临产母猪紧急接种猪传染性胃肠炎+猪流行性腹泻二联活疫苗（HB08+ZJ08株）对初生仔猪保护效果观察

刘 浩，韩永刚，鲁 莹

（1.陕西省动物卫生监督所，陕西 西安 710000；2.汉中市汉台区畜牧兽医中心，陕西 汉中 723000；3.汉中市动物疫病预防控制中心，陕西 汉中 723000）

猪流行性腹泻（Porcine Epidemic Diarrhea,PED）是由猪流行性腹泻病毒引起的一种高度接触性肠道传染病，其特征为体温升高、厌食、呕吐、腹泻及快速脱水[1]。临床症状和病理变化与猪传染性胃肠炎极为相似。猪流行性腹泻病毒（PEDV），属于冠状病毒科冠状病毒属。到目前为止，还没有发现该病毒有不同的血清型。本病毒对乙醚、氯仿敏感。病毒粒子呈现多形性，倾向圆形，外有囊膜。从患病仔猪的肠灌液中浓缩和纯化的病毒不能凝集家兔、小鼠、猪、豚鼠、绵羊、牛、马、雏鸡和人的红细胞。猪舍的环境温度可影响猪体内病毒的繁殖，在8～12℃的环境中比30～35℃的环境中产生的毒价高，这可能是本病在寒冷季节流行的一个重要因素。病毒不耐热，在4℃以上不稳定，56℃加热45 min，65℃加热10 min即死亡。

相反在4℃以下的低温，病毒可长时间的保持其感染性。在阴暗处7 d仍保持其感染力。肠道内的病毒在-20℃可保存6个月，在-18℃保存18个月仅下降一个对数滴度。病毒在pH 4～8稳定，pH 2.5时则被灭活。对光敏感，在阳光下曝晒6 h即被灭活。紫外线能使病毒迅速灭活。该病1971年首发于英国，20世纪80年代初我国陆续发生本病。2010年10月以来，猪流行性腹泻在中国和世界其他主要养猪国家大面积流行，在东亚及北美洲地区流行程度尤剧，造成养殖场较大程度损失，已成为哺乳仔猪高死亡率的主要原因之一。

当前市场商品化猪流行性腹泻活疫苗毒株分别为1976年比利时分离的Group3基因型CV777株和2008年中国浙江分离的Group1基因型ZJ08株[2]。两者S1基因与当前流行株的同源性分别为：CV777，93.3%；ZJ08 株，95%～100%[4]。由于当前流行株与中国早期流行株和疫苗毒株亲缘关系并不近，为有效控制疫病发生、降低初生仔猪死亡率、减少猪场经济损失，笔者在2016年12月至2017年3月之间，选择与当前流行株同源性较高的Group1基因型ZJ08株猪流行性腹泻活疫苗对9个发病猪场进行了紧急接种试验，均取得较为理想的控制效果。为积累该病的防控技术资料，提高规模猪场对本病的防控水平，现将经实验室病原学确诊的两个场控制情况综述如下。

2016年12月中旬和2017年10月底A、B两猪场反映本场产房仔猪和母猪均出现以厌食、水样腹泻、呕吐为主要临床症状的疫病。呕吐多发生于吃食或吃奶后。症状的轻重随年龄的大小而有差异，年龄越小，症状越重。7日龄内的新生仔猪发生腹泻后1～3 d，呈现严重脱水而死亡，死亡率可达90%～100%。母猪体温正常或稍高，精神沉郁、委顿，呈厌食和持续性腹泻。经流行病学调查、现场解剖和实验室检测，综合判断为暴发猪流行性腹泻。经采取紧急接种猪传染性胃肠炎+猪流行性腹泻二联活疫苗（HB08+ZJ08株）紧急接种等一系列综合防控措施，两场均于紧急接种7～10 d后产房初生仔猪发病停止，生产逐步恢复稳定。

1 基本情况

A场为2013年3月新建场地投产的猪场，正常母猪存栏规模为400头，投产后场内生产一切正常；未免疫过腹泻疫苗。2016年12月10日左右，产房母猪发现个别出现腹泻症状，初生仔猪未发病。场内技术人员误判为其他因素引起，未引起足够重视，1周后产房母猪腹泻比例上升，达到70%，同时仔猪出生当日发病，快速死亡，死亡率90%～100%。兽医技术人员对母猪、仔猪使用抗生素治疗均没有取得效果。

B场为2006年建场投产，正常母猪存栏规模为550头。2017年9月10日左右，全场母猪普免猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、轮状病毒三联活疫苗，10月24日产房母猪发现个别出现腹泻症状，初生仔猪随即发病。初生仔猪通常在出生当日发病，快速死亡，死亡率90%～100%。技术人员对母猪、仔猪使用抗生素治疗均没有取得效果。

2 解剖症状

病死仔猪胃内有大量凝乳块，眼观变化仅限于小肠，小肠扩张，内充满黄色液体，肠系膜充血，肠系膜淋巴结水肿，小肠绒毛缩短。组织学变化，见空肠段上皮细胞的空泡形成和表皮脱落，肠绒毛显著萎缩。

3 实验室检测

采集病死猪肠内容物、胃内容物及呕吐物等部位病料，送天津众联检测实验室（第三方检测机构）按照PCR标准核酸提取方法，各取等量病料混匀提取核酸，进行实验室RT-PCR检测。检测结果如图1—图2、表1所示。

图1 A场PEDV病原学检测结果

图2 B场PEDV病原学检测结果

表1 病原学检测结果统计

RT-PCR检测结果表明，A场送检的病死猪肠内容物样品2份，猪流行性腹泻病毒核酸均检出阳性；提醒该场猪群可能存在猪流行性腹泻的感染。

RT-PCR检测结果表明，B场送检的病死猪肠内容物样品5份、仔猪呕吐物3份、肠系膜淋巴组织5份，除1份呕吐物外其余样品猪流行性腹泻病毒核酸均检出阳性；且呕吐物和组织样品各检出圆环病毒2型核酸阳性各1份；提醒该场猪群可能存在猪流行性腹泻和猪圆环病毒病的双重感染。

两场的样品均未检出猪瘟、伪狂犬病核酸阳性样品，提示A、B两场送检猪群猪瘟、伪狂犬病感染压力较小，防控状况良好。

结合临床症状，解剖及病原学检测和疫病流行病学综合分析，上述猪场均为猪流行性腹泻病例，且B场猪群还存在猪圆环病毒2型的混合感染。

4 防制措施与效果

4.1 立即封群并强化生物安全隔离措施，强化全场消毒措施，尽量减少横向传染。

4.2 控制继发细菌感染，吸附肠内毒素。采用福欣（10%多西环素）1 000 g+普杆新（10%阿莫西林）1 000 g+霉毒净（以酵母细胞壁粉为主）2 000 g拌料1 000 kg，连续饲喂7 d，控制继发细菌感染，降低肠内毒素对肠壁的刺激，缓解腹泻症状。

4.3 采用猪传染性胃肠炎+猪流行性腹泻二联活疫苗（HB08+ZJ08株）对临产7 d以上的母猪进行紧急免疫，剂量为2头份/头。对所有临产前3～5 d的母猪间隔1 d，注射两次猪用干扰素，每次5 mL。

经采取上述综合防治措施后，以上两场临产前7～8 d注射疫苗母猪产仔后，初生仔猪腹泻发病率降低为20%～30%（个体），且腹泻仔猪死亡率由之前的90%～100%降低至10%以下。临产前10 d进行腹泻二联活疫苗紧急注射的母猪，所产仔猪未继续发病。母猪疫苗注射1周后整群精神转好，采食量上升，防治效果较为理想。

5 分析

5.1 利用RT-PCR和基因测序技术，分别对猪流行性腹泻病毒疫苗株（PEDV-ZJ08株）和猪传染性胃肠炎病毒疫苗株（TGEV-HB08株）的主要毒力基因S1基因区域进行RT-PCR扩增和测序，并利用分子进化分析软件与临床流行毒株进行同源性和进化树分析，结果表明PEDV-ZJ08株和TGEV-HB08株与我国当前流行毒株的同源性分别为95%～97%、97%～99%之间，提示PEDV-ZJ08株和TGEV-HB08株与我国流行毒株高度同源。

5.2 猪流行性腹泻疫苗通常主要对怀孕后期的母猪进行跟胎免疫，给初生仔猪提供有效保护。由于流行性腹泻病毒是一种消化道感染病毒，有明显的肠道组织嗜性，因此母源抗体的保护作用除体液免疫和细胞免疫的作用外，更主要依靠局部肠黏膜免疫的分泌型IgA（Secretory immunoglobulinA,SIgA），我国目前所使用的商品化疫苗以灭活苗为主，肌肉注射通常不能有效激发机体的黏膜免疫应答，分泌足够的SIgA，可能是灭活疫苗免疫保护效果不佳的原因之一[5]。因此怀孕母猪免疫同源性高的活疫苗是防治本病的主要措施。

5.3 黏膜免疫在抵御外界病原微生物的侵袭中发挥重要作用。分泌型IgA是黏膜免疫系统的主要效应分子，主要存在于泪液、唾液、乳汁和呼吸道、消化道及泌尿生殖道等黏膜表面分泌液中。SIgA合成和分泌受多种因素的影响和调节。在肠黏膜局部中CD4+T细胞可分为主要增强免疫功能的辅助性T细胞（Th）1和增强抗体反应的Th2细胞。Th1细胞分泌白细胞介素（IL）2、γ 干扰素（IFN-γ）。Th2 细胞分泌 IL4、IL5、IL6和IL10。IL2、IL4、IL5、IL6和IL10促进mIg阳性B细胞分化为浆细胞，提高IgA分泌量。Mellman等报道IFN-γ和肿瘤坏死因子（TNF）能增强SIgA的转运，从而增加SIgA分泌量[6]。因此可以对临产前母猪补充外源性IFN-γ有利于提高初乳中SIgA含量，提高初生仔猪防控猪流行性腹泻的临床效果。

[1]Pensnert M B,De Bouck P.A new coronavinis-like particle associated with diarrhen in swine[J].Archives of virology,1978,58(3)：243-247.

[2]杜晓莉，王一成，吴润，等.2010—2013年浙江省猪流行性腹泻病毒临床检测及PEDV-S基因型分析[J].浙江农业学报，2014，26（3）：581-587.

[3]孙莹.基因2b亚型猪流行性腹泻病毒变异株的分离鉴定和疫苗研制[D].扬州：扬州大学，2017.

[4]陈静.猪流行性腹泻病毒变异株与经典疫苗株S蛋白免疫原性差异分析[D].郑州：河南农业大学，2015.

[5]De Arriba M L,Carvajal A,Pozo J,et al.Mucosal and syslemic isotype-specific antibrly responses and protection in congventional pigs exposed to virulent or attenuated porcine epidemic diarrhoea virus[J].Telerinary immunology and immunopathology,2002,85(1-2)：85-97.

[6]曾常茜.分泌型IgA在黏膜抗感染中的应用[J].北华大学学报（自然科学版），2005，6（1）：33-35.