不同保藏时间对侧耳属3个种母种的影响*

王庆武，丛倩倩，李秀梅，安秀荣

（山东省泰安市农业科学研究院，山东 泰安 271000）

食用菌菌种随着培养时间的延长，将会发生老化现象，产生一系列生理生化变化[1]，如菌丝萌发时间延长，生长速度减慢，长势减弱[2]，抗逆性差，品质和产量降低等情况，严重影响菇农的经济效益。侧耳属（Pleurotus spp.）目前已知包含31个种[3]，其中平菇（Pleurotus osreatus）、杏鲍菇（Pleurotus eryngii）、秀珍菇（Pleurotus pulmonarius）的栽培最为广泛[4]，为了解侧耳属3个主要栽培种的母种保藏时间对菌种的影响，开展了保藏时间对菌种的影响试验，旨在为侧耳属3个主要品种的栽培提供科学依据，从而为地方菌种生产起到带动和引导作用[5]。

1 材料与方法

1.1 供试菌株

本实验室保存的平菇99、秀珍菇和杏鲍菇菌株。

1.2 培养基

母种培养基配方：马铃薯200 g、麸皮40 g、葡萄糖20 g、硫酸镁1.5 g、磷酸二氢钾3 g、琼脂20 g，定容至1 000 mL。

液体菌种培养基配方：马铃薯200 g、麸皮40 g，煮汁过滤后，在滤液中加入葡萄糖20 g、硫酸镁1.5 g、磷酸二氢钾3 g，定容至1 000 mL，分装到150 mL三角瓶中。

原种培养基配方：棉籽壳86%、麦麸10%、葡萄糖1%、硫酸钙1%、生石灰粉2%。

栽培袋培养基配方：棉籽壳67%、玉米芯30%、麦麸10%、硫酸钙1%、生石灰粉2%。

1.3 母种制作

按照配方，对供试菌株每隔3个月制作母种1次，然后放入冰箱内4℃保藏，保藏时间依次为12个、9个、6个、3个、0个月共5个梯度。

1.4 酶活的检测

对3个种不同保藏时间的菌株，分别检测其菌丝体羧甲基纤维素酶酶活性、淀粉酶酶活性、木聚糖酶酶活性。

1.4.1 菌丝体的培养

在液体菌种培养基中分别接入3个种不同保藏时间的菌株，每瓶接入8 mm的菌丝圆片，每个处理设3个重复，置于25℃静置培养7 d。

1.4.2 粗酶液的制备

将三角瓶内表面菌丝使用4层纱布滤去，取滤液5 mL于10 mL离心管中，4 000 r·min-1，4℃离心10 min，取上清。

1.4.3 纤维素酶酶活性的测定

按照参考文献[6]的方法进行测定。酶活力单位（U·mL-1）定义为：在测定条件下，1 mL酶液每分钟水解底物生成1 μg葡萄糖所需的酶量。

1.4.4 淀粉酶酶活性的测定

按照参考文献[7]的方法进行测定。酶活力单位（U·mL-1）定义为：在测定条件下，1 mL酶液每分钟水解底物生成1 μg葡萄糖所需的酶量。

1.4.5 木聚糖酶酶活性的测定

按照参考文献[6]的方法进行测定。酶活力单位（U·mL-1）定义为：在测定条件下，1 mL酶液每分钟水解底物生成1 μg木糖所需的酶量。

以上测定以煮沸15 min的粗酶液为对照，每组3个重复，取平均值。

1.5 原种制作

母种保藏时间到时后，按常规方法统一制作原种。

1.6 栽培袋制作

原种满瓶后制作栽培袋。采用17 cm×33 cm聚丙烯塑料袋，每袋装干料0.422 kg。

1.7 出菇

栽培袋满袋后进入试验棚，采用完全随机区组设计[8]，3次重复，每重复30袋，菇棚内墙式两端小口定位出菇[9]。出菇期只给水，不使用任何农药和添加剂[10]，常规管理。

1.8 统计分析

记录酶活值、菌丝生长情况，子实体采收后称重，计算生物学效率，采用Duncan’s新复极差对各处理数据进行统计分析[11]。

2 结果与分析

2.1 菌种不同保藏时间对菌丝生长的影响

菌种不同保藏时间对侧耳属3个种菌丝生长的影响结果见表1。

表1 菌种不同保藏时间对侧耳属3个种菌丝生长的影响Tab.1 Effects of different preservation time on mycelial growth of three species of Pleurotus

由表1可以看出，侧耳属3个种的菌种在不同保藏时间下菌丝均能恢复生长，但在菌落萌发时间、菌丝生长速度和长势方面存在差异。平菇菌种保藏时间3个月之内菌落萌发最快，菌落的萌发时间为1 d，保藏时间6个月～9个月时，菌落的萌发时间为2 d，保藏时间12个月时，菌落的萌发时间为3 d；刚转接的菌种菌丝生长速度最快，为 4.24 mm·d－1，保藏时间12个月的菌种菌丝生长速度最慢，为3.47 mm·d－1；保藏时间6个月之内菌丝长势好，保藏时间6个月～12个月菌丝长势较好。杏鲍菇菌种保藏时间3个月之内菌落萌发最快，萌发时间为1 d，保藏时间超过3个月萌发时间逐渐延长；刚转接的菌种菌丝生长速度最快，为4.18 mm·d－1，菌丝长势好，随保藏时间的延长菌丝生长速度减慢、长势减弱。刚转接的秀珍菇菌种菌落萌发最快，萌发时间为1 d，菌丝生长速度最快，为3.02 mm·d－1，且菌丝长势好；保藏时间3个月及以上，菌落萌发时间逐渐延长，菌丝生长速度逐渐减慢，长势减弱。

2.2 菌种不同保藏时间对酶活性的影响

菌种不同保藏时间对侧耳属3个种菌丝酶活性的影响结果见表2。

表2 菌种不同保藏时间对侧耳属3个种菌丝酶活性的影响Tab.2 Effects of different preservation time on mycelial enzyme activity of three species of Pleurotus

由表2可以看出，母种不同保藏时间对侧耳属3个种的酶活性有一定的影响。保藏时间对平菇羧甲基纤维素酶和淀粉酶酶活性影响差异不显著，对木聚糖酶酶活性影响差异显著，随着保藏时间的延长，木聚糖酶酶活性逐渐降低。杏鲍菇3种酶的活性随保藏时间延长逐渐降低。保藏时间对秀珍菇羧甲基纤维素酶和木聚糖酶酶活性影响差异不显著，对淀粉酶酶活性影响差异显著，随着保藏时间延长，淀粉酶酶活性逐渐降低。

2.3 菌种不同保藏时间对生物学效率的影响

菌种不同保藏时间对侧耳属3个种生物学效率的影响结果见表3。

由表3可以看出，侧耳属3个种菌种在不同保藏时间下生物学效率、出菇污染率均有差异。3个种随菌种保藏时间的延长，其子实体生物学效率均逐渐降低。平菇99和秀珍菇菌种保藏时间3个月之内各自出菇污染率最低，且他们之间无差异，当保藏时间超过3个月，随其保藏时间延长各自出菇污染率逐渐升高；杏鲍菇菌种保藏时间6个月之内出菇污染率最低，彼此间无差异，当保藏时间超过6个月，随其保藏时间延长出菇污染率逐渐升高。

3 结论与讨论

本试验表明，不同保藏时间对侧耳属3个种母种菌丝生长有一定的影响，3个种菌种随保藏时间的延长其菌落萌发时间延长，菌丝生长速度逐渐减慢，菌丝长势也逐渐减弱。

表3 菌种不同保藏时间对侧耳属3个种生物学效率的影响Tab.3 Effects of different preservation time on biological efficiency of three species of Pleurotus

不同保藏时间对平菇木聚糖酶酶活性有影响，随保藏时间延长，酶活性降低，其他2种酶酶活性影响不大。杏鲍菇3种酶活性随保藏时间延长而逐渐降低，表明酶活性与生物学效率呈正相关。不同保藏时间对秀珍菇淀粉酶酶活性有影响，随其保藏时间延长酶活性降低，其他2种酶酶活性影响不大。此外，不同保藏时间对侧耳属3个种出菇污染率和生物学效率也有影响，随菌种保藏时间的延长，生物学效率逐渐降低，出菇污染率逐渐升高，表明随保藏时间的延长，菌种活力减弱，抗逆性降低，菌种老化，致使产量降低，污染率升高。根据试验中菌种保藏时间对菌丝生长、生物学效率和出菇污染率的影响，生产中建议侧耳属3个种母种保藏时间不超过3个月，以保持菌种活力，保证菌种质量与产量。

参考文献：

[1]黄志龙.蘑菇菌种老化过程中的生理生化分析[J].福建农业学报，2006，21（2）：147-149.

[2]黄贞贞.杏鲍菇和金针菇菌种质量控制技术研究[D].福州：福建农林大学，2011.

[3]卢启泉.四类平菇种质资源的分子标记分析[D].福州：福建农林大学，2007.

[4]王庆武，兰玉菲，崔晓，等.侧耳属3个种菌丝培养特性比较[J].中国食用菌，2016，33（3）：61-62.

[5]周希华.食用菌菌种特点及其对菌种业的影响与对策[J].中国种业，2005（5）：44-45.

[6]董国强，张孟白，林开江.木聚糖酶酶活测定方法[J].浙江农业科学，1989，30（2）：88-89.

[7]白玲，黄健.基础生物化学实验指导[M].西安：陕西科学技术出版社，1986.

[8]王庆武，安秀荣，崔晓，等.玉米芯添加量对平菇综合农艺性状的影响[J].山东农业科学，2016，48（1）：71-73.

[9]王庆武，安秀荣.平菇小口定位出菇技术集成[J].中国食用菌，2014，33（3）：61-62.

[10]王庆武，兰玉菲，蔚承祥，等.不同豆秸添加量对平菇综合农艺性状的影响[J].中国食用菌，2016，33（3）：61-62.

[11]王庆武，兰玉菲，安秀荣.泰山赤灵芝菌株生物学特性研究[J].山东农业科学，2015，47（11）：64-67.