理心汤对动脉粥样硬化心肌缺血大鼠生长因子的影响

孙 影 于清华 孙光伟

(吉林省中医药科学院，吉林 长春 130021)

积极有效的预防及防治结合可降低冠心病危害性，具有重要的社会意义及经济意义〔1〕。目前西医学治疗主要有药物治疗和血运重建治疗，而药物治疗效果不够满意，介入治疗仍无法完全克服支架术后再狭窄、延迟性血栓、微血管病变等问题，外科搭桥也受经费和创伤大等的限制。本研究通过观察以益气养血活血通络为法组方的理心汤对实验性动脉粥样硬化心肌缺血大鼠生长因子的影响，探讨理心汤治疗冠心病作用机制。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1动物 SD大鼠，雄性，111只，体重160～190 g，动物等级：SPF级；动物质量合格证号：11400700201068。

1.1.2药物 高脂饲料：胆固醇、胆酸钠、猪大油、白糖、丙基硫氧嘧啶，基础饲料由本实验室加工，供大鼠食用。维生素D3注射液批号：130419，盐酸异丙肾上腺素注射液批号：41170301，益心舒胶囊批号：20161003，辛伐他汀片批号：SP189。理心汤方药组成：人参、丹参、黄芪、川芎、当归、三七、莪术、郁金，加入6倍量水，煎煮2次，每次1.5 h，合并水煎液，浓缩，干燥，粉碎，等量递增法加入辅料适量制得(3.90 g生药/g)，由吉林省中医药科学院化学所徐雅娟课题组提供，接受日期：20161214。

1.1.3试剂 血小板衍化生长因子(PDGF)-B、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、转化生长因子(TGF)-β1、血管内皮生长因子(VEGF)，批号均为E20170301A，生产日期：2017.03，有效期至2017.09。以上酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒均为美国RD生物科学公司产品，上海源叶生物科技有限公司分装。

1.1.4仪器 JA2003B天平，上海越平科学仪器有限公司制造。JJ200精密电子天平、Y-2000型电子天平，常熟双杰测试仪器厂制造。DNM9602酶标仪，北京普朗新技术有限公司制造。KDC-2046低速冷冻离心机，安徽中科中佳科学仪器有限公司。752紫外光栅分光光度计，上海第三分析仪器厂制造。

1.2方法

1.2.1动物分组 随机分成空白对照组13只，模型组23只，辛伐他汀组、益心舒胶囊组及理心汤高、中、低剂量组各15只。

1.2.2建立动物模型〔2，3〕除空白对照组外，所有大鼠给予维生素D3注射液(60 U/kg)腹腔注射，在第2、4周再次腹腔注射维生素D3(10 U/kg)，共3次。同时给予高脂饲料 (4.0%胆固醇、0.5%胆酸钠、10.0%猪大油、5.0%白糖、0.2%丙基硫氧嘧啶，80.3%基础饲料) 喂养，连续4 w。第五周开始造模大鼠改为灌胃高脂乳剂(猪油10 g、吐温-80 3 g、丙二醇5 g、胆固醇5 g、胆酸钠1 g、丙基硫氧嘧啶0.5 g、蔗糖5 g、蒸馏水70.5 g)10 ml/kg，喂正常饲料，继续4 w。

1.2.3给药方式和剂量 各组造模第1天同时灌胃给药。空白对照组、模型组灌胃蒸馏水(10 ml/kg)；辛伐他汀组，予2 mg/kg辛伐他丁片灌胃；益心舒胶囊组，按照0.65 g/kg给予益心舒胶囊灌胃；理心汤高、中、低剂量组，分别灌胃15.00 g、7.50 g、3.75 g生药·kg-1·d-1(相当于临床等效剂量2.0、1.0、0.5倍)，至实验结束。每周称体重1次，根据体重调整给药剂量。8 w后，连续3 d多点皮下注射异丙肾上腺素，剂量为4 mg/kg，制备心肌缺血损伤大鼠模型。

1.2.4测定指标 第三次给予异丙肾上腺素后30 min，给予水合氯醛麻醉，腹主动脉采血后离心10 min，取血清备用，摘取心脏、肝脏和主动脉。酶联免疫法测定PDGF-B、bFGF、TGF-β1、VEGF。

1.2.5病理组织学观察 脏器称重后，取心脏左心室心肌、肝脏左叶、完整主动脉(从主动脉根部至髂总动脉分叉处)，用10%甲醛固定，石蜡包埋后连续切片，HE染色，光镜下观察各脏器病理改变。

1.3统计学分析 采用SPSS19.0软件行单因素方差分析。

2 结 果

2.1理心汤对各组PDGF-B、bFGF、VEGF和 TGF-β1含量的影响 与空白对照组比较模型组PDGF-B含量明显增加(P<0.01)，辛伐他汀组、益心舒胶囊组、理心汤高、中、低剂量组PDGF-B含量与模型组比较均有明显下降(P<0.05或P<0.01)。模型组bFGF含量与空白对照组比较有增加趋势，但差异无统计学意义(P>0.05)。辛伐他汀组、益心舒胶囊组、理心汤高、中、低剂量组均有降低PDGF-B含量趋势，但与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组比较，模型组VEGF含量明显增加(P<0.05)。辛伐他汀组、益心舒胶囊组、理心汤高、中剂量组VEGF含量与模型组比较均有明显降低(P<0.01或P<0.05)。模型组TGF-β1含量与空白对照组比较明显降低(P<0.05)。理心汤高剂量组有增加TGF-β1趋势，但与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 理心汤对实验大鼠PDGF-B、bFGF、VEGF和 TGF-β1含量的影响

与模型组比较：1)P<0.05，2)P<0.01，3)P<0.001；与辛伐他汀组比较：4)P<0.05，5)P<0.01，6)P<0.001；与益心舒胶囊组比较：7)P<0.05，8)P<0.01，9)P<0.001

2.2各组心脏、主动脉、肝脏病理检查结果 对照组心脏、肝脏与主动脉未见异常形态改变，心脏心肌细胞排列规整，未见坏死、水肿等形态改变；肝脏未见脂肪变性、未见空泡变性、主动脉各层组织规整、连续。模型组各脏器可见典型病变，心脏可见心肌坏死灶，可见心肌间质炎细胞浸润，间质疏松、水肿等改变；肝脏内肝细胞疏松变性、空泡变性，出现肝脏脂肪变性的形态改变；主动脉中膜内可见典型的钙化物质沉积、说明动物模型复制成功。辛伐他汀组心肌间质可见疏松、水肿等轻度改变，药物对肝脏脂肪变性的改善作用不明显，肝脏内仍可见脂肪变性，肝细胞疏松改变；主动脉内未见明显的钙化沉积；药物可以有效缓解心血管系统脏器的病变。益心舒胶囊组各脏器病变均有改善作用，心肌间质疏松、水肿等轻度改变，主动脉内可见中等程度的钙化沉积；肝脏内可见肝细胞疏松变性；药物可以有效缓解心血管系统脏器的病变。高剂量组各脏器病变治疗效果最佳，心肌间质仅见疏松、水肿等改变，主动脉内未见明显的钙化沉积。肝脏内脂肪变性程度减轻。中剂量组各脏器病变有一定的疗效，心肌间质疏松、水肿、炎细胞浸润等改变，主动脉内可见明显的钙化沉积。肝脏内脂肪变性程度减轻。低剂量组各脏器病变有一定的治疗效果，心肌间质疏松、水肿等改变，同时可见心肌细胞坏死改变；主动脉内未见明显的钙化沉积，可见动脉中膜细胞增生；肝脏内脂肪变性程度减轻。可见，理心汤可有效改善心脏、肝脏和主动脉损伤，以高剂量组治疗效果最佳。见图1。

图1 各组动脉粥样硬化心肌缺血病理照片(×400)

3 讨 论

现代研究证实〔4〕，PDGF可刺激结缔组织细胞的分裂增殖、细胞趋化和血管收缩等，参与动脉粥样硬化的发生和发展，同时可刺激动脉中膜平滑肌细胞向合成表型转变，具有促进平滑肌细胞增殖的能力。VEGF具有很强的促进血管内皮细胞分裂、增生和迁移，加速血管再生的能力，并能增强毛细血管的通透性。VEGF在正常心肌含量极低，心肌缺血、缺氧能刺激其表达〔5〕。理心汤能够明显降低PDGF-B和VEGF含量，表明其可能是通过抑制血管平滑肌增殖而起到保护心脏作用。本方为孙影主任医师临床经验方，主要用于胸痹病史较长，胸痛发作频繁，位置固定不移，疼痛明显者，瘀血痹阻较重，及血瘀兼有气血不足之象的患者，临床辨证属心气不足，血滞心脉。治疗以益气养血、活血通络为法，由人参、丹参、三七、黄芪等8味中药组成，对于冠心病心绞痛、冠状动脉支架植入术后心绞痛、冠状动脉支架植入术后再狭窄、冠心病多支血管病变不适合支架植入术及冠脉搭桥术患者，经多年临床验证，疗效确切。本文通过动物试验进一步研究理心汤治疗冠心病的作用机制，验证其客观疗效，为临床应用提供科学依据。

4 参考文献

1王宏宇.冠心病的合理干预策略——EUROPA试验的启示〔J〕.中国民康医学杂志，2005；17(2)：65-9.

2周 红，吴晓燕，袁艺标，等.三种剂量维生素D3结合高脂饲料建立大鼠动脉粥样硬化模型的比较〔J〕.中国动脉硬化杂志，2012；20(11)：995-8.

3张 宪，陈 阳.一种建立大鼠动脉硬化模型的方法〔J〕.中国医药指南，2015；13(3)：4-5.

4冯 海，张志文，陈学明.血小板衍化生长因子在动脉粥样硬化和支架再狭窄中作用机制的研究进展〔J〕.血管与腔内血管外科杂志，2016；2(6)：514-8.

5其其格.冠心病不稳定性心绞痛气虚血瘀证及炎症相关性的研究〔D〕.北京：北京中医药大学，2010.