尿毒清颗粒对慢性肾衰竭腹膜透析大鼠生存质量及TGF⁃β1/Smad通路表达的影响

程锦绣 郝军荣 王琳琳 刘翠兰 潘星 刘圣君 刘华

1河北北方学院附属第一医院肾内科（河北张家口 075000）；2河北北方学院药理教研室（河北张家口 075000）

1 材料与方法

1.1 实验动物雄性SD大鼠，SPF级，40只，体质量180 g左右，购自于河北省实验动物中心，动物许可证号：SCXK（冀）2003-1-003。

1.2 试剂与仪器

1.2.1 试剂尿毒清颗粒［康臣药业（内蒙古）有限责任公司，国药准字Z20073256，商品规格：5 g×18袋］；4.25%葡萄糖腹膜透析液（广州百特医疗用品有限公司，生产批号：国药准字H20133286）；腺嘌呤（合肥博美生物科技有限责任公司）；兔抗大鼠TGF⁃β1多克隆抗体、免疫组化专用湿盒（博士德生物制品有限公司提供）；山羊抗大鼠磷酸化Samd2/3多克隆抗体（美国Sigma公司生产）。

1.2.2 仪器全自动生化分析仪（购自日本日立公司）；精密电子天平（购自上海巴玖实业有限公司）；图像处理分析系统（北京久易科仪科技有限公司提供）；高清数码相机（日本索尼公司提供）；自主活动测定仪（上海康为医疗科技发展有限公司）；一次性注射器；灌胃管等。

1.3 模型构建［8］将30只雄性SD大鼠适应性饲养1周后，喂养含0.5%的腺嘌呤饲料构建慢性肾衰竭大鼠模型，喂养10周后检测血肌酐、尿素氮水平，查看是否达到慢性肾衰竭标准。后腹腔内插入腹透管，每日腹腔注射4.25%葡萄糖腹膜透析液，行腹膜透析构建腹膜透析大鼠模型。放置腹透管后，用肝素进行冲洗，若腹透管通畅，则造模成功。

1.4 分组与给药将造模成功大鼠随机分为3组，即模型组（M组）、低剂量试验组（L组）、高剂量试验组（H组）。L组大鼠给予尿毒清颗粒2 g/（kg·d）灌胃处理；H组大鼠给予尿毒清颗粒4 g/（kg·d）灌胃处理；正常组（N组）及M组大鼠给予同等剂量生理盐水灌胃处理。

1.5 检测指标每隔3周对4组大鼠进行称重，观察其自主活动次数并记录；于饲养12周末，抽取4组大鼠空腹静脉血，利用日本日立公司生产的全自动生化分析仪检查血清血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）水平；同时，断头处死大鼠，解剖其腹部，剥离肾脏组织，进行称重并计算肾脏肥大指数（SW/BW，双肾均重/体重）；将称重后的肾组织进行免疫组化检测，用高清数码相机对转化生长因子β1（TGF⁃β1）及磷酸化Samd2/3蛋白结果拍照，并通过图像处理系统分析图片的积分光密度（IOD）。

1.6 统计学方法采用SPSS 18.0统计软件对实验数据进行分析，计数资料用频数、构成比表示；计量资料采用形式表示，组间比较采用单因素方差分析，后续组间两两比较采用LSD⁃t检验，方差不齐时采用秩和检验。检验水准α=0.05。

To increase the output power of the GaSb based SDLs, different methods have been investigated, such as epitaxial growth optimization, lateral lasing suppression, multiple gain elements and effective thermal management.

2 结果

2.1 尿毒清颗粒对慢性肾衰竭腹膜透析大鼠体质量的影响0～4周，4组大鼠体质量均有不同程度升高趋势，其增长速度为：N组＞H组＞L组＞M组；4～8周时，虽体质量均有增长，但增长速度有所变化，其原因可能是个别组大鼠死亡，亦或是其余大鼠体质量波动范围较大；随时间推移，8～12周时，体质量增长情况为：N组＞H组＞L组＞M组。见图1。

图1 4组大鼠体质量变化曲线Fig.1 Curve of body mass change in four groups of rats

2.2 尿毒清颗粒对慢性肾衰竭腹膜透析大鼠自主活动次数的影响于4周前，各组大鼠自主活动次数均有不同程度下降（正常组除外），其原因可能是由于模型制备；随时间推移，4～8周期间，M组大鼠自主活动次数减少最快，与L组、H组大鼠相比，差异具有统计学意义（P＜0.05）。8～12周时，M组大鼠自主活动次数迅速下降，与其余3组比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见图2。

2.3 尿毒清颗粒对慢性肾衰竭腹膜透析大鼠Scr、BUN及SW/BW的影响经统计分析可知，4组大鼠12周末血Scr、BUN及肾脏肥大指数比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）。L组、H组大鼠血Scr水平与M组相比均显著降低，差异有统计学意义（P＜0.05），H组大鼠血Scr与L组对比变化不明显，差异无统计学意义（P＞0.05）；与M组对比，L组、H组大鼠血BUN水平均显著降低，差异有统计学意义（P＜0.05），H组大鼠血BUN与L组对比，差异无统计学意义（P＞0.05）；与M组对比，L组、H组大鼠肾脏肥大指数均显著降低，差异有统计学意义（P＜0.05），H组大鼠肾脏肥大指数同L组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

图2 四组大鼠自主活动次数变化曲线Fig.2 Change curve of autonomic activity in four groups of rats

表1 4组大鼠Scr、BUN及SW/BW比较Tab.1 Comparison of Scr，BUN and SW/BW in the blood of four groups of rats（n=10） x± s

2.4 尿毒清颗粒对慢性肾衰竭腹膜透析大鼠肾组织中TGF⁃β1、p⁃Samd2/3的影响TGF⁃β1、p⁃Samd2/3在正常大鼠肾脏中表达含量极低。经尿毒清颗粒干预后，L组、H组大鼠肾脏TGF⁃β1、p⁃Samd2/3表达均下降，与M组对比，差异有统计学意义（P＜0.05），且L组与H组组间对比，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

3 讨论

腹膜透析是救治急、慢性肾功能衰竭的有效治疗方式，其原理是使体液内的成分（溶质或水分）通过半透膜排出体外，达到肾脏替代或支持治疗的目的［9-10］。有研究表明［11］，腹膜透析大鼠腹膜间细胞代偿性过度增生，且随病情进展腹膜间皮细胞出现衰亡、脱落及血管新生等情况。本文通过构建慢性肾衰竭腹膜透析大鼠模型，将体质量、自主活动次数、肾脏肥大指数作为生存质量评估指标，研究尿毒清颗粒对慢性肾衰竭腹膜透析大鼠生存质量及TGF⁃β1/Smad通路表达的影响，以期更好应用于临床。

表2 4组大鼠肾组织中TGF⁃β1、p⁃Samd2/3免疫组化图片IOD比较Tab.2 Comparison of immunohistochemical images of TGF⁃beta 1 and p⁃Samd2/3 in four groups of rats′renal tissue（n=10）±s

表2 4组大鼠肾组织中TGF⁃β1、p⁃Samd2/3免疫组化图片IOD比较Tab.2 Comparison of immunohistochemical images of TGF⁃beta 1 and p⁃Samd2/3 in four groups of rats′renal tissue（n=10）±s

注：同N组对比，*P＜0.05;同M组对比，△P＜0.05；同L组对比，▼P＜0.05

组别N组M组L组H组TGF⁃β1 7.46±4.06 81.97±20.87*56.56±16.89*△33.57 ± 12.11*△▼p⁃Samd2/3 1.32±0.46 56.22±13.17*39.07±9.79*△24.12 ± 6.85*△▼

观察实验结果，可知4组大鼠体质量均有不同程度升高趋势，但增长速度不同；除正常组外，4周前，各组大鼠自主活动次数均有不同程度下降；随时间推移，4～12周期间，模型组大鼠自主活动次数最早降低且降低最快，较低、高剂量试验组大鼠差异明显；出现以上结果，其原因可能是病情进展或药物干预作用。与模型组比较，低、高剂量试验组大鼠血肌酐、尿素氮及肾脏肥大指数均明显降低，与低剂量试验组比较，高剂量试验组大鼠变化不明显。TGF⁃β1/Samd信号通路介导肾小管上皮细胞转化为间充质细胞及肾纤维化［12］。TGF⁃β1具有调节细胞生长和分化的作用，与纤维化密切相关［13］。Smad蛋白是位于TGF⁃β1下游的调节信号蛋白，磷酸化Smad2/3蛋白反映TGF⁃β1的激活水平［14-15］。本研究中，TGF⁃β1、p⁃Samd2/3在正常大鼠肾脏中表达含量极低。经尿毒清颗粒干预后，低、高剂量试验组大鼠肾脏TGF⁃β1、p⁃Samd2/3表达量均下降，且两组间比较，差异有统计学意义。

本研究应用尿毒清颗粒治疗慢性肾衰竭大鼠，通过观察大鼠血肌酐、尿素氮、肾脏TGF⁃β1、p⁃Samd2/3水平及大鼠肿瘤体积的情况，探讨了TGF⁃β1/Smad通路影响腹膜纤维化的机制，得出尿毒清颗粒治疗慢性肾衰竭的机制，为临床应用提供参考依据。本研究不完善之处在于需要观察大鼠生存质量所以无法处死获得病理切片，而且此实验为短期研究，需要设计长期试验观察尿毒清颗粒对腹膜纤维化的长期作用，Smsd蛋白为TGF⁃β1下游信号通路，其他信号通路是否参与此过程仍需进一步试验验证。

综上所述，尿毒清颗粒可提高慢性肾衰竭腹膜透析大鼠生存质量，降低血肌酐、尿素氮水平，其机制可能与调节TGF⁃β1/Smad通路有关。

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