存放时间对代煎蒲公英汤剂质量的影响

李 青 王 慧 孙文静 杨慧彤 石雪晶 杨丽萍

1.河南中医药大学中医系，河南郑州 450000；2.河南中医药大学中西医结合基础学科，河南郑州 450046

中药汤剂是我国传统医学的精粹，至今也在疾病防治与治疗方面占据重要地位。在调查中发现，代煎中药已成为快节奏生活人群的主要选择[1]。由于代煎中药保存时间存在争议且无明确的相关研究，故代煎汤剂保存时间对其药效的影响值得探讨。本研究以单味代煎蒲公英汤剂为实验主体，以汤剂浓度[2]、pH值[3]、亚硝酸盐[4-5]、抑菌作用[6]四项内容探究随着存放时间的延长单味蒲公英汤剂的质量变化。

1　资料与方法

1.1　主要器材

紫外可见分光光度计1台（北京普析通用仪器有限责任公司，TU-1810）；pH计（安莱立思，PH-400型）；电热恒温水浴锅（北京长风仪器仪表公司，HH.SY21-Ni）；封闭式电夹板（上海雷韵，BGG-2.4）；低速离心机（北京医用离心机厂，LD4-2型）；全机械加码分析天平（万分之一）（上海新航仪器厂，TG328A）；游标卡尺（上海台海工量具有限公司，0～150mm）；生化培养箱（常州国华电器有限公司，250B）；手提压力蒸汽灭菌器 （上海博讯实业有限公司，YXQ-SG46-280A 型）；麦氏比浊仪（北京亚欧德鹏科技有限公司，DP-MC1型）；麦氏比浊管（北京亚欧德鹏科技有限公司，18mm，6管/套）。

1.2　试剂

pH计标准缓冲液（浙江力辰仪器科技有限公司，pH4.00/500mL，pH6.86/500mL，pH9.18/500mL）；营养琼脂平面培养基（北京陆桥技术有限公司，CM107型号/250g）；氯化钡（国药集团化学试剂有限公司，500g/瓶）；硫酸溶液（国药集团化学试剂有限公司，500mL/瓶）；亚铁氰化钾（国药集团化学试剂有限公司，500g/瓶）；乙酸锌（国药集团化学试剂有限公司，500g/瓶）；硼酸钠（国药集团化学试剂有限公司，500g/瓶）；对氨基苯磺酸（山东浩中化工科技有限公司，100g/瓶）；N-1萘基乙二胺（天津市永大化学试剂有限公司，10g/瓶）；亚硝酸钠（国药集团化学试剂有限公司，500g/瓶）；冰乙酸（国药集团化学试剂有限公司，500mL/瓶）；盐酸（国药集团化学试剂有限公司，500mL/瓶）。

1.3　实验方法

1.3.1汤剂制备 委托郑州市高新开发区九州通大学城大药房，机煎蒲公英全草600g，加水8000ml，机煎得浓度为0.1g/mL汤剂6000mL，取1600mL分别灌入容量为200mL的真空包装保存共8袋，200mL/袋。将剩余4400mL汤剂煎制成浓度为2g/mL汤剂220mL，分别灌入容量为200mL的真空包装保存共8袋，27.5mL/袋。

1.3.2不同存放时间汤剂浓度测定 采用分光光度计法测定汤剂浓度。记录数据，观察每日各组汤剂浓度变化。

1.3.3不同存放时间汤剂酸碱度测定 采用pH计法测定汤剂pH值。记录数据，观察每日各组汤剂酸碱度变化。

1.3.4不同存放时间汤剂亚硝酸盐含量测定 用标准曲线法测定各组样品吸光度值，计算亚硝酸盐含量。记录数据，观察每日各组汤剂亚硝酸盐含量变化。

1.3.5不同存放时间汤剂抑菌效果测定 采用抑菌圈大小评价法测定抑菌活性。记录数据，观察每日各组汤剂抑菌活性的变化。

1.4　统计学分析

采用统计学软件SPSS20.0版对数据进行统计分析，计量资料采用（x±s）表示，采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1　不同存放时间汤剂吸光度变化

代煎蒲公英汤剂浓度随时间整体呈上升趋势。与第0天组相比，各组差异均有统计学意义（P＜0.05）。说明存放时间对代煎蒲公英汤剂浓度有影响。见表1。

表1　保存时间对代煎蒲公英汤剂吸光度的影响（x ± s，n=3）

2.2　不同存放时间汤剂酸碱度变化

代煎蒲公英汤剂酸碱度随时间整体呈下降趋势。与第0天组相比，除1天组外，各组差异均有统计学意义（P＜0.05）。说明存放时间对代煎蒲公英汤剂酸碱度有影响。见表2。

表2　保存时间对代煎蒲公英汤剂pH值的影响（x ± s，n=3）

2.3　不同存放时间汤剂亚硝酸盐含量变化

代煎蒲公英汤剂亚硝酸盐含量整体随时间呈上升趋势。与第1天组相比，各组差异均无统计学意义（P＞0.05）。说明存放时间对代煎蒲公英汤剂亚硝酸盐含量的影响有限。见表3。

表3　保存时间对代煎蒲公英汤剂亚硝酸盐含量的影响（x ± s，n=3）

2.4　不同存放时间汤剂抑菌效果变化

代煎蒲公英汤剂抑菌效果整体随时间呈下降趋势。与第0天组相比，除第1天组外，各组差异均有统计学意义（P＜0.05）。说明存放时间对代煎蒲公英汤剂抑菌效果有影响。见表4。

表4　保存时间对代煎蒲公英汤剂体外抑菌疗效的影响（x ± s，n=3）

3　讨论

中药汤剂是临床常用的剂型之一。在调查中发现，代煎药物[7]因其快捷深受欢迎，部分人群为节约时间甚至会一次代煎多付，自行保存5～7d。由于代煎中药的保存时间存在争议且无明确的相关研究，故代煎汤剂保存时间对其质量的影响值得探讨。蒲公英是常用中药之一，药理特性等相关研究较为全面。为减少实验变量，更好的探究存放时间对汤剂质量的影响，故选取疗效确切的单味蒲公英作为实验主体。

中药汤剂质量检测是一项很复杂的科学，国内尚无系统的现代科学仪器和先进的检测手段对其质量进行检测[8]。大众常靠汤剂浓度、气味[9-10]、酸度等判断中药汤剂质量变化，且绝大多数中药汤剂为水煎剂，现有研究表明水中含有微量亚硝酸盐[4-5]，因此汤剂中亚硝酸盐含量是否超标也关系到汤剂的质量。因此参考汉方浸膏制剂的部分实验项目[11]、中国药典[12]、食品安全国家标准中亚硝酸盐与硝酸盐[12-13]的测定。根据蒲公英杀菌的药理作用[6、15]等，故选取药物浓度、pH值、亚硝酸盐含量、抑菌活性作为质量检测指标。

传统经验上，常以汤剂的色泽浓度来判断其质量，缺乏一定的科学性，分光光度计法是经典的测量有色物质含量的方法，本研究发现：蒲公英汤剂浓度随药物存放时间的延长呈上升趋势。目前，pH计法是测定中药酸碱度的常用测量方法，已有实验[3]测定蒲公英提取物的pH值，表明蒲公英提取物的pH值为弱性且酸与其质量和疗效有关，证明蒲公英pH值的测定对评判代煎蒲公英汤剂质量和疗效有意义。本研究发现：蒲公英汤剂的pH值随药物存放时间的延长呈下降趋势。众所周知，过量的亚硝酸盐和硝酸盐摄入会对人体产生危害甚至致癌，而亚硝酸盐和硝酸盐广泛存在于自然界的土壤、水域及植物中。故本实验以此为基点，选取经典用于测定亚硝酸盐含量的常规方法—盐酸萘乙二胺法，测定汤剂中亚硝酸盐含量。结果表明：亚硝酸盐含量均随药物存放时间的延长呈上升趋势，但亚硝酸盐含量最大值0.0372g，均未超过0.2g的国家标准中毒量[16]。蒲公英具有明确的杀菌消毒的药理作用，现有研究表明蒲公英水煎剂对金黄色葡萄球菌有抑菌、杀菌效果[17]。证明蒲公英具有体外抑菌作用，故采用测定抑菌圈大小进行蒲公英汤剂药效测定。结果表明：抑菌圈直径随药物存放时间的延长显著减小。说明代煎蒲公英汤剂抑菌效果随存放时间的延长呈下降趋势。

综上所述，存放时间对代煎蒲公英汤剂浓度、pH值、抑菌效果均有影响。对临床常用的代煎药除了严格控制煎药流程外，还需要严格控制存放时间，一般不应超过3d。

[参考文献]

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