高效液相色谱法测定苹果醋饮料中糖精钠含量

罗兰萍，马飞英

(广东石油化工学院，广东 茂名 525000)

苹果醋是以苹果汁为原料，先后经过酵母菌与醋酸菌种发酵，得到的具有的酯香和苹果汁特有的果香融合在一起的醋酸溶液，兼具水果和食醋的营养、保健功能，具有预防心脑血管疾病、消除疲劳、美容等功效，用其调配的果醋饮料受欢迎程度颇高；苹果醋饮料则是以苹果醋溶液、果汁、水为原料，并加入其他食品添加剂而调配成的饮料[1-3]。食品添加剂是在食品加工过程中，为了改善食品色、香和味或为防腐、保鲜和加工工艺的需要而加入的人工合成或者天然物质，糖精钠是一种国际通用、性价比较高的食品添加剂，其甜度约为普通甜味剂的500倍，在各类食品加工中得到广泛的应用[4-5]。糖精钠价格低廉, 添加方便, 故使用面很广。但如不严格控制添加量，过量食用会对人体造成危害，因此必须对市售食品的添加剂情况进行监测[6]。目前检测糖精钠的方法有高效液相色谱法[4-8]、紫外分光光度计法[9-11]、液相色谱-质谱联用法[12]、比值导数法[13]。本研究采用高效液相色谱法建立了苹果醋饮料中糖精钠含量的测定方法，该方法不需要对样品进行复杂的前处理，且定量准确，稳定性好，检测时间短，检测成本低，为苹果醋饮料中甜味剂的检测提供了依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

甲醇(色谱纯)：瑞典Oceanpak公司；氨水(优级纯)：广州化学试剂厂；乙酸铵(色谱纯)：上海谱振生物科技有限公司；糖精钠标准品：中国计量科学研究院；苹果醋酸饮料：购于茂名市沃尔玛超市。

1.2 仪器与设备

LC-20A型高效液相色谱仪(紫外检测器)：日本岛津公司；101C-2B型电热鼓风干燥箱：上海实验仪器厂有限公司；YP402N型电子天平：上海精密科学仪器有限公司；0.45μm微孔滤膜(有机系及水系)：天津市津腾实验设备有限公司；GM-0.33A型隔膜真空泵：天津市津腾实验设备有限公司；ULUP-Ⅰ-10T台上式超纯水机：优普公司；KQ5200E型超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 流动相的配制

准确称取1.56 g固体乙酸铵，用超纯水溶解后定容至1000 mL的容量瓶，并通过0.45μm微孔滤膜(水系)抽滤，得到0.02 mol/L的乙酸铵溶液。

甲醇溶液与0.02 mol/L的乙酸铵溶液均经过抽滤、超声脱气处理备用。

1.3.2 糖精钠标准溶液的配制

准确称取0.0851g(120℃烘干4 h)糖精钠，加0.02 mol/L乙酸铵溶液溶解，定容至100 mL，得到糖精钠浓度为1. 0 mg/ mL的标准样品储备溶液，待用。

分别吸取100、200、500、1000、2000μL的储备溶液于10 mL容量瓶中，用0.02mol/L乙酸铵溶液定容至刻度，摇匀，得到浓度为10、20、50、100、200μg/mL的系列标准工作曲线溶液，供高效液相色谱仪测定。

取与上述糖精钠不同批次的标准品，用同样的方法配置糖精钠浓度为50μg/mL的糖精钠溶液，待用。

1.3.3 样品前处理

准确称取市售的6种苹果醋饮料10 g(精确至0.001 g)于烧杯中，常温下超声脱气30 s。用氨水(1+1)调节pH值至中性，用0.02 mol/L乙酸铵溶液定容至25 mL，取适量样品，经0.45μm针筒式滤膜过滤器过滤，滤液等待上机分析。取滤液10μL注入高效液相色谱仪，按标准溶液保留时间定性，用外标法求出滤液中糖精钠的浓度。

1.3.4 液相色谱条件

色谱柱：C18反相色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇-0.02 mol/L乙酸铵溶液；流动相流速：1.0 mL/min；检测波长：230 nm；进样量：10μL。

2 结果与分析

2.1 流动相的选择

流动相对待测物的洗脱能力随着流动相中所含极性溶液比例的变化而变化。本实验所选用的流动相体系为甲醇-0.02 mol/L乙酸铵溶液，适当调整甲醇与0.02 mol/L乙酸铵的配比能改善糖精钠的峰形，缩短分离时间。

采用等度洗脱的方式，保持其他实验条件不变，考察甲醇与0.02 mol/L乙酸铵溶液的配比(分别为5∶95、6∶94、7∶93)对糖精钠分离效果影响，由实验结果所得，增大流动相中甲醇的比例能有效缩短糖精钠的出峰时间。甲醇与0.02 mol/L乙酸铵溶液的配比为5∶95时，出峰时间较慢，达32min 左右；甲醇与0.02 mol/L乙酸铵溶液的配比为7∶93时，出峰时间明显缩短至16.5min 左右，且峰形好。为能较快得到实验结果并节省甲醇用量，实验选择甲醇与0.02 mol/L乙酸铵溶液配比为7∶93的流动相。吸取10μL浓度为100μg/mL的糖精钠标准溶液进行定性检测。从图1中可知，糖精钠的出峰时间16.5min。

图1 糖精钠标准溶液色谱图
Fig.1 Chromatogram for sodium saccharin

2.2 方法的线性范围与检测限

选择10、20、50、100、200μg/mL五个浓度为标准曲线浓度点，每个浓度点重复测量3次，记录色谱峰的面积，取3次峰面积的平均值。以糖精钠的浓度x为横坐标、峰面积的平均值y为纵坐标绘制标准曲线，得到糖精钠的线性回归方程及相关系数；为验证标准曲线的准确性，采用另一批次的糖精钠配制的溶液对标准曲线的中间点进行验证，将浓度为50μg/mL的糖精钠溶液在相同的实验条件下重复测定3次，得平均值为47.13μg/mL，偏差为1.8%。同时，逐渐降低样品中糖精钠溶液的添加量，按1.3.3中方法处理加标后的样品，以所得峰面积相当于基线噪音的3倍(S/N=3)计算糖精钠的检出限[14]。表1所示的结果表明，糖精钠浓度在10～200μg /mL范围内线性关系良好，其回归方程为y=21651x+14756，相关系数R2= 0.9992，检出限为0.008 g/kg。

表1 线性回归方程、相关系数、检出限

2.3 加标回收率和精密度实验

对空白样品进行加标，在未检出含有糖精钠的苹果醋饮料中加入不同体积的糖精钠标准溶液，使其所含糖精钠浓度分别为10、50、200μg/mL，按1.3.3的方法进行前处理后注入高效液相色谱仪进行测定，低中高三个加标浓度均平行测定7次，结果见表2。本方法在低中高不同浓度水平的回收率在90.56%与100.60%之间，RSD不超过5%，回收率高，结果重现性好。

表2 空白样品中加标回收率和精密度试验结果

表2(续)

2.4 样品测定

按照1.3中的方法，对6种市售苹果醋饮料样品(编号1～6)中的糖精钠含量进行测定，每个样品测定3次，得到各样品的色谱图，记录色谱图峰面积，并通过标准曲线计算样品中糖精钠含量，实验结果见表3，6种样品中只有一种检出含有糖精钠，其余5种均为未检出。

表3 苹果醋饮料中糖精钠含量测定结果

3 结论

通过利用高效液相色谱法对苹果醋饮料中糖精钠进行检测。结果表明，该方法操作简单、目标峰出峰快、耗时少且回收率与精密度都良好，是一种理想的测定方法。

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(本文文献格式：罗兰萍，马飞英.高效液相色谱法测定苹果醋饮料中糖精钠含量[J].山东化工,2018,47(7):70-72.)