标本溶血对神经元特异性烯醇化酶测定结果的影响

杨丽珍 龙庭燕 黎宇

摘 要：目的 探讨标本不同程度溶血对神经元特异性烯醇化酶（NSE）测定结果的影响。方法 选取我院80例健康体检者的全血标本作为观察对象，采用德国罗氏诊断有限公司生产的Roche全自动电化学发光免疫分析仪测定同一标本在溶血前及溶血后血清中NSE的浓度，比较各组之间的差异性。结果 轻度溶血组与重度溶血组的血清NSE浓度均高于对照组的血清NSE浓度，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 不同程度的溶血标本对血清NSE浓度的测定均有影响，检测时应尽量避免标本溶血。

关键词：溶血 NSE；电化学发光免疫分析法；测定；影响

中图分类号：R446.11+2 文献标识码：B DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.08.066

文章编号：1006-1959（2018）08-0180-02

Effect of Hemolysis on the Determination of Neuron-specific Enolase

YANG Li-zhen，LONG Ting-yan，LI Yu

（Department of Blood Transfusion，Liuzhou Workers Hospital，Liuzhou 545005，Guangxi，China）

Abstract：Objective To investigate the effects of different levels of hemolysis on neuron specific enolase（NSE）.Methods The whole blood samples of 80 health examiners in our hospital were selected as the object of observation.The Roche full automatic electrochemiluminescence immunoassay analyzer produced by the German Roche Diagnostics Ltd was used to determine the concentration of NSE in the same specimen before and after hemolysis and to compare the differences between the groups.Results The serum NSE concentration in the mild hemolysis group and the severe hemolytic group was higher than that in the control group （NSE），and the difference was statistically significant（P<0.05）.Conclusion Different degrees of hemolysis specimens have an effect on the determination of serum NSE concentration，and hemolysis should be avoided when testing.

Key words：Hemolytic NSE；Electrochemiluminescence immunoassay；Determination；Effect

神經元特异性烯醇化酶（NSE）是神经元和神经内分泌细胞内特有的一种酸性蛋白酶，可作为神经细胞损害的标志物，具有高特异性和高敏感性的特点[1，2]。常应用于神经母细胞瘤、小细胞肺癌、嗜铬细胞瘤、新生儿缺氧缺血性脑病等疾病的诊断、病情监测、疗效评估和预后观察等[3]。在日常的检验工作中，有时会出现血清NSE测定结果与患者临床表现不符的情况，究其原因可发现这些标本都发生了不同程度的溶血，而标本溶血是否会对血清NSE检测造成影响，本文针对此问题做次实验，意在观察溶血标本对血清NSE测定结果的影响状况。

1资料与方法

1.1一般资料 选取2017年8月～2017年10月广西柳州市工人医院健康体检者80例的全血标本作为研究对象。其中男性50例，女性30例，年龄20～40岁，平均年龄（29.64±8.71）岁，要求体检者各项身体指标基本正常，无相关脑病史，无相关药物服用史，且标本无溶血、脂血、黄疸等异常情况。

1.2标本溶血程度分级 根据肉眼观察标本溶血程度及血红蛋白浓度分为三组，轻度溶血组（Hb 0～10 g/L），中度溶血组（Hb 11～20 g/L），重度溶血组（Hb 21～30 g/L），因为人为制造溶血，溶血程度较难控制，故只设置轻度溶血组和重度溶血组。

1.3仪器与试剂 采用德国罗氏诊断有限公司生产的Roche MODULAR E601及NSE测定配套试剂盒，日本希森美康公司生产的SysmexXN-3000全自动血液分析仪及其配套试剂盒，湖南湘仪L500低速离心机。

1.4方法 检测方法采用电化学发光免疫法（ECLIA），该方法原理是双抗体夹心法。其实验方法为，选取符合实验要求的体检者的血液标本，立即以3000 r/min离心10 min分离血清，用Roche MODULAR E601测定其血清NSE浓度并记录检测数据，将其设为对照组。然后用带针头的注射器轻微抽打所有血液标本1～2次，使其均发生轻微溶血，采用SysmexXN-3000全自动血液分析仪测定其血红蛋白浓度，控制血红蛋白浓度在0～10 g/L，以3000 r/min离心10 min分离血清，使用Roche MODULAR E601测定其血清NSE浓度并记录检测数据，将其设为轻度溶血组。再用带针头的注射器用力抽打所有血液标本10次以上，使其溶血程度明显增大，采用SysmexXN-3000全自动血液分析仪测定其血红蛋白浓度，控制血红蛋白浓度在20 g/L以上，以3000 r/min离心10 min分离血清，使用Roche MODULAR E601测定其血清NSE浓度并记录检测数据，将其设为重度溶血组。最后将两组溶血标本的数据与对照组用统计学方法比较。以上检验操作均按厂家提供的仪器及试剂说明书和检验科制订的SOP进行，要求室内质控在控，试剂无过期现象。

1.5统计学方法 采用SPSS16.0统计软件包处理实验测定数据，计量资料采用（x±s）表示，组间比较采用t检验，P<0.05表示差异具有统计学意义。

2结果

轻度溶血组与重度溶血组的血清NSE浓度均高于对照组的血清NSE浓度，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

3讨论

溶血是如何导致NSE的检测结果升高，其分析原因为，血液红细胞中存在大量的NSE，其含量是血含量浓度的817倍[4]。当标本发生溶血时，红细胞膜遭到破坏，其胞质中含量较高的的NSE便释放到血清中，势必引起血清中NSE浓度增高[5，6]。本次试验采用电化学发光免疫法，其基本原理是双抗体夹心法，即生物素化人抗NSE的单克隆抗体和钌标记的抗NSE的单克隆抗体与标本混匀，形成夹心復合物，再加入链霉亲和素包被的微粒，通过生物素和亲和素的特异性作用将夹心复合物结合到磁性微粒上，与检测反应使用的碱性溶液中的三丙胺（TPA）反应，该反应中由于磁性微粒被电极下的磁铁吸附而留在电极板表面，在加压的阳性电场条件下，复合物与三丙胺发生氧化还原反应，在该反应中NHS和TPA两种电化学物质可同时失去电子发生氧化反应，在此过程中发射光子，检测免疫反应体系中的光量子数，即可得知待检物的浓度。当标本发生溶血时，红细胞释放至血清中的NSE也会与生物素化人抗NSE的单克隆抗体和钌标记的抗NSE的单克隆抗体结合生成免疫复合物，参与到免疫反应体系中，导致仪器检测到的NSE含量比血清实际的NSE含量明显增高。

通过本次研究，轻度溶血组与重度溶血组的NSE测定结果分别与对照组NSE测定结果相比较，差异均具有统计学意义（P<0.05）。由此可见，标本溶血会对NSE测定造成影响，这种影响会随着标本溶血程度的增大而使NSE的检测结果升高。

综上所述，标本溶血对NSE测定有影响，尤其是重度溶血标本，溶血会使血清NSE浓度升高，因此应尽量避免使用标本溶血做检测。如何才能有效控制溶血标本的发生，这就需要从标本流转的各个环节上注意，对于护理人员，应规范采血，正确执行采血流程操作。对于送检人员，在运送标本的过程中应避免摇晃和碰撞，及时送检。对于检验工作人员，应拒绝接收溶血标本，严格遵守检验操作规程。

参考文献：

[1]王广斌，季泰令.S100B蛋白、NSE作为脑损伤标志物的研究进展[J].中国老年学，2011，31（5）：890-892.

[2]王琨，李彦敏.NSE、S-100蛋白与脑损伤关系的研究[J].脑与神经疾病杂志，2009，17（5）：396-398.

[3]陈海斌，梁业宾，黄慧嫦，等.标本溶血对电化学发光免疫法结果的影响[J].检验医学，2012，27（8）：651-653.

[4]吴坤芳，蔡玉玲.红细胞内神经元特异性烯醇化酶检测[J].中国实验学诊断，2015，19（10）：1762-1763.

[5]龙跃兵，朱伟斌，章美燕.溶血对生化检验结果准确性的影响及校正方法的探讨[J].广东医学，2011，32（12）：1562-1563.

[6]武春梅，李玲，徐丽萍，等.溶血和标本保存条件对血清NSE检验结果的影响[J].国际检验医学杂志，2013，34（19）：2591-2593.

收稿日期：2017-12-13；修回日期：2017-12-26

编辑/高章利