离子色谱法连续测定乳制品中的NO-2和NO-3分析

□ 方富良 李 娜 杭州贝因美营养品有限公司

硝酸盐、亚硝酸盐均为典型的护色剂，常被添加到乳制品中，但对于亚硝酸盐而言，其能够与组胺类物质发生反应，生成致癌物质，而针对硝酸盐来讲，其在细菌作用与影响下，能还原成亚硝酸盐，硝酸盐通常表现为亚硝酸盐的毒性，所以，食品卫生要求对亚硝酸盐及硝酸盐用量进行严格控制。当前，测定乳制品中硝酸盐的方法有镉柱法，而测定亚硝酸盐的方法主要有盐酸萘乙二胺法、示波极谱法，除此之外，还有离子色谱法、催化光度法等。本文就色谱法连续测定乳制品中的NO-2和NO-3方法进行探讨。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

选用市场上售卖的奶制品；NO-3与NO-2标准储存液（1 000 mg/L）；Ag2O（德国Merck公司）；超纯水、乙酸及Na2CO3均购自国药集团化学试剂有限公司；尼龙滤膜购自英国Whatman公司，规格为0.45 μm。

1.2 仪器与设备

DX-600型离子色谱仪（美国Dionex公司产）；Beckman AvantiJ-25I型高速冷冻离心机（美国Beckman公司产）；TGL-16C离心机（上海安亭科学仪器厂产）；HH数显恒温水浴锅（金坛市金城国胜实验仪器厂产）。

1.3 方法

（1）色谱条件。运用Dionex Ion Pac AS9-HC分析柱，型号为4 mm×250 mm；淋洗液选用9.0 mmol/L Na2CO3溶液，开展抑制电导检测，电流设定为50 mA，进样量控制在25 μL。（2）绘制工作曲线。运用超纯水，稀释NO-2、NO-3标准储存液，形成9个不同的质量浓度标准系列，即 100、20、5、2、0.2、0.08、50、10、0.4 mg/L，依照上述色谱条件实施测定，各质量浓度均连续进行4次进样，求出峰面积的平均值。把质量浓度当作横坐标，而峰面积作为纵坐标，至此便可完成标准曲线的绘制。（3）样品前处理。取200 g乳制品，充分混匀，精取10.0 g，置入具塞三角瓶中（100 mL），加入温度为30 ℃的去离子水100 mL，充分混合，分为3组，静置10 min，然后均超声30 min。将水提液（40 mL）转移到低温冷冻离心管中（50 mL），以12 000 r/min进行实时离心操作，时间为10 min，趁冷，将中间的清液取出，置入具塞试管中，备用。移液管取清液4.0 mL，置入塑料离心管中，将体积分数为0.9%的乙酸溶液1.0 mL晃匀，静置，同转速进行离心处理，时间为6 min，从中精取上清液3.0 mL，置入离心管，另将0.1 mL的NaOH溶液加入其中，晃匀，加入Ag2O，剂量为17～19 mg，取上清液，稀释2倍进样[1]。

1.4 计算

依据如下公式计算出样品中的NaNO3、NaNO2含量：

在公式中，V表示的是样品溶液的体积；m表示的是样品质量；r表示的是稀释倍数；M表示的是摩尔质量（g/mol）；C表示的是待测溶液的质量浓度（mg/L）。

2 结果与分析

2.1 选择色谱柱

本实验所选用的是离子交换柱（AS9-HC型），此色谱柱能够在比例为10 000:1的CI-:NO-2下，成功分离CI-与NO-2。因此，将CI-所造成的干扰除去，不额外添加Ag2O，防止Ag2O过量而损坏色谱柱[2]。

2.2 线性范围及精密度实验

当 在 0.08～ 100 mg/L，NO-2与NO-3标准溶液的质量浓度与峰面积之间有较好的线性关系。

2.3 最低检出限

NO2标准溶液为0.04 mg/L时能检出，而NO3为0.08 mg/L时能检出。运用本方法对净化样品进行处理后，不稀释进样，样品当中的NO2检出限为0.5 mg/L，而NO3为1.0 mg/L。NO2＜本方法的检出限0.5 mg/L，NO3＜本方法检出限1.0 mg/L，即未检出。

2.4 样品测定

基于上述方法与条件，测试样品。从所得出的样品色谱图可得知，将Ag2O加入奶制品提液中，并进行搅拌后，将其中的CI-除去，使其不干扰到NO2的定量检测。

3 结论

奶制品通过去脂肪、蛋白质及CI-处理后，运用离子色谱法对其中的NO-2与NO-3同时进行测定。此方法操作简单且费用低，在0.08～100 mg/L，NO-2与NO-3标准溶液的质量浓度与峰面积之间有较好的线性关系，适合在奶制品中同时检测硝酸盐与亚硝酸盐。

[1]李红敏,陈霞,刘长勇,等.离子色谱法测定发酵乳制品中的NO_2～-、NO_3～-和 SCN～-[J].食 品 工业,2015(6):291-294.

[2]楼颖伟,黄振华.离子色谱法测定食品中亚硝酸盐和硝酸盐的不确定度分析[J].上海预防医学,2011,23(4):182-184.