6、TNF-α和IFN-γ是否有调节作用的报道较少。因此，本次研究选取轮状病毒肠炎患儿进行观察研究，旨在探讨布拉酵母菌散治疗婴幼儿轮状病毒肠炎的效果及对IL-6、TNF-α和IFN-γ的影响。

IL-6主要由单核吞噬细胞、T淋巴细胞和成纤维细胞合成与分泌，可诱导天然免疫反应，在细胞因子网络中发挥多种生物学功能[19]。近年来有研究证实，IL-6是一种能增加生物功能的细胞因子，可促进T淋巴细胞、B淋巴细胞的聚集、激活和分化，参与细胞免疫与体液免疫过程[20]。TNF-α主要由单核或巨噬细胞分泌的一种促炎性因子，能够杀伤和抑制肿瘤细胞，促进中性粒细胞吞噬，还可以通过增强其他炎性细胞因子或抑制抗炎性细胞因子的分泌而具有协同促炎效应，是炎性反应过程中发挥核心作用的细胞因子[21]。IL-6和TNF-α相互影响、相互作用组成网络系统，共同启动细胞因子的级联效应，引起炎症及免疫细胞聚集、激活及活化，对肠黏膜产生免疫炎性损伤，破坏其屏障结构及功能，参与轮状病毒肠炎的发病过程[22]。IFN-γ是TH1细胞在抗原刺激作用下分泌的促炎性因子，具有抗病毒、免疫调节等功能[23]。近年来有研究发现，IFN-γ能增强免疫细胞，发挥免疫调节作用，可增强在肠道抗病毒防御机制中杀伤细胞的活性[24]。同时IFN-γ还能增强巨噬细胞吞噬病原体的能力，促进T淋巴细胞增殖，促进单核巨噬细胞的抗病毒功能[25]。

本次研究结果显示，研究组的临床总有效率明显高于对照组，且不良反应总发生率对比无明显差异。说明采用布拉酵母菌散剂治疗轮状病毒肠炎的临床效果较好，且不良反应较少，治疗安全性高。同时本次研究还发现，治疗后，研究组血清和粪便的IL-6、TNF-α水平均明显低于对照组，IFN-γ水平明显高于对照组。说明采用布拉酵母菌散治疗轮状病毒肠炎，可以降低IL-6和TNF-α的分泌与表达，减少炎性细胞的聚集、浸润及活化，抑制炎症及免疫反应过程，同时可以提高IFN-γ水平，抑制轮状病毒进入小肠上皮细胞，调节小肠液的转运及渗透功能，促进单核巨噬细胞的抗病毒能力，达到临床治愈的疗效。

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