血清淀粉样蛋白A联合肿瘤标志物检测在肺癌诊疗中的应用

燕丕宏，矫 秀，巨爱宁，宋珍明，汤滢秀

(滨州医学院烟台附属医院检验科，山东烟台 264100)

肺癌是一种常见的恶性肿瘤，在全世界范围内其病死率和发病率都排在恶性肿瘤之首。在我国，每年病死于肺癌的例数大约有60万[1]。肺癌对人类的健康造成严重威胁，检测血清肿瘤标志物(TM)操作简单且是一种非侵袭的方式，对患者进行静脉采血即可，潜在应用价值较高。在肿瘤生成及增殖过程中，宿主与肿瘤互相作用或肿瘤细胞合成或分泌的物质称为TM。在健康人体内TM水平极低，但大量存在于肿瘤患者体内。酶类、抗原类、糖蛋白类、激素类、细胞表面肿瘤抗原类为TM。在肺癌的病理分析、诊断鉴别、疗效观察、预后判断等方面，TM的应用十分广泛，发挥着重要作用[2-3]。在肺癌诊断中，联合检测TM是肺癌诊治的热点与重点，癌胚抗原(CEA)、鳞状上皮细胞癌抗原(SCC)、血清细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、糖类抗原125(CA125)、糖类抗原199(CA199)应用广泛[4]。本研究选择血清淀粉样蛋白A(SAA)作为参考，研究其在诊断肺癌中的应用，并通过对CEA、CA125、CA199、SCC、CYFRA21-1的测定，探究在肺癌诊断中其单一检测和联合检测的应用价值，选取诊断价值高的指标，分析各项指标联合SAA检测在肺癌治疗中的价值，为肺癌的早期诊断提供数据理论支持，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2014年4月至2016年5月本院收治的104例患者作为研究对象，分为肺癌组73例和肺部良性疾病组31例。肺癌组男50例，女23例；早期(Ⅰ和Ⅱ期)19例，中期(Ⅲ期)12例，晚期(Ⅳ期)42例；平均年龄(60.47±9.36)岁。所有肺癌患者具有完整可查的病历资料，经细胞学或组织病理学检测为原发性肺癌。肺部良性疾病组男18例，女13例；平均年龄(59.89±12.13)岁。另选取健康体检者50例作为健康对照组，男29例，女21例；平均年龄(56.74±10.67)岁。各组研究对象的年龄、性别等一般资料比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2试剂与仪器

1.2.1试剂 CA199、CA125、SCC、CEA化学发光试剂盒由美国雅培公司提供。SAA酶联免疫吸附试验试剂盒ab100635由英国abcam公司提供。

1.2.2仪器 雅培全自动化学发光分析仪I2000由美国雅培公司提供；全自动酶标分析仪由美国Bio-Tek公司提供；-80 ℃超低温冰箱由日本SANY公司提供；可调式微量移液器由德国Eppendorf公司提供。

1.3方法

1.3.1采集标本 (1)采集住院患者空腹静脉血3 mL，3 000 r/min离心5 min，分离血清后当日检测，具体操作严格按试剂盒说明书及科室标准操作程序进行。

1.3.2正常参考值 正常参考值由试剂盒提供，以此作为标准判定阳性：CA125>35 U/mL,SCC>1.5 ng/mL,CYFRA21-1>2.08 ng/mL,CEA>5 ng/mL,CA199>37 U/mL[5]。

1.3.3SAA测定 (1)留取标本,取所有入组对象空腹血，将其自然凝固10～20 min，使用3 000 r/min离心机离心20 min，取上清液2 mL保存于超低温冰箱内，同样方法收集治疗后肺癌患者血清，诊断后统一检测其血清SAA水平。(2)制备试验试剂,将5×B稀释液15 mL稀释为1×75 mL溶液;将20×洗涤液摇匀至无结晶物，稀释20×20 mL的浓缩液为1×400 mL的溶液;摇匀SAA溶液，加入100 μL稀释液B，混合均匀;将800×辣根过氧化物酶(HRP)溶液摇匀。混合80 mL稀释液B与100 μL HRP溶液，配成1×HRP溶液。(3)配制标准品,将SAA标准品摇匀，标记1～8个试管;制备0～300 ng/mL的标准品。(4)准备样品,使用稀释剂将所有样品稀释5倍后备用。(5)检测SAA,加样，在酶标板的16个孔中加入标准品，8个为重复孔，其余为标本孔，将100 μL标本加入标本孔中。加样时尽量不触及孔壁，加于酶标孔底部，轻晃摇匀;洗涤温育，揭掉封板膜，甩干，每孔加1×洗涤液，30 s静置后弃去，重复4次后拍干;加抗体：将血SAA用生物素标记，然后每孔加入1×检测抗体100 μL，密封后轻轻振荡摇匀;将液体弃置，将2步骤重复进行;加酶：每孔加100 μL 1×HRP,密封摇匀，进行45 min孵育;洗涤温育：将液体弃置，重复2步骤;显色：每孔中加100 μL的3,3′,5,5′-四甲基联苯胺二盐酸底物，密封后避光震荡30 min;终止：将50 μL终止液加入每孔，终止反应;测定：调零空白孔，加终止液15 min以内测量各孔吸光度。

1.4纳入和排除标准

1.4.1纳入标准 其他器官无原发癌；肺癌组病例经检查确诊；无免疫治疗史，无放化疗史；健康对照组无重要器官疾病，相关检查正常。

1.4.2排除标准 资料不完整者；近期献血者；妊娠期、月经期；脂血、溶血者；重度营养不良者；重要器官合并功能障碍者。

2 结 果

2.13组研究对象5种TM表达水平比较 见表1。肺癌组患者血清CA199、CEA、SCC、CYFRA21-1水平明显高于健康对照组和肺部良性疾病组，差异均有统计学意义(P<0.05)。

表1 3组研究对象5种TM表达水平比较[中位数(最小值～最大值) ]

注:与肺部良性疾病组比较，*P<0.05；与健康对照组比较，#P<0.05

表2 5种TM诊断肺癌的特异度和敏感度的表达[%(n/n)]

注：与其他4项比较，*P<0.05；与单项指标比较，#P<0.05

2.25种TM诊断肺癌的特异度和敏感度 见表2。与其他4项指标比较，CA125诊断肺癌的特异度最低，敏感度最高，差异有统计学意义(P=0.011)；联合检测与单项检测比较，敏感度明显升高，差异有统计学意义(P=0.008)。

2.3肺癌不同分期5种TM血清表达水平比较 见表3。晚期肺癌患者CEA表达水平明显高于中期和早期，差异均有统计学意义(P=0.001)；晚、中期肺癌患者CA199和CA125水平明显高于早期，差异有统计学意义(P=0.027)；早、中、晚期肺癌患者SCC与CYFRA21-1水平比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。对癌症分期与3种相关TM相关性进行分析，CA199(P<0.05,r=0.249)、CA125(P=0.05,r=0.216)、CEA(P<0.05,r=0.341)均呈正相关。

表3 肺癌不同分期5种TM血清表达水平比较[中位数(最小值～最大值) ]

注：与中期比较，*P<0.05；与早期比较，#P<0.05

2.4与肺癌不同分期有关的3种TM的敏感度比较 见表4。早期与中、晚期肺癌患者比较，CEA、CA199对于肺癌的诊断敏感度偏低，差异有统计学意义(P=0.032)，3项指标联合检测对肺癌诊断的敏感度有所升高，早期为52.63%，中期为75.00%，晚期为80.95%。

注:与中期比较，*P<0.05；与晚期比较，#P<0.05

2.5联合检测和单项检测对肺癌诊断3项指标的价值 见表5。SAA、CYFRA21-1、CEA具有低敏感度、高特异度的特点，诊断肺癌的准确率由高到低排列为CYFRA21-1、SAA、CEA，单项检测与联合检测比较，特异度、敏感度和准确率都有所不及，其中SAA联合CYFRA21-1对肺癌诊断的特异度、敏感度和准确率最高。

表5 3项指标单项和联合检测的特异度、敏感度和准确率比较(%)

3 讨 论

肺癌的病死率和发病率较高，且发病隐匿，早发现、早治疗对于肺癌的治疗有十分重要的意义。肺癌TM检测在临床检测肺癌中应用广泛，组合多样化，但是尚无最优的标志物检测群[6-8]。TM对肿瘤的检出率越高，目前临床认为对TM联合检测应控制在3种以内。在我国，SCC、CYFRA21-1、CA199、CA125及CEA联合检测应用广泛[9-11]。近年来，在肺癌诊疗中CA199、CEA、CA125应用最多,可以认为肺部疾病患者，CEA升高则患者肺部发生病变的概率较大；但是CA199在诊断肺癌中存在假阳性率，对鉴别良性肺疾病和肺癌几乎无帮助。SAA是一种急性时相反应蛋白，主要负责在血脂中运送高密度脂蛋白，肺癌患者SAA水平高于健康人群。

本文中肺癌组患者CEA水平明显高于健康对照组和肺部良性疾病组，差异均有统计学意义(P<0.05)，对非肺癌特异度和敏感度的诊断分别为93.55%和35.62%。CEA水平的表达与肺癌分期比较表明，其水平越高患者病情越严重，CEA不适合于检测早期肺癌[12]。CA125是一种高分子糖蛋白，微量表达于健康人血清中。健康对照组CA125表达水平最低，肺癌组最高，对肺癌诊断的特异度和敏感度分别为64.52%和60.27%。CA125单独诊断肺癌特异度较差，虽然敏感度较高但是难以区分肿瘤性质，在临床上需联合其他标志物进行检测。CA199存在于一些恶性肿瘤组织中，主要用于消化道肿瘤的诊断。肺癌组患者CA199血清表达水平最高，对肺癌诊断的特异度和敏感度分别为87.10%和35.62%，CA199在诊断肺癌中有十分重要的价值。

综上所述，SAA、CA125、CEA、SCC、CYFRA21-1、CA199可以鉴别肺部良、恶性肿瘤；单项TM检测对肺癌诊断的敏感度较低，联合检测可有效提高敏感度；CA199、CA125、CEA 3种TM均与癌症分期呈正相关，其中CEA有最高的相关性；肺癌血清TM早期升高不明显，具有较低敏感度，联合检测能够提高早期肺癌的检出率。SAA联合CYFRA21-1诊断效果最好。

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