T淋巴细胞亚群在抗结核药物所致肝损伤中的作用

黄洁，王晖，周蜜

(江西省九江市第三人民医院检验科，九江 332000)

结核病患者在抗结核化疗过程中，一般以药物性肝损伤引起的不良反应最多见，由于肝损伤的患者降低了抗结核药物的有效性，常被迫调整抗结核的治疗方案，导致病情失败、复发，严重者因结核病病情恶化而死亡[1]。抗结核药物引起的肝损伤发生机制十分复杂，大多数学者认为，细胞免疫、体液免疫参与了结核药物所致肝损伤得过程[1，2]。抗结核药物所致肝损伤成为影响结核治疗效果的关键因素，水飞薊宾是公认的保肝作用药物，对肝细胞膜具有保护作用，促进肝细胞的修复与再生[3，4]。外周血CD4+CD8+T细胞是参与机体免疫反应并起主导调节作用的免疫细胞，本实验主要是采用流式细胞仪检测抗结核药物引起的肝损伤患者和抗结核药物未引起肝损伤的外周血T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+及CD8+百分比进行对比，以及药物性肝损伤的患者在用水飞薊宾治疗前后的外周血T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+及CD8+表达水平之间的变化，进一步研究外周血T淋巴细胞亚群在药物性肝损伤中的发病机制。

1 材料和方法

1.1 病例选择 选取九江市第三人民医院2016年1月至2017年11月诊断为抗结核性药物肝损伤的住院及门诊患者作为实验组，共55例，其中男39例，女26例。选择同期于本院抗结核治疗未产生肝功能损伤的门诊或者住院患者30例作为对照组，其中男12例，女18例。入选病例发病前均无其他的肝病史。

1.2 诊断标准 ⑴肺结核诊断标准依据2013年中华医学会结核病学分会 《肺结核诊断和治疗指南》的诊断标准[4]。⑵急性药物性肝损伤诊断标准依据2013年中华医学会结核病学分会 《抗结核药所致的药物性肝损伤诊断与处理专家建议》[6]。

1.3 治疗方法 实验组患者抗结核药导致肝损伤后，ALT＞2倍正常值上限（ULN），并且实验组患者无病毒性肝炎、自身免疫性肝炎和其他原因引起的肝炎病史[5]。给予患者服用水飞薊宾胶囊（天士力制药集团股份有限公司，国药准字：H20040299）每天三次，2-4 粒/次[8]，210mg/d。 待转氨酶降到正常后继续服用一个月后停药。

1.4 检测方法 实验组和对照组测定外周血T淋巴细胞亚群均使用EDTA-Na抗凝管清晨空腹抽取外周血4ml送检（2h进行检测），使用仪器为美国贝克曼公司生产的FC500流式细胞仪，ALT检测使用带分离胶的真空采血管抽取空腹静脉血3ml，ALT检测使用美国贝克曼生产的AU5800生化分析仪，检测试剂均为原装配套试剂，严格按照仪器标准操作流程进行操作。

1.5 统计方法 采用SPSS 12.0软件进行统计学分析，T淋巴细胞亚群的百分率用，组间均数比较用t检验。

2 结果

2.1 实验与对照组的ALT指标 实验组ALT值为：114.0±32.0IU/L， 对照组 ALT 值为 26.0±5.0IU/L，差异具有统计学意义（t值=0.422，P＜0.01）。

2.2实验组与对照组人外周血T淋巴细胞亚群比较 实验组中的外周血T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+及CD4+/CD8+的百分率明显低于对照组，实验组CD8+的百分率明显高于对照组，差异具有统计学意义（P<0.01），见表 1。

表1 实验组与对照组人外周血T淋巴细胞亚群（%s）比较

表1 实验组与对照组人外周血T淋巴细胞亚群（%s）比较

注：与对照组比较*P<0.01。

1.41±0.5 0.57±0.3*9.9组别对照组实验组t值例数30 55 CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/CD8+71.76±7.74 64.51±7.81*4.12 36.99±5.64 20.83±8.32*9.72 28.24±6.64 38.36±8.03*6.03

2.3 实验组治疗前后人外周血T淋巴细胞亚群比较 实验组药物性肝损伤时的外周血T淋巴细胞亚群CD4+及CD4+/CD8+的百分率，明显低于用水飞薊宾治疗后肝功能恢复正常的CD4+及CD4+/CD8+的百分率，差异具有统计学意义，CD3+百分率在治疗前后差异无统计学意义，治疗前的CD8+百分比明显高于治疗后，差异有统计学意义。见表2。

表2 实验组治疗前后人外周血T淋巴细胞亚群（%±s）比较

表2 实验组治疗前后人外周血T淋巴细胞亚群（%±s）比较

注：与治疗前比较#P<0.01。

0.57±0.3 1.17±0.24#8.25组别治疗前治疗后t值例数55 55 CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/CD8+64.51±7.81 67.77±6.92 1.82 20.83±8.32 34.20±5.35#7.21 38.36±8.03 30.12±3.85#5.39

3 讨论

一般情况下，结核药所致的药物性肝损伤发生机制分为免疫机制和非免疫机制，目前大部分研究集中在抗结核药物性肝损害的非免疫性机制，免疫因素参与的各类药物性肝损伤研究甚少[2]。有研究提出药物是小分子物质只有作为半抗原诱导线粒体氧化应激反应，促进炎症释放并激活免疫系统，而外周血T淋巴细胞亚群是机体抗炎症、排异物免疫反应中起主导作用的免疫性细胞[8]，黄承乐等人认为，在急性肝炎的患者体内CD4+、CD4+/CD8+水平也有不同程度的下降，提示急性病毒性肝炎的发生、发展及转归除了与病毒增殖、扩散有关，还与机体免疫应答强弱及免疫调节紊乱有关[9]。人成熟T细胞按表型不同分为CD4+T细胞和CD8+T细胞，CD4+为辅助性的T细胞，CD4+T细胞的减少将会直接影响机体的免疫功能。CD4+还可以分泌细胞因子，抗结核药物在这些细胞因子的作用下，并且作为半抗原形成免疫复合物引发变态反应导致肝损害，CD8+T细胞为细胞毒性T细胞，对清除损伤的肝细胞有重要的作用，并且依赖于CD4+T细胞发挥生理功能，所以CD4+T细胞减少和功能下降使损伤的肝细胞不能有效清除。CD4+/CD8+比值是监测免疫状态的重要指标，该比值的下降可以导致免疫功能紊乱和一系列的机体免疫损伤[10]。

本研究结果表明，抗结核药物所致药物性肝损伤患者的外周血CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞及CD4+/CD8+比值密切相关，特别是实验组在治疗之后肝功能恢复正常时，外周血CD3+T细胞、CD4+T细胞及CD4+/CD8+比值明显上升，证实了损伤肝细胞清除之后，机体免疫系统的恢复。本研究的例数不多，仍然需要扩大样本进一步研究T细胞亚群在抗结核药物所致肝损伤的免疫作用机理，为肝细胞在抗炎症过程中产生的氧化应激产物杀伤或TNF-Fas的作用下凋亡等一系列信号转导途径提供一些参考与启示。

参考文献

[1]吴于清，钟诚，黄燕群，等.CD4+CD25+调节性T细胞在抗结核药物所致的肝损伤中的作用 [J].结核病与肝部健康杂志，2017，6（2）：125-127.

[2]熊晓晴.异甘草酸镁治疗抗结核药物性肝损伤71例[J].江西中医药，2015，11（46）：53-54.

[3]谢锦哲.水飞蓟宾对治疗抗结核药物所致肝损伤的疗效探讨[J].现代诊断与治疗，2016，27（22）：4234-4236.

[4]刘建锋，雷建平等.3种诊断标准在初治结核病药物性肝损伤诊断的对比分析[J].江西医药，2015，9（32）：927-929.

[5]中华医学会结核病学分会.肺结核诊断和治疗指南[J].中华结核和呼吸杂志，2001，24（2）：70-74.

[6]张明媛，雷建平，闫世明，等.抗结核药物所致肝损伤及肝病患者抗结核药物治疗——大陆地区诊治建议与台湾《结核病诊治指引》相关介绍[J].临床肝胆病杂志，2015，11（31）：1176-1181.

[7]李锋，卢水华.《抗结核药物所致药物性肝损伤诊断与处理专家建议》解读[J].中国实用内科杂志，2015，35（8）：683-685.

[8]Han D，Dara L，Win S，et al.Regulation of drug-induced liver injury by signal transduction pathways：critical role of mitochondria.Trends Pharmacol Sci，2013，34(4)：243-253.

[9]黄承乐，黄红华等.急性病毒性肝炎患者外周血T细胞亚群的检测和分析[J].现代生物医学进展，2012，18（16）3535-3537.

[10]陶叶海.抗结核急性药物性肝损伤患者外周血CD8+T细胞上CD28 表达及意义[J].上海预防医学，2014，26（11）：626-628.