高效液相色谱—荧光法测定食用油中苯并芘含量

何旭东 李红梅

摘 要：该文建立了高效液相色谱-荧光法测定食用油中苯并芘含量实验方法。色谱柱采用安捷伦C18柱（250mm×4.6mm，5μm），以乙腈和水为流动相，用荧光检测器测定食用油中苯并芘的含量。苯并芘的线性范围分别为1～10ng/mL，最低检出限为0.2ng/mL，平均加标回收率为94.0%，相对标准偏差2.9%。该方法适用于食用油中苯并芘含量定量分析。

关键词：苯并芘；高效液相色谱；荧光检测器

中图分类号 TS201.6 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2018）09-0135-02

Quantitative Determination of Benzopyrene in Edible oil by High Performance Liquid Chromatography—Fluorescence Detector

He Xudong1 et al.

（1Yangzhou Product Quality Supervision and Inspection Institute，Yangzhou 225000，China）

Abstract：To study a method for quantitative determination of Benzopyrene in edible oil by High Performance Liquid Chromatography—Fluorescence Detector.The analytical chromatographic column was Agilent C18（250 mm×4.6mm，5μm），the mobile phase was acetonitrile-water（88∶12，V/V）.The samples were determined by an Fluorescence detector.The calibration curves had good linearity in the range of 1～10ng/mL for Benzopyrene，the detection limit for Benzopyrene was 0.2ng/mL，the average recoveries of Benzopyrene were 94.0%（n=6，RSD =2.9%）.The method is reproducible for qualitative analysis of Benzopyrene in edible oil.

Key words：Benzopyrene；HPLC；Fluorescence detector

苯并芘又稱苯并（α）芘[1-8]，英文缩写BaP，是一种常见的高活性间接致癌物和突变原，主要存在于煤焦油、各类碳黑和煤、石油等燃烧产生的烟气、香烟烟雾、汽车尾气中，以及焦化、炼油、沥青、塑料等工业污水中。苯并芘在土壤和作物中容易残留，是一种高活性致癌物质，肉和鱼中的BaP含量取决于烹调方法，水果、蔬菜和粮食中的BaP含量取决其来源，各个国家和地区都重视食品中苯并芘的含量，国家标准GB 2762-2017[9]规定食用油中苯并芘限量10μg/kg。本文采用分子印记柱提取食用油中苯并芘，然后用液相色谱-荧光检测定量，适用于食用油中苯并芘含量的测定。

1 材料与方法

1.1 材料和仪器 苯并芘标准品（上海安谱科学仪器有限公司）；食用油（大连中食国实）；乙腈（色谱纯），Tedia公司；实验用水，超纯水；中性氧化铝固相萃取柱（上海安谱科学仪器有限公司），苯并芘分子印迹柱（上海安谱科学仪器有限公司）。1200液相色谱-荧光检测器，安捷伦公司；超纯水机，美国Millipore公司；电子天平，瑞士Sartorius公司。

1.2 实验方法

1.2.1 色谱条件选择 色谱柱：安捷伦C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈∶水=88∶12；进样量10μL；流速1.0mL/min。荧光检测器：激发波长：384nm，发射波长：406nm。

1.2.2 标准溶液配制 准确称取苯并芘标准品10mg，用乙腈溶解后定容至10mL容量瓶中，摇匀，该溶液作为标准储备溶液。准确移取上述溶液并且用流动相稀释定容为1，2，4，6，10ng/mL标准系列溶液。

1.2.3 样品制备 准确称取0.4g试样，加入5mL正己烷，旋涡混合0.5min，待净化。采用苯并（a）芘分子印迹柱净化样液，收集净化液，氮气吹干，准确吸取0.4mL乙腈涡旋复溶试样0.5min，过微孔滤膜待测[10]。

2 结果与分析

2.1 提取柱选择 本文采取了中性氧化铝柱和苯并芘分子印迹柱前处理食用油中的苯并芘，实验中发现采用中性氧化铝洗脱后，食用油不保留，苯并芘难以提取出来。所以采用苯并芘分子印迹柱，结果比较满意。

2.2 线性关系的考察 吸取苯并芘标准溶液10μL，高效液相色谱-荧光检测器检测，标准曲线图见图1。以峰面积为纵坐标，以浓度（ng/mL）为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程：y=33.35885x+1.54424，R2=0.99966。苯并芘在1～10ng/mL之间线性关系良好。并以信噪比等于3为标准，测得苯并芘的检出限为0.2ng/mL。

2.3 精密度试验 精密吸取苯并芘标准品溶液10 μL重复进样6次，记录色谱图峰面积，并测定峰面积的平均值和相对标准偏差，测定结果见表1。连续6次实验结果显示，精密度实验相对标准偏差为2.36%，本实验测定苯并芘精密度良好，具有良好的准确度。

2.4 重复性实验 取同一样品，重复测定6次，记录色谱图，测定结果见表2，相对标准偏差为3.46%，说明用本方法测苯并芘含量重复性良好。

2.5 回收率实验 精密称取样品6次，准确加入苯并芘0.5μg，按照1.2.3样品制备样品溶液，液相色谱外标法定量。由表3可知，回收率在89.1%～97.0%，平均回收率为94.0%，表明高效液相色谱-荧光法检测食用油中苯并芘含量具有良好的准确性。

2.6 样品测定 用电子天平准确称取6个平行样品，按1.3.3方法制备样品溶液，液相色谱-荧光检测器检测，计算含量，其结果见表4，由表4可知，样品中苯并芘平均含量都在2.603ng/mL，相对标准偏差為2.9%。苯并芘标准品及样品的色谱图见图1、图2，苯并芘标准品出峰时间在8.2min左右。

3 结论

本文采用高效液相色谱-荧光法对食用油中苯并芘含量，结果表明：采用C18柱，流动相以乙腈∶水=88∶12，方法的精密度比较好、回收率较高，表明该法适用于食用油中苯并芘含量的测定。

参考文献

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[9]中国人民共和国国家卫生和计划生育委员会.GB 2760-2014食品安全国家标准食品添加剂使用标准[S].

[10]中国人民共和国国家卫生和计划生育委员会.GB 5009.27-2016食品安全国家标准 食品中苯并（a）芘的测定[S].

（责编：张宏民）