煎煮时间对葛根中葛根素含量的影响

黄晓巍，杨明慧，张丹丹，王晋冀，王紫薇，许佳明

（长春中医药大学，长春 130117）

葛根为豆科植物野葛Pueraria lobata Ohwi的干燥 根，性凉、味辛甘，具有生津止渴、发表透疹、解肌退热等功效[1]。临床用于治疗表证发热，常配伍柴胡、羌活、黄芩等药；治疗风热感冒等证，可与菊花、薄荷、蔓荆子等解表药配伍使用[2-3]。本研究通过观察不同煎煮时间对葛根煎煮液中葛根素含量变化的影响，为其临床应用提供理论依据。

1 实验材料

LC-2030岛津高效液相色谱仪（日本岛津公司），MS205DU十万分之一天平（梅特勒-托利多集团），HZT-A百分之一电子天平（杭州鼎鑫称重设备有限公司），DHG-9245A型电热恒温鼓风干燥箱（上海一恒科技有限公司），KQ3200B 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），HH-Ⅱ恒温水浴锅（上海致金仪器设备有限公司）及微孔滤膜（0.45 μm）。

葛根素对照品（货号SP8690，北京索莱宝科技有限公司），葛根（批号 20151201，安徽新兴中药材饮片有限公司）经长春中医药大学翁丽丽老师鉴定为合格品，无水乙醇（北京化工厂），甲醇（色谱纯，山东禹王实业有限公司化工分公司），水（娃哈哈纯净水）。

2 实验方法与结果

1.1 对照品溶液的制备 精密称取葛根素的标准品2.00 mg置于25 mL容量瓶中，用30%乙醇溶解并定容，稀释成含葛根素0.08 mg/mL的对照品溶液。

1.2 供试品溶液的制备[4-6]取约100 g葛根，加入1000 mL水浸泡30 min，分别煎煮20，25，30，35，40，45，50，55，60 min，把9个煎煮时间的葛根煎煮液浓缩干燥（80oC）至浸膏（出膏率约25%）研磨成粉末（过3号筛），取该粉末约0.1 g，精密称定，置100 mL具塞锥形瓶中，加入30%乙醇50 mL，精密称定重量，回流0.5 h，放冷至室温，用30%乙醇补足损失的重量，先摇匀后滤过，用0.45 μm微孔滤膜过滤即得出9种不同煎煮时间的葛根供试品溶液。

2.3 色谱条件[7]色谱柱：Inertsil ODS-3液相色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相：甲醇-水（25：75），柱温30℃，流速1 mL/min，检测波长250 nm，进样量10 µL。在选定的色谱条件下，葛根素色谱峰与相邻色谱峰的分离度均大于1.5，理论塔板数不低于3000，拖尾因子符合要求。

2.4 线性考察[8]精密量取葛根素标准品5.00 mg置于5 mL容量瓶中，用30%乙醇溶解并定容，稀释成含葛根素1 mg/mL的对照品溶液，以此液为母液，分别精密移取，制成浓度分别为0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 mg/mL的葛根素标准品溶液，按“2.4”项下色谱条件进样，以进样量X（μg） 为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线，得出葛根素的回归方程为：Y= 412236X+ 9349.5，R² = 0.9998。结果表明，葛根素进样量在1～5 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度实验[9-10]精密吸取同一葛根对照品溶液10 μL，连续进样6次。记录峰面积积分值分别为5302105、5301946、5310027、5308579、5320473、5315724按峰面积计算葛根素的RSD（n= 6）为0.14%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性实验 精密吸取煎煮35 min的葛根样品溶液 10 μL，在 0，4，8，12，24，48 h 进样测定。以峰面积积分值为指标测定其稳定性，依次为17163433、17307293、17214107、17196065、17232502、17297657，按峰面积计算葛根素的RSD（n= 6）为0.33%。表明葛根样品溶液在48 h内稳定性良好。

2.7 重复性实验[11]取按照“2.2”项下煎煮35 min的葛根样品溶液6份，每份进样10 μL，以回归方程计算葛根素的含量，上述含量平均值为52.904 mg/g，RSD（n= 6）为1.03%。

2.8 加样回收率实验[12-13]精密称取煎煮35 min已知含量为52.583 mg/g的葛根浸膏6份，每份约0.005 g，分别加入相当于样品中葛根素含有量100%的适量的对照品溶液。按“2.2”项下的方法制备供试品溶液，进样10 μL测定，计算葛根素的回收率和RSD（n= 6）为100.6%（RSD = 1.00）。测定结果见表1。

2.9 样品含量测定 样品依法测定，结果见表2。

表1 加样回收率实验

表2 不同煎煮时间葛根中葛根素含量

3 讨论

《伤寒杂病论》[14]中张仲景善用葛根治疗风寒表证，“葛根汤，以水一斗，先煮葛根，减二升，去白沫，纳诸药。”现代研究表明，葛根中有效成分葛根素属于异黄酮结构，其脂溶性、水溶性以及生物利用度较低，将葛根“先煎”有宜于有效成分溶出[15-16]。而在中医院实际煎煮过程中，对葛根饮片煎煮并没有“先煎”要求。本实验研究结果表明，葛根在煎煮35 min时葛根素溶出率最高，而解表类中药煎煮时间要求20 min，故葛根应以先煎15 min为宜。

在煎煮35 min后，葛根素含量降低，可能是因为煎煮时间对中药某些成分含量的影响较大，在煎煮过程中，随着煎煮时间的不同，单味药的各组分之间也可能产生复杂的化学反应，这些反应最终影响中药中某些成分的含量[17-18]。但有实验研究表明，“先煎”或与其他药物同时煎煮对葛根素的溶出影响不大[19]，经分析得出可能的原因是煎煮方法、饮片规格、炮制方法等，导致最终实验结果的差异。所以笔者认为葛根饮片应“先煎”，且“先煎”时间以15 min为宜。明确葛根饮片煎煮方法，能够更好的指导中药临床用药，从而提高临床疗效。

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