结直肠癌患者切除术后组织中SPY1蛋白表达变化及其临床意义

马仕虎

(江西省九江市第一人民医院普外科，九江 332000)

SPY1作为Speedy/RINGO家族中的一员，是一种新型的细胞周期蛋白依赖性激酶激活剂，能够介导细胞周期进程和细胞存活[1]。研究发现SPY1与肝癌、乳腺癌发生发展存在密切联系，现笔者通过探究结直肠癌患者切除术后组织中SPY1蛋白表达情况与临床病特征之间的关系，为探究SPY1参与结直肠癌发生发展提供依据，现报告如下：

1 材料与方法

1.1 标本来源 68例结直肠癌组织石蜡标本均来自我医院2015年1月-2016年1月收治的确诊为结直肠癌并行肿瘤外科切除术的患者，标本仅HE切片染色后病理确诊为原发性结直肠癌。入选标准：⑴标本切缘均≥1cm；⑵所有研究对象术前均未有放化疗治疗史、相应部位外科手术史；⑶所有患者临床资料完整。其中男41例，女27例；年龄41-73 岁，平均年龄（58.93±12.05）岁；结肠癌 40例，直肠癌28例；组织学类型：腺癌59例，黏液瘤4例，腺鳞癌3例，混合型癌2例；TMN分期情况：Ⅰ期15例，Ⅱ期17例，Ⅲ期29例，Ⅳ期7例。

1.2 方法 所有肿瘤组织以及癌旁组织标本均使用10%甲醛固定，石蜡包埋，常规脱蜡水化后进行EDTA抗原修复及微波修复。本实验免疫组化Envision法所用鼠抗人SPY1单克隆抗体由上海圣克鲁斯生物技术有限公司提供，对SPY1蛋白标记时采用PBS代替一抗作阴性对照，自身对照为阳性对照，免疫组化结果中，含SPY1蛋白的肿瘤细胞核呈现出棕褐色或棕黄色点状，操作人员在400×高倍镜下分别每个位点计数100个细胞，每例共计400个，记录视野下阳性细胞百分比：⑴阴性：视野下未见阳性染色细胞；⑵1分：阳性细胞占视野细胞总数1%-33%；⑶2分：阳性细胞占视野细胞总数34%-66%；⑷3分：阳性细胞占视野细胞总数67%以上。并记录染色强度：⑴0分：视野中未见着色；⑵1分：浅黄色；⑶2分：浅棕色；⑷3分：棕褐色。染色强度分数+阳性细胞百分比分数≥4为高表达，≤3为低表达。

1.3 统计学方法 采用SPSS 19.0统计学软件，计数资料采用卡方检验，计量资料采用T检验，P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 PSY1在结直肠癌组织中与癌旁组织中的表达情况 运用免疫组化Envision法检测68例结直肠癌组织与向相应部位癌旁组织中的SPY1蛋白表达情况，SPY1阳性染色主要为棕黄色，主要定位在细胞核，胞浆中显示少量阳性表达，免疫组化检测结果显示，SPY1在结直肠癌的阳性评分为（5.25±0.39），在癌旁组织中的阳性评分为 （1.47±0.23），SPY1蛋白在结直肠癌组织中表达评分明显高于相应癌旁组织中的表达评分（P<0.05）。

2.2 SPY1蛋白在结直肠癌组织中表达情况与结直肠癌患者临床病理特征的关系 SPY1蛋白在结直肠癌组中的高表达率为52.94%（36/68），无或低表达率为47.06%（32/68），癌旁组织中均为无或低表达。如表1所示，SPY1蛋白在结直肠癌组中的表达情况与肿瘤分化程度、TNM分期、肿瘤浸润程度与术前患者血清CEA水平有关，与性别、年龄、肿瘤部位、淋巴结转移无关。

3 讨论

结直肠癌是常见的消化道肿瘤之一，根据GLOBOCAN 2012数据统计显示，结直肠癌发病率为全球第三，仅次于肺癌、乳腺癌，而结直肠癌的死亡率为全球第三，仅次于肺癌、肝癌与胃癌[2]，其发病率与死亡率逐年上升，严重危害人们生命健康，但近年来，由于全球多个国家推行结直肠癌定期检查，故其死亡率上升趋势稍有减缓[3]，但仍不容乐观。而结直肠癌的发生发展与体内多种分子生物学作用机制共同作用的结果[4]，探究与结直肠癌发生发展中的相关基因及其蛋白表达产物的水平变化，进一步明确结直肠癌的发病机制，有助于发现结直肠癌的治疗新靶点。

表1 SPY1蛋白表达与临床病理特征的关系[n(%)]

SPY1是Speedy/RINGO家族重要成员，众所周知，正常细胞的细胞周期发生改变是细胞癌化的主要原因之一，而SPY1作为近年新发现的重要细胞周期调节蛋白[5]，McGrath DA等[6]研究发现细胞周期蛋白依赖性激酶（Cdk）是细胞分裂的主要驱动因子，是抑制异常增殖的重要治疗靶点，而Cdk酶活性受到SPY1的调控，SPY1蛋白结合并激活Cdk发挥调控G1/S期的进程刺激细胞增殖的作用。Lu S等[7]采用免疫印迹和免疫组织化学方法检测SPY1蛋白在卵巢癌中的表达，发现SPY1蛋白水平随着卵巢癌分级的增加而增加，而Kaplan-Meier曲线显示SPY1的过度表达与患者生存率降低显着相关。Zhang L等[8]采用免疫组织化学和western印迹分析检测SPY1在人胶质瘤组织和细胞系中的表达，发现SPY1在肿瘤组织和培养细胞中过度表达并与胶质瘤的恶性程度正相关，更重要的是，SPY1高表达与胶质瘤患者预后不良有关，提示SPY1可能是胶质瘤患者预后不良的独立预测指标。本研究发现SPY1蛋白在结直肠癌组织中高表达，在癌旁组织中低表达，提示其可能作为癌基因参与了结直肠癌的发生。与临床病理相关性分析中，SPY1蛋白的表达与结直肠癌的分化程度有关，分化等级高的结直肠癌组织阳性率明显高于分化等级低的，临床上结直肠癌的分化程度越高，预后越差，这也提示了SPY1可作为预测结直肠癌预后的指标之一，另一方面SPY1蛋白的表达与结直肠癌的TNM分期有关，TNM分期越晚，SPY1蛋白阳性率越高，也提示SPY1蛋白在结直肠癌的侵袭中有重要作用。但分析显示SPY1蛋白的高表达与结直肠癌淋巴结转移之间无显著性（P＞0.05），提示SPY1蛋白可能在肿瘤细胞的淋巴结转移过程中无明显作用，但仍需进一步研究。

综上所述，结直肠癌组织中SPY1蛋白表达异常增高，提示SPY1蛋白与结直肠癌的发生发展有着密切的联系，提示SPY1可能是结直肠癌的一项新的独立预后指标。

[1]刘坤，王志兴，张振华.Spy1蛋白在胃癌中的表达及临床意义[J].现代肿瘤医学，2017，25(19)：3101-3103.

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[5]Fei M，Hang Q，Hou S，et al.Cell adhesion to fibronectin downregulates the expression of Spy1 and contributes to drug resistance in multiple myeloma cells[J].Hematol，2013，98(4)：55.

[6]McGrath DA，Fifield BA，Marceau AH，ETC.Structural basis of divergent cyclin-dependent kinase activation by Spy1/RINGO proteins[J].EMBO J，2017，36(15)：2251-2262.

[7]Lu S，Liu R，Su M，et al.Spy1 participates in the proliferation and apoptosis of epithelial ovarian cancer[J].Mol Histol，2016，47(1)：47-57.

[8]Zhang L，Shen A，Ke Q，et al.Spy1 is frequently overexpressed in malignant gliomas and critically regulates the proliferation of glioma cells[J].Mol Neurosci，2012，47(3)：94.