基因多态性与华法林的起始给药剂量的相关性研究

袁 璞 珺

(河南省职工医院 郑州 450000)

心血管内科疾病主要包括心力衰竭、心绞痛、心肌梗塞等，且心血管内科疾病往往呈现急性发作，病情发展迅速，预后较差，临床上以重症为主要特点。抗凝治疗是栓塞类疾病非常重要的治疗手段，涉及临床多个学科[1]。目前临床常用的抗凝药物有肝素和华法林等传统药物。华法林安全范围较小，剂量存在明显的个体化差异。因此如何进行个体化的抗凝治疗有着非常重要的临床意义。为探讨CYP2C9、VKORC1基因的突变对于个体华法林的起始给药剂量的影响，以我院232例心血管疾病患者为研究对象，现将有关结果报道如下。

1 一般资料与方法

1.1 一般资料

选取本院2014年1月～2016年1月收治的232例心血管疾病患者，平均分为对照组和观察组，每组各116例。对照组男69例，女47例；年龄19～58岁，平均(48.64±2.91)岁；有吸烟史12例，有饮酒史13例，有高血压史48例。观察组男72例，女44例；年龄18～61岁，平均(49.87±3.05)岁；有吸烟史15例，有饮酒史19例，有高血压史45例。两组患者在性别、年龄、身体状况等方面比较无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 试剂和仪器

仪器：Roche公司Light Cycler 480Realtime PCR System、Labnet离心机、Labnet恒温金属浴、LX-100离心机、科迈恒温水浴锅、DYY-6C电泳仪、Bio-Rad多功能紫外分析仪。试剂均采购于上海生工生物工程有限公司，包括DNA提取试剂盒、聚合酶链式反应液。

1.3 方法

实验流程:抽取患者外周静脉血2～3ml，加入EDTA等抗凝剂。(1)DNA提取：在生物安全柜中使用全血基因组抽提试剂盒提取患者的DNA；(2)PCR：扩增采用的系统是Roche公司Light Cycler 480 Realtime PCR System；(3)基因测序：使用限制性片段长度多态性和测序技术对患者的基因进行检测，并利用BE-2.0基因图象分析软件确定患者基因分型[2]；(4)INR检测及给药：检测患者华法林用药前及用药起始10d内每天的 INR 值。对照组初次华法林剂量为3.0mg/d，观察组基因指导用量参考华法林国际药理学联盟推荐计算公式[3]。根据 INR 基线值，当日的INR值作为次日华法林用药剂量的调整标准。患者住院用药期间均予以均衡适量饮食；(5)数据记录：记录每组每日华法林剂量和 INR 检测结果以及每位患者服药后INR首次进入治疗窗的时间和服药起始10d内华法林的平均剂量。并随时记录用药期间发生的并发症等突发状况，以INR达到2.0～3.0为进入治疗窗标准。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 基因型影响华法林起始剂量

与对照组相比，CYP2C9*3 基因多态性的 AA型和VKORC1-1639G/A基因多态性的 AA型华法林的进入治疗窗起始剂量均较低，差异具有统计学意义(P<0.05)；CYP2C9*3 基因多态性的 AC型和VKORC1-1639G/A基因多态性的 GA型华法林的进入治疗窗起始剂量均较低，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 首次进入治疗窗华法林使用剂量对比

组别基因型例数华法林起始剂量(mg/d)对照组1163观察组CYP2C9∗3AA902．76±0．96∗AC42．64±0．58∗∗VKORC1⁃1639G/AAA202．71±0．96∗GA12．61±0．53∗∗GG13．02±1．24

注：与对照组相比，*P<0.05，**P<0.05。

2.2 不良反应

相比于对照组，参考基因型治疗剂量下观察组患者的不良反应发生率较低，Fisher精确检验显示P<0.05，说明差异具有统计学意义，观察组不良反应发生率明显降低，见表2。

表2 两组患者不良反应比较[n,%]

组别n皮下出血牙龈出血黑便合计对照组1166(5．17)3(2．58)8(6．89)17(14．65)观察组1162(1．72)1(0．86)2(0．17)5(4．31)

3 讨论

3.1 影响华法林起始剂量的遗传原因

本研究通过研究CYP2C9*3 基因多态性的 AA型和VKORC1-1639G/A基因多态性发现基因多态性发现基因多态性影响华法林起始用量。研究认为[4]，影响华法林剂量稳定性的相关基因主要有影响其药代动力学、药效动力学和影响其转运和外排3类。CYP2C9、CYP3A4、CYP2C18等属于第一类，VKORC1 、CYP2C9等属于第二类，第三类则主要包括APOE4ORM1/ORM2等。其中首要的是CYP2C9与VKORC1。

3.2 个体化治疗

本次研究表明，基因个体化用药中的华法林稳定剂量普遍低于对照组，其治疗疗效和不良反应数据也显著优于对照组。基因多态性是导致华法林在抗凝治疗中个体差异化的最重要的原因。不同研究针对需抗凝治疗的对象不同，比如心脏瓣膜置换术、房颤、深静脉血栓，其适应证不同，所需华法林的剂量也可能不同。因此，在华法林的使用过程中应充分考量其研究间异质性。口服华法林前若能对患者进行基因检测，并根据基因分型指导华法林的用量，将减少因反复抽血检测INR带来的麻烦，降低因服药不当引起的并发症，达到个体化用药的目的。

目前国内的有关研究基因多态性与药物使用，多聚集在剂量使用的研究，存在涉及基因不全面，包含因素较少等问题。尽管如此，随着基因检测进行药物的指导形成趋势，未来的个体医疗将变得更具针对性，高效和安全。

参 考 文 献

1 洪鲜花,于峰,朱君荣.华法林个体化剂量影响因素的选取.中国医院药学杂志,2014,34(16):1408～1414.

2 阳丽梅,黄旭慧,王少明,等.基于CYP2C9、VKORC1及CYP4F2基因多态性的华法林给药模型的验证.中国医院药学杂志,2013,33(23):1957～1961.

3 彭娟.基因多态性对中国汉族机械瓣膜置换术后患者华法林稳态剂量的影响.中南大学,2014.

4 雷兆锦,张瑞麟,李忠东.CYP2C9基因多态性对华法林日平均剂量影响的Meta分析.临床药物治疗杂志,2014,3:29～35.