HPLC测定丹参茎叶花中迷迭香酸和丹酚酸B的含量

翟宏宇，郝羚竹，王海洋，单柏宇，杨献玲*

(1.吉林省药品检验所，吉林　长春　130033；2.白城市食品药品检验所，吉林　白城　137000)

丹参别名红丹参、赤参、血参、紫丹参，为唇形科植物丹参SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根及根茎，主产于四川、山东、山西、河北、江苏、安徽等省。春秋季均可采收，以秋季为好[1]。现代药理研究表明，丹参具有扩冠状动脉血管、防止心肌缺血、改善微循环、降低心肌耗氧量等作用[2-5]。丹参中主要含脂溶性的二萜醌类和水溶性的酚酸类成分，其传统用药部位为根和根茎，弃去茎叶部分，但现代药理实验已证明丹参茎叶的药理作用与根、根茎相似，临床疗效类似[6]。丹参地上部分约占全株植物的67%[7]，药源丰富，对其加以开发利用意义重大。本文采用不同产地的丹参茎、叶、花作为研究对象，采用HPLC建立其迷迭香酸、丹酚酸B的含量测定方法，并对其进行分析，旨在为丹参茎、叶、花的药用价值的进一步开发利用提供一定的实验依据。

1　仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1200高效液相色谱仪(美国Agilent)；BT-125D型分析天平(德国Sartorius)；KQ-700DV型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 试剂与材料

对照品迷迭香酸(批号：111871-2011102，纯度：99.8%)、丹酚酸B(批号：111562-201514，纯度：93.7%)，购自中国食品药品检定研究院；甲醇、乙腈为色谱纯(Fisher)；其他试剂均为分析纯，水为超纯水。

丹参样品购自药材市场，由吉林省药品检验所副主任中药师温立义鉴定为丹参SalviamiltiorrhizaBge.的茎、叶、花，产地分别为山东、四川、安徽、河北、甘肃、山西、江苏。

2　方法与结果

2.1 色谱条件

Agilent 1200高效液相色谱仪，Gemini C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈-0.05%磷酸水作为流动相进行梯度洗脱，梯度洗脱时间及比例见表1；流速：0.8 mL·min-1，柱温：30 ℃，检测波长：286 nm。

表1　丹参中迷迭香酸、丹酚酸B测定的流动相梯度洗脱表

2.2 对照品溶液的制备

精密称取迷迭香酸、丹酚酸B对照品适量，加甲醇配制成每1 mL各含迷迭香酸和丹酚酸B 0.1 mg的混合溶液，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取丹参药材，粉碎后过筛，精密称取0.5 g于具塞锥形瓶中，加入50 mL甲醇溶液，称定质量，超声30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.4 方法学考察

2.4.1 线性关系考察分别精密吸取上述对照品溶液1、2、5、10、15、20、25 μL注入色谱仪，按2.1项下的色谱条件进行测定，分别以迷迭香酸和丹酚酸B的含量(μg)和相应的峰面积进行线性回归，计算回归方程。迷迭香酸的回归方程为Y=1 251.7X+7.454 7，r=1.000 0，线性范围为0.08～2.09 μg；丹酚酸B的回归方程为Y=1 100.2X+17.416，r=0.999 9，线性范围为0.11～2.67 μg。

2.4.2 精密度试验精密吸取迷迭香酸、丹酚酸B混合对照品溶液，按2.1项下色谱条件，连续进样6次，记录峰面积。结果显示，迷迭香酸、丹酚酸B峰面积的RSD均小于0.5%，表明仪器的精密度良好。

2.4.3 稳定性试验精密吸取2.3项下的供试品溶液，按2.1项下色谱条件分别于0、4、8、12、18、24、48 h进样，记录峰面积。结果显示，迷迭香酸、丹酚酸B峰面积的RSD均小于0.5%，表明供试品溶液48 h内稳定性良好。

2.4.4 重复性试验取丹参药材6份，分别按照2.3项下方法制备，照2.1项下方法测定，记录峰面积。结果显示，迷迭香酸、丹酚酸B峰面积的RSD均小于0.5%，表明此方法的重复性良好。

2.4.5 回收率试验分别精密称取样品0.25 g，共6份，分别加入迷迭香酸、丹酚酸B对照品适量，按2.2项下方法制备，按2.1项下色谱条件进行测定，分别计算迷迭香酸、丹酚酸B的回收率。结果见表2。

表2　丹参中迷迭香酸、丹酚酸B的回收率试验结果

2.5 样品测定

分别取不同产地全株丹参的茎、叶、花，按2.3项下的方法制备供试品溶液，照2.1项下色谱条件进样，记录色谱图，计算含量，结果见图1、表3。

注：A.对照品；B.供试品；1.迷迭香酸；2.丹酚酸B。图1　丹参样品及对照品HPLC图

表3　丹参中迷迭香酸、丹酚酸B的含量测定结果(n=3) %

3　讨论

丹参作为传统中药，具有活血化瘀、祛瘀止痛、凉血消痈、除烦安神的功效，其根及根茎中含有丰富的丹参酮类和丹酚酸类化学成分，目前市场上已有多种丹参及其复方制剂，如复方丹参片、丹参注射液、香丹注射液、丹参酮胶囊、丹红注射液等，均以丹参根入药，而其地上部分除少量应用外，大多被废弃造成资源浪费和环境污染[8]。本实验以不同产地丹参的地上部分——丹参茎、叶、花作为主要的研究对象，采用高效液相色谱法对其中的丹酚酸类成分——迷迭香酸和丹酚酸B进行含量测定，结果显示，丹参茎、叶、花中迷迭香酸和丹酚酸B的含量均很高，提示可将丹参茎、叶、花作为获取丹酚酸类化学成分的新资源，提高丹参药材的综合利用率。

[1]李红峰，于文敏，高宾.丹参的炮制加工与规格分级[J].药材茶类，2011(24)：42-43.

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[5]陈海明，叶攀.丹参酮ⅡA对心血管内皮细胞氧化应激损伤的保护作用[J].中药材，2008，31(4)：569-572.

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