浙贝母提取物外用对大鼠口腔溃疡模型的影响

张维琼，徐婷，汪国华

浙贝母是百合科植物浙贝母的干燥鳞茎，道地药材“浙八味”之首，宁波市海曙区（因行政区划调整，之前划归鄞州区）是其原产保护区[1]。2015版《中国药典》记载其味苦、寒、归肺、心经，具有清热化痰止咳，解毒散结消痈功效[2]。现代药理研究表明，浙贝母具有镇咳、祛痰、松弛平滑肌、镇痛抗炎、降压、活血化瘀、溶石、止泻、抗菌及抗肿瘤等多种活性[3]。根据文献及笔者临床经验[4]，浙贝母外用可治疗口腔溃疡。本文对浙贝母提取物进行了大鼠口腔溃疡的药理研究，以期为临床用药提供参考和依据。现报道如下。

1　资料与方法

1.1实验动物 SD大鼠，体质量（180±40）g，由浙江大学实验动物中心提供，实验动物许可证号：SYXK（浙）2012-0178。

1.2仪器 ME104型电子分析天平，梅特勒-托利多国际贸易（上海）有限公司；游标卡尺，三丰精密量仪（上海）有限公司。

1.3药材和试剂 浙贝母，宁波迦叶堂农业科技有限公司，批号：160623；浙贝母提取物，取浙贝母粗粉，加4倍量80%乙醇回流2 h，重复一次，合并滤液，减压浓缩，即得；桂林西瓜霜，桂林三金药业股份有限公司，批号：160824；所用试剂均为分析纯或化学纯。

1.4方法

1.4.1造模 大鼠90只，根据大鼠体质量10%水合氯醛溶液3 ml/kg经腹腔注射进行麻醉。麻醉大鼠后取6 cm长的双端开口的玻璃管，其内径为60 mm。玻璃管内放置一小棉球于一端，且棉球的底部齐平于玻璃管开口。在管内滴入90%冰乙酸溶液使小棉球浸透，然后将内置棉球的玻璃管开口平贴于大鼠右侧颊黏膜上，烧灼90s后，见该区域颊黏膜出现大面积不规则的白色损害，24 h后大鼠右颊实验区形成直径60～100 mm 的圆形或椭圆形溃疡面，表面覆盖灰白色假膜，部分腐烂严重，大鼠口腔溃疡模型制成。

1.4.2分组及给药 第2天，取造模成功的75只大鼠，每组15只，随机分为空白组（0.9%氯化钠注射液），浙贝母提取物高剂量组（相当于生药4.0 g/kg）、中剂量组（相当于生药2.0 g/kg）、低剂量组（相当于生药1.0 g/kg）和桂林西瓜霜对照组（1.0 g/kg）。每天给药4次，涂抹于大鼠口腔溃疡处，每次间隔3h，连续6d。记录溃疡大小[以溃疡面直径（cm）表示]及溃疡表面感染情况。溃疡表面感染情况分级，0级：肉眼观察溃疡恢复至正常状态；Ⅰ级：表面无明显假膜；Ⅱ级：溃疡表面有薄层黄白色假膜，周围无水肿；Ⅲ级：溃疡表面假膜较厚，且周围伴有炎性水肿。

1.5统计方法 采用SPSS19.0统计软件进行分析，计量资料以均数±标准差表示，多组比较采用方差分析，两两比较采用LSD-法；计数资料以率表示，采用2检验；等级计数资料采用 Mann-WhitneyU秩和检验。＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

涂抹在大鼠口腔溃疡处连续6 d，第7天观察，浙贝母提取物高、中剂量组及西瓜霜组溃疡愈合率与空白组差异均有统计学意义（2=5.400、3.968、5.400，均＜0.05）。高、中剂量组及西瓜霜组溃疡愈合级数与空白组差异均有统计学意义（=2.210、2.039、2.438，均＜ 0.05）。高、中剂量组在4～6天溃疡愈合直径与空白组差异均有统计学意义（均＜0.05），低剂量组各时间点与空白组差异均无统计学意义（均＞ 0.05），但溃疡愈合直径都变小，显示加快愈合作用。除治疗后3 d的愈合直径外，浙贝母高、中剂量组与桂林西瓜霜组溃疡愈合率、愈合级数及愈合直径差异均无统计学意义（均＞0.05）。见表1～3。

3　讨论

口腔溃疡，又称“口疮”，是常见的口腔黏膜疾病，主要表现为口腔黏膜出现圆形或椭圆形的溃疡，溃疡表浅，呈淡黄色或白色，中央凹陷，边缘整齐，周围绕以红晕，可单发或多发，可发生于口腔黏膜的任何部位[5]。多由于饮食作息不规律、心里压力大、紧张疲劳、体虚及免疫力低下等原因引起[6]。目前，建立口腔溃疡模型方法主要有免疫诱导法、电灼烧法、机械方法、细菌感染诱导法、放射法和化学灼烧法[5,7-9]。本实验选用经典的醋酸复制模型，观察溃疡的愈合级数及愈合直径。该模型操作简单易行，适合大规模的动物实验，可以作为某些促进口腔黏膜愈合的药物及抗炎的药物筛选模型。

中医理论素有“咽喉口齿诸病皆属于火”之说，咽喉口腔、嗓子、牙齿的主要病理变化－红肿、疼痛、化脓等归为“火”的表现。西瓜霜具有清热泻火、消肿止痛的优良功效，被历代医家视之为咽喉、口腔良药，清代名医顾世澄将其正式载入《疡医大全》至今已有二百余年。王海珍[10]选取口腔溃疡患者92例随机分为观察组（西瓜霜喷剂治疗）和对照组（西地碘含片治疗），各46例。结果示观察组患者的治疗有效率和治疗后复发率均显著优于对照组。结论示西瓜霜喷剂治疗口腔溃疡的疗效显著且复发率低。因此，本文选择西瓜霜治疗作为对照组。

目前，对浙贝母地上部分研究还不是很多。崔明超等[11]采用LC-LTQ-Orbitrap MS对浙贝母植株各部位中生物碱和黄酮进行了分析，浙贝母植株各部位中鉴定37个生物碱，主要包括7个生物碱（浙贝宁苷、贝母辛、贝母素甲、贝母素乙、去氢鄂贝啶碱或浙贝丙素、鄂贝啶碱或蒲贝素A、贝母辛氮氧化物）及同分异构体；同时鉴定了16个黄酮类成分，主要包括槲皮素、山柰酚及其苷。王翰华等[12]分别采用小鼠氨水引咳法和豚鼠枸橼酸引咳法研究浙贝母叶与浙贝母花醇提物的止咳活性，小鼠气管酚红排泌法研究化痰活性，豚鼠整体动物引喘法研究平喘活性。结果发现，浙贝母叶醇提物具有明显的止咳、化痰及平喘活性；浙贝母花醇提物具有明显的止咳及化痰活性。基于同一植物不同部位常含有相同或相近的化学成分，开发中药非传统药用部位有利于中药资源多途径、多层次的科学合理利用。例如人参叶、当归地上茎叶及丹参地上茎叶等[13-15]，均已进行了开发。浙贝母鳞茎在越冬时，地上部分任其自然枯萎，造成了一定浪费。

表1　对醋酸致大鼠口腔溃疡愈合数的影响（ =15）

表2　对醋酸致大鼠口腔溃疡愈合级数的影响（ =15）

本实验在醋酸致大鼠口腔溃疡的模型基础上，进行口腔黏膜给药实验，发现浙贝母叶提取物有较强的改善红肿发炎的症状，促进口腔溃疡愈合的作用，其作用机制可能与其促进口腔黏膜血液循环、抗菌及消炎止痛的作用有关，其具体机制有待进一步研究。因口腔溃疡的发病原因多样，免疫法诱导口腔溃疡动物模型与人类自然发作极其相似，但该法造模方法复杂，耗时长，口腔溃疡部位不固定，溃疡平均愈合面积不容易测量，不适合大规模动物实验。本文选取化学烧灼制备口腔溃疡动物模型，不能反应复发性口腔溃疡的发病机制，所以浙贝母提取物在人体中的使用效果有待进一步研究；但本实验为浙贝母地上部分的开发利用，提供了参考和有利的线索。

参考文献：

[1] 王翰华,杨晓春,崔明超,等.浙贝母花配伍宁海白枇杷花的止咳化痰作用[J].中成药,2017,39(9):1921-1923.

[2] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社,2015:292.

[3] 夏继成.常用中药浙贝母的研究进展[J].黑龙江科技信息,2012,12(4):38.

表3　对醋酸致大鼠口腔溃疡愈合直径的影响（ =15）

[4] 梅松政.贝母散治疗口腔溃疡[J].中医杂志,2004,45(7):491.

[5] 肖开,闫欣,苗明三.两面针外用对豚鼠口腔溃疡模型的影响[J].中药新药与临床药理,2012,23(5):533-537.

[6] 杨旭阶.浅谈复发性口腔溃疡治疗[J].当代医学,2008,14(20):18-19.

[7] 廉冰,杨婷,熊昀,等.独一味提取物对大鼠和兔口腔溃疡模型的影响[J].中药药理与临床,2015,31(3):1636-1637.

[8] 谭巧云,满红霞,那凯歌,等.美洲大蠊提取物对口腔溃疡大鼠模型的作用[J].中国临床药理学杂志,2016,32(11):1014-1016.

[9] 刘丹丹,白明,闫欣,等.细辛醋糊外用对豚鼠口腔溃疡模型的影响[J].中华中医药杂志,2012,27(2):334-337.

[10]王海珍.西瓜霜喷剂与西地碘含片治疗口腔溃疡的疗效比较[J].中国现代医生,2011,49(7):136-137.

[11]崔明超,张加余,陈少军,等.浙贝母植株各部位中生物碱和黄酮的 LC-LTQ-Orbitrap MSn分析[J].中国中药杂志,2016,41(11):2124-2130.

[12]王翰华,杨晓春,崔明超.浙贝母叶与浙贝母花醇提物的止咳、化痰及平喘活性研究[J].天津医药,2016,44(10):1207-1209.

[13]胡华刚,肖璇,刘慧敏,等.人参茎叶总皂苷对幼年雄性大鼠生殖系统的影响及作用机制[J].食品科学,2014,35(3):187.

[14]葛月兰.当归资源化学评价与质量标准研究[D].南京:南京中医药大学,2009.

[15]陈士林,肖培根.中药资源可持续利用导论[M].北京:中国医药科技出版社,2006:28.