2017年湖南省永州市活禽市场禽流感污染状况调查

邹玖零，吴昌奇，郝知友，屈蓓蓓，禹小芳，刘 刚，李英明，尹秋元

（1. 永州市畜牧水产局，湖南永州 425000；2. 永州市冷水滩区畜牧水产局，湖南永州 425000）

禽流感（Avian influenza，AI）是由甲型禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）引起的一种禽类传染病，可导致火鸡、鸡、鸽子、珍珠鸡、鹌鹑等陆禽发病，其中火鸡和鸡对其最易感，引起的发病率和死亡率较高[1]。鸭和鹅等水禽是AIV的自然宿主[2]，可隐性带毒。研究发现AIV可在水禽消化道中繁殖，并且不同亚型病毒在体内可不断重组变异[3]。AIV根据致病性不同可分为高致病性和低致病性两种，其中H5、H7亚型为高致病性[4]。世界动物卫生组织（OIE）将高致病性AI列为法定报告动物疫病，我国将其列为一类动物疫病[5]。近期的AIV主动监测显示，阳性样品主要来自活禽交易市场。为有效研判湖南省永州市AI流行态势，进一步制定具有针对性的防控措施，2017年4—12月对该市禽类调运频繁的冷水滩黄泥井活禽交易市场、零陵虎子岭禽类批发市场及部分城乡农贸市场进行了AIV污染状况调查。

1 材料与方法

1.1 样本采集

起初样品采集点设在冷水滩区黄泥井活禽交易市场，每月采集5个摊位50份家禽拭子（3个水禽摊位、2个鸡摊位）、10份环境拭子（包括笼具、食物、饮水、污水等，每个摊位2份）；后续扩大了样品采集范围，在部分城乡农贸市场及零陵虎子岭禽类批发市场也开展了调查。

1.2 主要试剂及仪器

核酸提取试剂盒（磁珠法）：购自杭州艾康生物技术有限公司；禽流感病毒H5/H7亚型实时荧光RT-PCR检测试剂盒：购自中山大学达安基因股份有限公司。其他仪器：ABI7500实时荧光PCR仪；杭州艾康生物科技生产的核酸提取仪。

1.3 检测方法

按禽流感病毒H5/H7亚型实时荧光RT-PCR检测试剂盒说明书进行病原检测。从采集的样本中提取病毒 RNA 后，以实时荧光定量反转录-聚合酶链反应法（real time RT-PCR）检测 H5、H7亚型核酸；CT值＜38判定为阳性。

1.4 数据分析

将有关数据录入Excel 2003软件进行整理，分析不同动物种类、时间、场所、来源地及环境样品中的阳性率是否存在差异，并使用GraphPad Prism 5软件制图。

2 结果

2.1 总体情况

2017年4—12月，每月在市场采集样品进行H5/H7亚型AIV检测，共采集49个摊位（次）的571份样品。其中，在9摊位（次）44份样品中检出H5亚型AIV核酸阳性，阳性检出率为7.7%，未检出H7亚型AIV核酸阳性样品（表1）。

表1 总体检测情况

2.2 时间分布

除5月份未检出阳性样品外，其余月份都检出了H5亚型AIV核酸阳性样品，且临近冬季，阳性检出率明显上升（图1）。另外，检出阳性的禽类均在摊位停留2 d以上。

图1 阳性率时间分布

2.3 病毒分布

44份H5亚型AIV阳性样品中，有鸭拭子27份、环境拭子17份；各类环境标本中，均检测出H5亚型AIV核酸阳性样品，其中饲料2份、粪便5份、笼具3份、饮水1份、污水5份、案板1份，污水中的阳性检出率最高（表2）。9个家禽样品阳性摊位中，有7个在周边环境样品中也检出阳性。

2.4 来源地分布

本次调查的主要检测点为冷水滩区黄泥井活禽交易市场，下半年检测范围拓展到城乡农贸市场和零陵区虎子岭批发市场。检测发现，城乡农贸市场的阳性检出率（23.8%）高于城区活禽交易市场（表3）。另外从活禽调运记录看，检测到阳性的9个摊位中，有7个摊位的活禽来源于本地周边地区，另外2户分别来自广东和广西等外省份。

表2 环境标本检测情况

3 分析与讨论

高致病性禽流感不仅对养禽业带来极大经济损失，而且经过变异后还可以跨种传播给人类[6]，危害公众卫生安全。本次禽流感污染状况调查对全市活禽市场进行了摸底，并对禽流感防控知识进行了宣传。

通过调查发现，永州市活禽市场中存在H5亚型AIV；除5月外，每月都能监测到阳性样品，特别临近冬季阳性率明显上升；另外，活禽在摊位中停留时间越长，阳性检出率越高。这说明活禽在市场停留过程中，AIV在这些活禽之间存在着一个显著的扩散和增殖过程。同时发现，H5亚型阳性样品均来自鸭，其摊位周边环境样品也大多检出阳性，但临床检查和溯源调查均未发现发病禽，为隐性带毒，再次印证了鸭为AIV的携带与保存体，环境散毒污染风险较大。从环境标本类型来看，H5亚型AIV阳性检出率最高的是污水，其次为笼具，最低的是饮水。可能原因：市场环境脏、乱、差，清洗消毒不到位，导致污水中的病毒污染率较高；而饮水一般都是单独器皿盛放，受外源污染风险小且经常更换清洗，所以病毒检出率较低。从样品来源看，城乡农贸市场阳性检出率高于城区活禽交易市场。经调查，阳性率高的市场，环境卫生相对较差，鸡与水禽混合销售，同时还有散户同场销售未经检疫的禽类，因而易导致宿主间的交叉感染，或诱导病毒发生基因重组或突变。通过调查还发现，77.8%阳性摊位活禽来源于本市冷水滩区周边县。因此，严格活禽调运检疫和监管是禽流感防控的重要手段，应杜绝市场内的鸡和水禽混合销售现象，同时还要严防病原从市场回流到养殖环节。

表3 不同来源地检测情况

自2017年秋强制免疫“H7+H5”疫苗以来，永州市未发生H7亚型禽流感疫情，也一直未监测到H7亚型AIV核酸阳性样品，说明做好免疫仍是防控禽流感最重要的手段。但鉴于市场环节H5亚型AIV阳性检出率较高，且溯源调查均未检测到阳性样品，说明活禽来源广、品种杂、密度大的活禽市场是AIV保存、增殖的重要场所[7]。因此，要严格执行“一日一清洗，一周一消毒，一月一休市，过夜零存栏”措施，严把清洗消毒关，切断病毒传播途径，同时要提高养殖户防疫意识，实现防疫观从“要我防”到“我要防”的转变，切实把禽流感发生风险降到最低。

4 结论

本次活禽市场禽流感污染调查发现，永州市活禽交易市场的AIV平均污染率为7.7%，且几乎每月都能检出阳性，说明该地活禽市场长期存在AIV污染，且随着活禽在摊位中停留时间的延长，病毒污染不断加重。鸭等水禽样品的病毒检出率较高，说明水禽是AIV的携带者和储存器，具有较高的病毒散播风险。因此，应禁止市场内陆禽和水禽的混合销售，严格活禽调运检疫和监管。污水以及卫生条件较差的城乡农贸市场中的病毒检出率较高，说明严把市场休市清洗消毒关，提升市场环境的卫生水平，对于禽流感防控尤为重要。

参考文献：

[1] 张毅，王幼明，王芳，等. 我国禽流感研究进展及成就[J]. 微生物学通报，2014，41（3）：497-503.

[2] WEBSTER R G，BEAN W J，GORMAN O T，et al. Evolution and ecology of influenza A viruses[J].Microbiological reviews，1992，56（1）：152-179.

[3] 黄建龙，王昌建，王卫国，等. 环洞庭湖区鸭场低致病性禽流感监测分析[J]. 中国家禽，2013，35（17）：58-60.

[4] 赵君和. 2016年禽流感的流行特点[J]. 中国畜牧兽医，2016，32（1）：1-3.

[5] 甘孟候. 禽流感[M]. 北京：北京农业大学出版社，1995.

[6] KANG N，TAN Y，HE W T，et al. Pathogen surveillance of avian influenza virus in farmers market environment samples in Guangxi，2009[J].Chinese journal of preventive medicine，2011，45（4）：374-375.

[7] 张秀娟，周宏鹏，颜起斌，等. 活禽市场在禽流感流行中的放大机制及应对路径[J]. 中国动物检疫，2017，34（12）：20-23.