RP-HPLC法测定平痤合剂中的黄芩苷的含量

覃俏峰，王志强

广西中医药大学第一附属医院药学部，广西南宁 530023

平痤合剂是是广西中医药大学第一附属医院皮肤科的经验方，该方由黄芩、金银花、枇杷叶、夏枯草、桑白皮、连翘、海浮石、甘草等中药组方而成，具有清肺热、驱风邪，院内用于痤疮治疗。方中黄芩能补清热燥湿、凉血解毒，尤善清肺热，是主药之一，测定其有效成分黄芩苷（C21H18O11）的含量应该可以有效控制该制剂的质量，参考《中国药典》（2015 年版）[1]，该实验采用高效液相色谱法对2016年3—8月配制的6个批次的平痤合剂中的黄芩苷进行含量测定[2-7]。该制剂原标准中仅有制剂的性状及一般检查项目，该方法为有效地控制该制剂的质量提供依据。

1 临床资料

1.1 仪器

LC-20AT高效液相色谱仪；SPD-20A紫外检测器；LC色谱工作站；GH-252型电子分析天平(日本)。

1.2 试药

实验药材均由柳州神农中药饮片厂提供，经鉴定均符合2015年版《中华人民共和国药典》规定。黄芩苷对照品（中国食品药品检定研究院提供；1107115-201318，供含量测定用，含量93.3%）；平痤合剂（按处方调配好中药，按操作要求及制法配制，备用），配制日期分别为：20160302、20160416、20160506、20160620、20160710、20160824，磷酸为分析纯，甲醇为色谱纯和分析纯，水为超纯净水。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

取黄芩苷对照品适量,精密称定,加流动相制成每1 mL 含 480 μg/mL,即得。

2.2 供试品溶液的制备

精密量取本品1 m,置25 mL容量瓶，用甲醇定容，经 0.45 μm微孔滤膜,即得。

2.3 阴性对照溶液的制备

取不含黄芩的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备。

2.4 色谱条件

色谱柱:AgiLentEclipse XDB-C18(250mm×4.6mm，5 μm); 流动相:甲醇 ：水：磷酸(47:53：0.2); 流速:1.0 mL/min;柱温:30℃;进样量:10 μL；检测波长 280 nm,在此色谱条件下,黄芩苷峰理论塔板数不小于2 500,与其他色谱峰分离度大于1.5,色谱图见图4。

2.5 方法专属性

按上述色谱条件，取空白溶液，进样10 μL，记录色谱图（图1）；取平痤合剂（黄芩阴性）溶液10 μL进样；记录色谱图（图2）。取黄芩苷对照品溶液10 μL；记录色谱图（图3）；取平痤合剂供试液10 μL；记录色谱图（图4）；结果表明，在上述色谱条件下，空白溶液不干扰黄芩苷的含量测定，平痤合剂（黄芩阴性）溶液不干扰黄芩苷的含量测定。

图1 空白溶剂高效液相色谱图

图2 平痤合剂（黄芩阴性）图

图3 黄芩苷对照品高效液相色谱图

图4 合剂高效液相色谱图

2.6 标准曲线与线性范围

分别精密量取黄芩苷对照溶液 5、2.5、2、1、0.5、0.25 mL至10 mL量瓶，加流动相至刻度，摇匀，得质量浓度分别为 240、120、96、48、24、12 μg/mL 的黄芩苷溶液，取上述各黄芩苷对照品溶液；分别进样10 μL。按2.3色谱条件测定峰面积，以浓度（X）对照品峰面积（Y）进行线性回归，回归方程为：Y=0.028X+0.805，r＝1（n＝6）；实验结果表明黄芩苷在 12～240 μg/mL 范围内呈良好线性，见表1。

表1 黄芩苷线性范围试验结果（n=6）

2.7 精密度试验

取供试品溶液，按上述色谱条件，重复进样6次,其相对保留时间稳定，记录峰面积，计算RSD为0.87%，见表2。

表2 精密度试验结果（n=6）

2.8 稳定性试验

精密吸取“2.2”项下的供试品溶液,室温下分别在0、2、4、8、12、24 h 测定, 记录峰面积, 计算其 RSD 为0.79%,表明处理后的供试品溶液室温下在24 h内稳定，见表3。

表3 稳定性试验结果(n=6)

2.9 重复性试验

精密量取同一批(批号20160302)，平行6份,按“2.2”项下的方法制备供试品溶液,依法测定,结果黄芩苷的平均含量为2 229 μg/mL,RSD为1.03%。见表4。

表4 重现性试验结果(n=6)

2.1 0加样回收率试验

精密称取已知含量的样品9份,每份0.5 mL，分为3组，每组3份，分别精密加入黄芩苷对照品溶液2.0,2.5,3.0 mL按“2.2”项下的方法制备供试品溶液,进样10 μL。测定回收率。

表5 回收率试验结果（n=9）

2.11 样品测定

按上述色谱条件对6批样品进行含量测定,结果见表6。

表6 不同批次含量测定结果

3 讨论

3.1 检测波长的选择

取黄芩苷对照品，加甲醇配制成一定深度的溶液，在200～400 nm波长范围扫描，结果在249 nm和282 nm处有吸收峰，最大吸收为282 nm，故选用280 nm为高效液相测定的波长。

3.2 流动相的选择

曾以甲醇-水-磷酸（50:50:0.3,V/V）等以不同流速考察[2-8]，结果对照品色谱峰有拖尾现象，经多次试验结果比较，流动相为甲醇-水:磷酸 (47:53:0.2,V/V)[1]时，黄芩苷峰峰形最佳，达到基线分享，和其它成份峰分离度好，满足含量测定要求，所以选择现在的流动相系统。

3.3 调定方法

黄芩中的黄芩苷为该类药品的药理活性成分，已有较为成熟的含量测定方法，如紫外分光光度法、HPLC、薄层扫描法、毛细血管电泳法等，其中HPLC操作快速、灵敏度高且国内外文献报道较多，是最为常用的测定方法流速考察[9]，采用高效液相色谱法对方中黄芩的黄芩苷进行含量测定[2-7]，具有简单、快捷、专属性强、灵敏度高、耐用性好的特点，适用于含黄芩苷的中药以及制剂的含量测定[10]。根据以上测定结果，本法测定平痤合剂中的黄芩苷含量应不低于2.2 mg/mL，该方法专属性强、稳定性高、重复性好，能有效地控制该制剂的质量。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2015：415.

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