软皮热敷散的醇提工艺优选*

李佰成 ，任 慧 ，张 红 △

1陕西省中医医院，陕西 西安 710003；2陕西省中医药研究院

硬皮病是一种病因不明的结缔组织病，临床表现为皮肤硬化和内脏器官的纤维化［1］。软皮热敷散是陕西省中医医院皮肤科用于治疗硬皮病的经验处方，疗效显著。该方由艾叶、桂枝、陈皮、山豆根、威灵仙、刘寄奴、红花等中药组成，具有活血通络，散寒祛湿的功效，用于治疗皮痹、冻疮、雷诺氏病、蛇串疮后遗神经痛等病。由于该药使用前需用布包上笼屉加热30分钟后热敷，操作繁复，为了方便使用，考虑将其改为软膏剂［2-3］。处方中山豆根、威灵仙等药材的活性成分为生物碱、黄酮、三萜、酚酸等小分子物质［4-5］，故而考虑以乙醇提取为宜。因此，重点考察乙醇浓度、提取次数、溶剂量及提取时间，以苦参碱含量和干膏得率为评价指标，借助正交试验优选其醇提工艺［6-7］。

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津2010A-UV型高效液相色谱仪(工作站：CLASS-VP，岛津公司)；Innoval NH2 色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm，天津博纳艾杰尔科技有限公司)；101型电热鼓风干燥箱(北京市永光明医疗仪器厂)；HSY-2MB型电热恒温水浴锅(天津市泰斯特仪器有限公司)；HZ2001A型称量天平(慈溪红钻衡器设备有限公司)；BT25S型电子分析天平(北京赛多利斯天平有限公司)。

1.2 试药 山豆根、威灵仙等药材购自陕西省中医医院；苦参碱(中国食品药品检定研究院，批号：110721-200613)；色谱纯乙腈(美国FISHER公司)，纯化水，无水乙醇、氯仿、甲醇、磷酸、氨水均为分析纯。

2 方法与结果

软皮热敷散中醇提药材的提取工艺，以山豆根的活性成分苦参碱的含量及干膏得率为评价指标，采用正交试验考察乙醇浓度、提取次数、溶剂量、提取时间对该工艺的影响，优选出最佳醇提工艺。

2.1 样品制备 按软皮热敷散处方比例称取山豆根、威灵仙等药材，共9份，按正交试验设计安排提取、过滤，合并滤液，备用。

2.2 苦参碱测定

2.2.1 色谱条件［8-9］Innoval NH2色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相：乙腈 - 无水乙醇 -3%磷酸(86∶7∶7)，检测波长；220 nm，流速：1 mL/min，柱温：25℃，进样量：10 μL。

2.2.2 对照品溶液制备 精密称取苦参碱对照品适量，加流动相制成每1 mL含苦参碱75 μg的对照品溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液制备［10］取1/30体积的提取液，置水浴锅蒸干，用氯仿-甲醇-浓氨试液(40∶10∶1)转移至 25 mL 容量瓶中，超声处理 20 分钟，冷却至室温后定容，滤过，精密吸取5 mL，蒸干，用甲醇转移至5 mL容量瓶，定容，即得。

2.2.4 阴性对照品溶液制备 按照处方比例称取软皮热敷散药材(去除山豆根)［11］，按软皮热敷散醇提药材的提取工艺制备提取液，制得阴性对照提取液，再取与供试品相同的量，按供试品溶液的制备方法处理，得阴性对照品溶液。

2.2.5 专属性试验 吸取上述对照品、供试品、阴性对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品色谱与苦参碱对照品色谱相比在相同时间处有色谱峰，阴性对照品溶液与苦参碱对照品色谱相比在相同时间处无吸收峰，表明处方中其他药材对该方法测定苦参碱含量无干扰［12］。

2.3 干膏得率测定 精密量取醇提液100 mL，置于已恒重的蒸发皿中，水浴蒸干后将其置于105℃烘箱干燥3小时［13］，取出后放置在干燥器中30分钟冷却至室温，迅速称定重量，直至恒重，计算干膏得率。

2.4 正交试验设计 按处方量比例称取山豆根、威灵仙等药材，随机取样编为1～9个试验号。以乙醇浓度、提取次数、溶剂量、提取时间为考察因素，以苦参碱含量和干膏得率为评价指标，权重系数分别为 70%、30%，根据权重系数计算综合评分［14］。按正交表L9(34)中每个试验号要求进行试验，筛选最佳醇提条件，因素水平安排见表1，正交试验设计及结果见表2，方差分析见表3。

表1 正交试验因素水平

表2 正交试验设计及结果

表3 正交试验方差分析结果

借助直观分析正交试验数据，最佳醇提条件为 A2B3C1D2；由方差分析结果判断因素 A、B、C、D 对试验结果影响程度为B＞D＞C＞A，4个因素均无显著影响；而因素B在水平2、3的均值接近，综合考虑该醇提工艺的最佳条件为A2B3C1D2，即加6倍量的70%乙醇提取2次，每次1.5小时。

2.5 验证试验 按照软皮热敷散处方比例平行称取药材3份，分别加6倍量的70%乙醇提取2次，每次1.5小时，滤过、合并滤液。通过“2.2”“2.3”项下方法分别测定其苦参碱含量和干膏得率，计算综合得分，结果表明优选出的醇提工艺条件合理，稳定可行，重现性好。

3 讨论

软皮热敷散中山豆根、威灵仙中主要活性成分为生物碱、黄酮类、三萜等，依据这些活性物质的性质，本试验分别考察了50%、60%、70%乙醇提取软皮热敷散药材的效果。而生物碱类成分是山豆根的主要活性物质，也是其药效物质基础［15］，故本醇提工艺研究以山豆根中苦参碱的含量为主要评价指标。结果发现软皮热敷散70%醇提液中苦参碱的含量最高，因此醇提工艺的正交试验设计中乙醇浓度分别设置为60%、70%、80%。试验过程中流动相的变化对苦参碱测定结果影响较高，为使测定结果稳定可靠，将流动相配制好后采用等度洗脱测定苦参碱的含量［9］。

［1］闫小宁，韩世荣，李文彬，等.“热敷药”对硬皮病小鼠模型COL-Ⅰ、COL-Ⅲ蛋白含量的影响［J］.中国中西医结合皮肤性病学杂志，2011，10(6)：353-355.

［2］林俊华，苏明武，刘颖，等.防茄软膏的制备工艺研究［J］.首都医药，2014，(14)：86-88.

［3］夏晨，谈戈.浅谈我院中药软膏剂的制备工艺与质量控制［J］.北方药学，2016，13(3)：112-113.

［4］何晓艳，周应军，田洪.山豆根化学成分及药理作用研究进展［J］.中南药学，2011，9(7)：525-528.

［5］罗奎元，强宇靖，高慧琴.威灵仙化学成分及药理作用研究进展［J］.甘肃中医学院学报，2015，32(5)：60-63.

［6］王东东，孙芸，周光.正交实验法优选华佗麻药加减方乳膏剂提取工艺的研究［J］.西部中医药，2017，30(2)：28-30.

［7］汪海斌，吴电彩，马玲，等.正交试验研究枇杷清肺颗粒的醇提工艺［J］.安徽医药，2015，19(2)：222-224.

［8］王少平，曾以旺，陈燕瑞，等.HPLC测定湿疹康喷剂中苦参碱与氧化苦参碱的含量［J］.西部中医药，2014，27(11)：25-28.

［9］李彤晖，马久太，李晔，等.燥湿清热颗粒中苦参碱和氧化苦参碱含量测定方法的研究［J］.陕西中医，2013，34(7)：899-901.

［10］国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［M］.北京：中国医药科技出版社，2015：27.

［11］孙丽娜，刘小虹，刘建博，等.复方五指毛桃颗粒的提取工艺研究［J］.中国药房，2017，28(28)：3976-3979.

［12］徐文杰，周蓉，王洛临，等.活血化瘀颗粒提取工艺优选［J］.中药材，2014，37(9)：1667-1672.

［13］刘军锋，华瑛，王红波，等.痰饮膏剂型改进的工艺研究［J］.陕西中医，2014，35(7)：914-916.

［14］李彩东，潘新波，张伟，等.多指标正交试验法优选降脂复肝胶囊提取工艺［J］.西部中医药，2017，30(7)：49-54.

［15］程钱，王金凤，王宝丽，等.山豆根化学成分、生物活性及质量控制研究进展［J］.辽宁中医药大学学报，2017，19(7)：119-125.