结肠癌患者循环肿瘤细胞与临床病理分期的相关性研究

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1.浙江省平湖市第二人民医院外科,平湖 314201; 2.同济大学附属上海市东方医院胃肠肛肠外科,上海 200120

结肠癌作为我国常见的恶性肿瘤,其发病率逐年升高[1]。根治性手术为主的综合治疗是目前主要的治疗手段,但仍存在肿瘤转移复发的风险。因此,迫切需要找到在术前能客观反映肿瘤临床病理分期的指标以全面判断手术风险和预后。循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)是指在肿瘤患者外周血液中可检测到的肿瘤细胞,具有高度活力和高转移潜能,能在合适条件下在其他器官内增殖并导致肿瘤远处转移。近年,CTCs与肿瘤临床病理分期相关性引起高度重视,通过检测外周血中CTCs可为客观判断肿瘤患者的临床病理分期和预后提供依据[2-3]。本研究通过检测结肠癌患者术前外周血中CTCs,分析其与术后临床病理分期之间的相关性。

1 材料与方法

1.1 临床资料

随机抽取平湖市第二人民医院2015年1月—2016年12月新入院结肠癌患者。入组标准:(1)年龄、性别不限;(2)结肠镜检查并经组织学活检确诊为结肠癌;(3)入组前未接受任何化学药物、放射、免疫制剂、中医中药等抗肿瘤治疗;(4)签署知情同意书。记录这些患者的术后临床病理资料,包括肿瘤大小、浸润深度、神经脉管侵犯、淋巴结转移等。并以同时期住院的肛瘘、混合痔、结肠息肉等良性病变患者作为对照组,患者病变组织均经病理确诊。

1.2 CTCs检测

于术前1天经患者肘静脉抽血7.5 mL,用肝素抗凝,应用CellSearch系统(美国强生公司)检测外周血中CTCs数量。CTCs判断标准:(1)光镜下有完整的细胞核,细胞呈圆形、椭圆形或长形,细胞长径>10 μm;(2)荧光下细胞形态及边缘完整,荧光染色标准anti-CK8/CK18/CK19抗上皮细胞表面抗原阳性,anti-CD45抗白细胞表面抗原阴性;(3)细胞核DAPI核染色阳性,细胞核直径大于8 μm,并且核形状不规则;(4)细胞核染色与其相应细胞膜染色部位大于50%以上。

1.3 观察指标

分析结肠癌患者外周血中CTCs与肿瘤大小、侵犯深度、肿瘤分化程度、淋巴结转移、TNM分期等相关性。

1.4 统计学处理

所有数据均用 SPSS 19.0软件进行统计学分析。计量资料采用均数±标准差表示,χ2检验或Fisher精确概率法分析CTCs与肿瘤侵犯深度、分化程度、淋巴结转移、TNM分期等相关性;P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般资料

结肠癌患者共32例,男18例,女14例,年龄32～81岁,平均(65.28±12.67)岁。其中,13例结肠癌患者术前外周血中检出CTCs,阳性率40.6%。10例对照组外周血中均未检出CTCs,差异有统计学意义(P<0.01)。

2.2 结肠癌患者外周血CTCs与临床病理相关性

结肠癌患者外周血CTCs阳性与患者年龄、性别、肿瘤是否神经侵犯无关,但与肿瘤浸润深度、TNM分期、脉管侵犯,差异有统计学意义(P<0.05),见表1。

表1结肠癌患者外周血CTCs和临床病理间联系
Tab.1RelationshipbetweenCTCsinperipheralbloodandclinicopathologicalfeaturesinpatientswithcoloncancer

项目例数阳性数(阳性率/%)P值年龄/岁<65188(44．4)≥65145(35．7)>0．05性别男187(38．9)女146(42．9)>0．05浸润深度T110(0)T251(20)T3125(41．7)T4147(50)<0．05TNM分期Ⅰ期10(0)Ⅱ期82(25)Ⅲ期157(46．7)Ⅳ期84(50)<0．05神经侵犯(+)198(42．1)(-)135(38．5)>0．05脉管侵犯(+)209(45)(-)124(33．3)<0．05

2.3 不同浸润深度对CTCs阳性率影响

浸润程度深 (T3+T4) 患者的CTCs阳性检出率显著高于浸润深度较浅 (T1+T2) 患者(P<0.05),见表2。

表2 结肠癌浸润深度与CTCs阳性率的比较Tab.2 Comparison of CTCs positive rates in patients with different infiltration depths of colon cancer

2.4 不同TNM分期对CTCs阳性检出率影响

TNM分期高(Ⅲ+Ⅳ)患者CTCs阳性检出率显著高于TNM分期低(Ⅰ+Ⅱ)患者(P<0.05),见表3。

表3 不同TNM分期结肠癌患者CTCs阳性率比较Tab.3 Comparison of CTCs positive rates in patients with different TNM stages of colon cancer

3 讨论

癌微转移是肿瘤恶性特征之一,与肿瘤临床病理分期、转移复发、预后紧密相关。原发灶部分肿瘤细胞具有高度侵袭能力,可通过侵犯血管周围基质、突破基底膜进入血循环而成为CTCs。一旦CTCs离开血循环进入其他脏器局部组织,逃脱机体免疫监视,存活并发生克隆增殖,最终将形成肉眼可见的肿瘤转移灶。CTCs在外周血中数量稀少,据报道一般每107～108个正常外周血细胞中约含有1个CTC[4-5]。以往由于检测技术限制,只能检测外周血肿瘤标志物如癌胚抗原、CD153、CD199、CD125、CD724、细胞角蛋白(cytokinases,CKs)等。

CTCs检测是近年兴起的一项临床新技术,它通过CellSearch系统、微流控芯片等技术直接检测外周循环血中肿瘤细胞数量。据报道,肺、乳腺、肝、胃、结直肠癌等多种实体瘤患者外周血中都能检测到CTCs,且CTCs恶性度与原发肿瘤细胞大致相同[2];CTCs存在与肿瘤分期有明显相关性,CTCs数越多患者面临远处转移负荷越重,未来发生转移灶越多[6-7];且CTCs与肿瘤微转移也密切相关[8]。

本研究中结肠癌患者外周血中能够检测到CTCs,且与患者临床肿瘤病理分期高度相关,TNM分期越晚,CTCs阳性率越高,与文献报道一致。但有几个现象应在今后的研究中加以重视:(1)结肠癌患者外周血中CTCs检测总阳性率不高。(2)少数肿瘤浸润较浅、分期较早的结肠癌患者也能检测到CTCs,这可部分解释临床上少数结肠癌患者虽病理分期不晚、甚至进行了规范化疗,但很快远处转移的现象,或许与CTCs存在有一定关系。(3)个别TNM分期很晚甚至出现肝脏转移患者,其CTCs阴性,提示目前的CTCs检测技术还不尽完善并可能存在假阴性现象,或与CTCs在循环血中数量极少、分布不均、随机单次采血检测CTCs有难度和偶然性有关。

另外,CTCs与患者预后相关性也值得探讨。有报道,外周血CTCs、CK20 mRNA阳性胃癌患者的预后比那些CK20阴性者差[8]。一项meta分析结果表明,CTCs与循环DNA检测对胃癌患者预后判断也有重要参考价值。因此,CTCs阳性与结肠癌患者预后相关性也有待日后深入研究。

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