原发性肝细胞癌组织中磷脂酶CE1和基质金属蛋白酶-14的表达及意义

廖文胜 李江发 何阳阳

(广西壮族自治区南溪山医院肝胆胰脾外科，广西 桂林 541002)

原发性肝细胞癌是肝细胞异型增生来源的肿瘤，病变常与肝炎病毒感染有关，病变形成后具有侵袭和播散的特征〔1〕。肿瘤在侵袭时常常与细胞间黏附和细胞外基质降解有关。基质金属蛋白酶(MMP)-14是细胞外基质中的重要蛋白，其在肿瘤中表达升高时具有降解细胞外基质的作用〔2〕。磷脂酶Cε(PLCE)1是近年认识的一种基因，是磷脂酰肌醇信号通路中的关键酶〔3〕，可以引起各种G蛋白水解，并且能调节肿瘤细胞迁移。本研究检测原发性肝细胞癌术后组织中PLCE1和MMP-14的表达量，分析其在不同临床病理特征中的差异。

1 资料与方法

1.1临床资料 2015年1月至2017年10月广西壮族自治区南溪山医院确诊为原发性肝细胞癌，并且行手术切除的患者61例为观察组，年龄49～86岁，平均59.1岁，其中男31例，女30例。纳入标准：①符合世界卫生组织病理学诊断标准，并经病理医师复诊并分型；②均为原发肿瘤；③无其他器官恶性肿瘤；④无消化系统手术史；⑤术前均未行放、化疗。选取上述患者中距肿物边缘>5 cm的正常肝组织新鲜组织18例为对照组，年龄48～81岁，平均57.2岁，其中男9例，女9例。两组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2流式细胞术检测PLCE1和MMP-14表达 两组均为术后新鲜标本，立即取材，置于75%酒精中固定48 h后，用手术剪将组织剪成碎末，在过滤网上轻搓组织，辅以生理盐水冲洗，取过滤过后的组织，2 000 r/min离心5 min后，取沉淀物，制备成单细胞悬液(1×106/ml)。每种抗体上机检测时均取1 ml单细胞悬液后，严格按实验步骤加入一抗、磷酸盐缓冲液(PBS)及荧光二抗后，上机检测，应用荧光指数(FI)计算结果。FI=(肿瘤中蛋白表达的荧光强度-对照样品平均荧光强度)/正常对照样品平均荧光强度。

1.3统计学方法 应用SPSS17.0统计软件进行χ2检验、t检验和线性相关分析。

2 结 果

2.1两组PLCE1和MMP-14蛋白表达量比较 两组PLCE1(观察组1.31±0.26，对照组1.00±0.15)和MMP-14蛋白表达量(观察组1.40±0.28，对照组1.00±0.27)差异有统计学意义(t=9.78，12.64；均P=0.000)。

2.2PLCE1和MMP-14在观察组不同临床特征中表达量比较 PLCE1和MMP-14表达量与病变脉管累犯和肿瘤最大径密切相关，PLCE1表达量与肿瘤增殖指数和炎细胞浸润程度密切相关(均P<0.05)。见表1。

表1 PLCE1和MMP-14在观察组不同临床特征中表达量的比较

2.3观察组PLCE1和MMP-14表达相关性 PLCE1和MMP-14表达呈正相关(r=0.50，P=0.039 3)。

3 讨 论

原发性肝细胞癌病变由类似肝细胞的肿瘤细胞组成，间质由衬覆单层内皮的血窦样腔隙形成，实质细胞可以形成条索状、假腺样和腺泡样、实性和硬化的形态〔4〕。PLCE1基因定位于染色体的10q23，是一个单拷贝基因，共有33个外显子，除包含血小板蛋白激酶C同源区、交换因子亚型和X区、Y区催化结构域外〔5,6〕，还含有细胞分裂周期25结构域和两个类风湿关节炎(RA)结构，具有鸟嘌呤核苷酸交换的特征，与蛋白的激活密切相关，激素、细胞因子及生长因子等均可以激活蛋白，使其发挥催化活性〔7,8〕。近年研究显示PLCE1的异常活化与肿瘤进展相关〔9〕。张晓娟等〔10〕发现PLCE1在肿瘤中高表达，且与临床分期、淋巴结转移及肿瘤最大径相关，认为PLCE1的升高可能成为食管癌早期诊断和判断预后的辅助指标。MMP-14是MMPs家族中的重要成员，具有前肽区、信号肽区、催化区、铰链区和类血红素蛋白结合区共5个功能区域，能活化MMP-2等MMP家族中的其他蛋白，MMP-14还具有直接分解基底膜中层黏连蛋白的作用〔11,12〕。也有观点认为MMP-14可以作用在肿瘤细胞周围的间质细胞，诱导间质细胞产生MMP-14原酶，该酶激活后可以降解Ⅳ型胶原，使肿瘤转移的屏障结构破坏，引起转移〔13,14〕。本研究结果提示PLCE1和MMP-14表达升高具有促进肿瘤形成的作用，即二者类似癌基因的功能，这种作用主要与PLCE1基因在12-O-十四烷酰氟波醋酸酯(TPA)的刺激下使肾素-血管紧张素系统(RAS)激活而引起的恶变有关，其恶变后肿瘤细胞失控性增生明显〔15〕。本文结果提示PLCE1和MMP-14二者高表达可以促进肿瘤生长，使肿瘤体积增大，对周围组织的破坏能力增加，促进局部蔓延的形成。二者与脉管累犯的相关性使PLCE1和MMP-14与肿瘤的转移直接相关，这种作用可能与PLCE1和MMP-14对内皮细胞的调节有关，使肿瘤细胞易于进入脉管，为肿瘤转移提供了便捷的通路，随着脉管内液体的流动，细胞易于定殖在其他组织和器官，形成转移瘤〔12，16〕。本文结果提示PLCE1是促进肿瘤细胞增殖的相关蛋白。PLCE1表达升高后，能使细胞停滞于幼稚阶段，肿瘤细胞趋于原始，肿瘤细胞异型性明显，细胞增生快，核染色深。本文结果提示PLCE1表达与肿瘤间质反应有关，间质反应在一定程度上提示肿瘤性病变，这也是病理医师诊断恶性肿瘤的直接证据，而PLCE1高表达促进肿瘤细胞周围炎性反应的发生，也使PLCE1与肿瘤细胞免疫和体液免疫功能联系在一起。PLCE1和MMP-14二者具有协同作用。二者的相关性可能与引起VEGF分泌〔1〕，促进肿瘤血管内皮细胞增殖有关，但是其具体机制有待证实。

4 参考文献

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