ZNF804A基因多态性对汉族精神分裂症患者帕利哌酮血药浓度的影响*

苏 邹 丁 迎 陈婷婷 徐 寅 王程强

帕利哌酮缓释片是一种新型抗精神病药物，主要是通过拮抗多巴胺D2受体和5羟色胺受体，用于治疗精神分裂症［1］。但是帕利哌酮的治疗窗较窄，不同患者对该药的有效剂量及不良反应的差异很大。检测血药浓度可以指导调整药物剂量，从而提高用药的有效率及安全性。

有研究显示，锌指蛋白804A基因（ZNF804A）多态性与精神分裂症易感性及抗精神病药物疗效有着密切的关系［2］。ZNF804A基因可以控制突触形成、神经突增生、神经元迁移，该基因在中枢神经系统发育中起着重要的作用［3］。ZNF804A基因能够调控精神分裂症相关基因的表达，如多巴胺D2受体、儿茶酚胺氧化甲基转移酶（COMT）、磷酸二脂酶 4B（PDE4B）基因［4］。因此，本研究初步探讨ZNF804A rs1344706基因多态性在汉族精神分裂症患者的分布，以及对帕利哌酮血药浓度的影响，为临床的合理用药提供参考。

1 对象与方法

1.1 对象 选取2015年1月～2016年1月在武汉市第二精神病医院门诊就诊的汉族精神分裂症患者。纳入标准：（1）符合美国精神障碍诊断与统计手册第4版（DSM-Ⅳ）关于精神分裂症的诊断标准，均由两名精神科主治或以上医师共识诊断；（2）原籍湖北，汉族人群；（3）阳性和阴性综合征量表（PANSS）总分≥60分；（4）年龄18～60岁，性别不限；（5）病程1个月以上、5年以下首发或复发精神分裂症患者；（6）停用抗精神药物1周。排除标准：（1）利培酮、帕利哌酮过敏者；（2）重大或慢性躯体疾病，神经系统或其他精神障碍患者；（3）妊娠或哺乳期妇女；（4）药物或酒精依赖患者。共入组患者106例，其中男60例，平均年龄（36.88±8.81）岁，平均体质量（54.34±10.08）kg；女46例，平均年龄（38.00±5.90）岁，平均体质量（55.65±10.95）kg。本研究经武汉市第二精神病医院医学伦理委员会批准，所有患者签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 治疗方法 患者口服帕利哌酮缓释片（规格为每片3 mg，国药准字 J20140068）。初始剂量为6 mg／d，以后根据需要调整剂量至9～12 mg／d。治疗过程中，不合用其他抗精神病药物。若患者出现不良反应，可酌情使用镇静催眠药。所有患者在服药2周后，体内帕利哌酮血药浓度已达到稳态。于次日清晨空腹抽取静脉血，EDTA抗凝，离心10 min后，应用全自动药物浓度分析仪（德国西门子公司），采取酶放大免疫法检测帕利哌酮血药浓度。每份样本测2次，取平均值。

1.2.2 DNA提取与基因多态性分析 采用DNA试剂盒（上海天根生物有限公司），依说明书提取全基因组DNA。聚合酶链扩增反应-限制性长度片段多态性（PCR-RFLP）技术检测ZNF804A rs1344706位点的多态性。引物由上海生物工程公司合成，引物名F：序列5’-3’（GAATCTAGAGTCATGCAGG）；引物名 R：序列5’-3’（CAAGTTATTCTCTAGAGTCC）。DNA扩增 PCR总体积为25μl：DNA模板2μl，上下游引物各1μl，dNTP 3μl，10×PCR缓冲液 5μl，Taq酶 0.3μl，Mgcl23μl，加 ddH2O至25μl。PCR反应条件：96℃预变性 4 min，94℃ 40 s，60℃ 30 s，70℃ 30 s，30个循环，72℃10 min，40℃保存。扩增产物片段为250 bp。所有PCR产物采用直接测序方法检测ZNF804A rs1344706多态性，该步骤由上海生工有限公司完成。1.2.3 统计学方法 用SPSS18.0进行统计分析。计量资料的正态性检验用Kolmogorov-Smirnov检验，正态分布资料采用x±s表示。通过单因素方差分析比较不同基因型血药浓度。通过多元线性回归分析患者性别、年龄、体质量、日剂量、遗传多态性对帕利哌酮血药浓度的影响。以P＜0.05为差异有统计学意义

2 结果

2.1 哈迪－温伯格平衡检测（Hardy-weinberg） 精神分裂症患者ZNF804A rs1344706基因型分布符合哈迪-温伯格平衡。不同基因型患者性别、年龄、体质量比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 不同基因型汉族精神分裂症患者基本情况

2.2 基因多态性与帕利哌酮血药浓度的相关性分析

不同基因型患者日剂量比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。ZNF804A rs1344706不同基因型对应的血药浓度比较差异有统计学意义（F＝6.442，P＝0.002），进一步两两比较，TT型血药浓度低于GG型、GT型（P＜0.05）。见表 2。

表2 基因多态性对帕利哌酮标准化血药浓度的影响（x±s）

2.3 多元线性回归分析帕利哌酮血药浓度的影响因素 通过多元线性回归分析患者性别、年龄、体质量、日剂量、ZNF804A rs1344706G／T多态性对帕利哌酮血药浓度的影响，结果显示性别、日剂量、ZNF804A rs1344706G／T多态性均是影响帕利哌酮血药浓度的影响因素（adjR2＝0.369，P＝0.000）。见表3。

表3 多元线性回归分析帕利哌酮血药浓度

3 讨论

精神分裂症病因及机制未明，目前已提出神经递质失 调［5］、基因因 素［6］、神 经 发 育 假 说［7］等 机制。ZNF804A基因与神经发育假说密切相关［8］。ZNF804A基因由4个外显子和3个内含子组成，编码了一个C2H2型锌指结构蛋白804A。ZNF804A是一种转录因子，可以与COMT核染色质启动子区域直接作用，从而上调COMT基因的表达［9］。COMT是一种儿茶酚胺代谢酶，也是中枢神经元外多巴胺降解酶［10］。COMT的缺乏往往导致多巴胺水平改变。因此，ZNF804A基因与多巴胺水平有着密切的关系。ZNF804A基因可能会上调COMT基因，最终导致多巴胺D2受体、磷酸二脂酶4B（PDE4B）基因转录的减少。PDE4B减少，可以提高NMDAR介导的信号通路中的CAMP，从而发挥抗抑郁作用［11］。有研究显示，rs1344706位点中等位基因（T）与ZNF804A mRNA的高表达相关，但在等位基因表达分析中发现其SNP不是导致其高表达的原因［12］。而且，在妊娠中期的胎脑组织中发现，等位基因（T）导致了ZNF804A基因表达的减少［13］。通过多元回归分析，本研究发现TT基因型患者血药浓度低于GG型、GT型。其原因可能是等位基因（T）导致了ZNF804A基因表达的减少，从而抑制COMT基因的表达，导致多巴胺D2受体、磷酸二脂酶4B（PDE4B）表达量增多。说明TT型可能需要更多的剂量才能取得疗效，与已有文献结果一致［14］。

本研究还发现，患者的性别、日剂量对血药浓度有影响。随着剂量的增加及服药时间的延长，帕利哌酮血药也随着增加，与已有文献结果一致［15］。多元线性回归分析显示：以男性赋值为1，女性赋值为2，在相同剂量下女性的血药浓度高于男性。其原因可能与女性体内的雌激素有关。有临床研究表示，雌激素联合氟哌啶醇治疗精神分裂症优于安慰组［16］。动物实验也证实，雌激素在治疗精神分裂症可能有临床意义［17］。还有可能与女性脂质腔隙大，更容易蓄积脂溶性抗精神病药物，导致药物消除半衰期延长。

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