伊维菌素长效透皮剂的研制及含量测定

刘营营，岳治光，王学良，张素梅，菅复春，张龙现，王荣军，孙　珂，宁长申*(.河南农业大学 牧医工程学院，河南 郑州 45000； .河南安进生物技术股份有限公司，河南 郑州 45000)

伊维菌素是阿维菌素类催化加氢的产物[1-2]，也是目前世界上使用最广泛的兽用抗寄生虫药物之一。与阿维菌素相比，伊维菌素具有驱虫效果更好、稳定性更强、毒副作用更低、安全性更高的特点，在组织、血液浓度较低时即可杀灭各种线虫和蜱、螨等各种体外寄生虫[3-5]。因此，伊维菌素一经出现，便迅速受到广大养殖户的欢迎[6]，并被广泛应用于各种线虫和蜱、螨等各种体外寄生虫的预防和治疗[7-9]。伊维菌素现已被制成口服剂、注射剂、胶囊剂、透皮剂、软膏、搽剂、长效控释及缓释剂等多种剂型药[10-13]。药物经皮肤进入体内时速度相对缓慢，避免肝脏的首过效应，持效时间长且可提高进入机体后的利用率；而且透皮给药方便，对各种家畜给药都简单易行，可以减少动物的应激[14-17]。但目前市场上的透皮剂类药物持效时间短、需反复多次用药，为此，研制伊维菌素长效透皮吸收制剂，以期为兽医临床防控动物体外寄生虫病和线虫病奠定基础。

1　材料和方法

1.1　试验材料

UV 3000型高效液相色谱仪(北京创新通恒科技有限公司)、AUW-120 D型电子分析天平(日本岛津公司)、ZSD-2自动水分滴定仪(上海市安亭电子仪器厂)等。

1.2　试验方法

1.2.1配方依据依据伊维菌素的理化性质，选取无水乙醇、N,N-二甲基甲酰胺、丙二醇为伊维菌素溶剂，氮酮为透皮促渗剂，大分子物质α-吡咯烷酮

为长效稳定剂。

1.2.2配方筛选

1.2.2.1伊维菌素透皮剂的溶剂配方筛选分别选用无水乙醇、N,N-二甲基甲酰胺、丙二醇、氮酮并按一定比例设计6个伊维菌素透皮剂溶剂配方(表1)；6个配方分别配制含伊维菌素0.5%、1.0%、1.5%的3种伊维菌素透皮剂；通过室温试验、高温试验、冷冻试验观察药物溶解度、澄清透明度、稳定性等，以筛选最优伊维菌素透皮剂的溶剂配方和伊维菌素透皮剂配方。

1.2.2.2伊维菌素长效透皮剂的溶剂配方筛选参考最优伊维菌素透皮剂配方筛选结果和兽药典规定，加入一定比例长效剂α-吡咯烷酮设计A1、A2、A3伊维菌素长效透皮剂溶剂配方(表2)，并依据3个溶剂配方分别制备含伊维菌素0.5%、1.0%、1.5%的伊维菌素长效透皮剂，参照1.2.2.1中方法检测其稳定性并筛选最优配方；用筛选的最优配方的3种伊维菌素长效透皮剂分别罐装、密封后于水浴锅中煮沸20 min灭菌，然后各均分为3份并将其分别置-20、4、40 ℃条件下，进一步观察其稳定性。

表1　伊维菌素透皮剂的溶剂配方　%

表2　伊维菌素长效透皮剂的溶剂配方　%

1.2.3伊维菌素长效透皮剂中伊维菌素含量测定采用高效液相色谱法：应用150 mm× 2.1 mm×5 μm Waters surfire C18色谱柱，流动相为乙腈︰甲醇︰水=56∶38∶6，流速1.0 mL/min，检测波长254 nm，柱温30 ℃，进样量20 μL。

1.2.3.1标准曲线绘制精确称取伊维菌素标准品20. 86 mg，置200 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得100 μg/mL对照品储备溶液。用甲醇稀释为10、20、40、50、100 μg/mL的系列溶液，以伊维菌素标准品质量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线。

1.2.3.2精密度试验取含伊维菌素0.5%、1.0%、1.5%的伊维菌素透长效皮剂供试品溶液，在1.2.3.1条件下分别进样20 μL，分别于1、3、5 d测定伊维菌素含量，每天测定5次，计算日内和日间精密度。

1.2.3.3回收率试验分别将0.5%、1.0%、1.5%的伊维菌素长效透皮剂制备成伊维菌素质量浓度为37.5、50.0 μg/mL的2种溶液，分别加入不同质量浓度的对照品溶液并进样测定伊维菌素含量，根据标准曲线计算含量和回收率。

1.2.3.4伊维菌素含量测定制备3批次0.5%、1.0%、1.5%的伊维菌素长效透皮剂，分别测定伊维菌素含量，记录不同批次间的含量变化。

1.2.3.5含水量测定用自动水分滴定仪测定伊维菌素长效透皮剂的含水量。

2　结果与分析

2.1　伊维菌素溶剂配方筛选结果

以不同成分按一定比例制备的6个伊维菌素透皮剂的溶剂配方稳定性试验结果表明(表3)，配方2(30%无水乙醇、2%氮酮、68%丙二醇)和配方6(2%氮酮、50% N,N-二甲基甲酰胺、48%丙二醇)较好，溶液澄清透明且在不同温度条件下比较稳定。以6个伊维菌素透皮剂的溶剂配方分别配制的0.5%、1.0%、1.5%伊维菌素透皮剂，稳定性试验结果表明，溶剂配方2和配方6制备的1%伊维菌素透皮剂药物溶解度和制剂稳定性较好。

表3　伊维菌素透皮剂的溶剂配方稳定性试验结果

2.2　伊维菌素长效透皮剂溶剂及配方筛选结果

2.2.1长效透皮剂的溶剂最优配方室温和冻融试验结果表明，以不同成分按一定比例制备的A1、A2、A3伊维菌素长效透皮剂溶剂配方中，配方A3(18%无水乙醇、2%氮酮、50%的N,N-二甲基甲酰胺、30% α-吡咯烷酮)制成的伊维菌素长效透皮剂溶剂的稳定性最好(表4)。

2.2.2长效透皮剂最优配方室温和冻融试验结果表明，以溶剂A3制备的0.5%、1.0%、1.5%伊维菌素长效透皮剂稳定性均良好，室温和冻融后均无析出(表4)。

从表5可以看出，以A3溶剂配方3种含量伊维菌素长效透皮剂分别于4 、40 ℃条件下放置7 d,，每天观察，期间均无药品析出。-20 ℃条件下，每天取出观察时均有少量析出，但0.5%、1.0%制剂在室温15 min左右即可恢复正常，1.5%制剂需25 min可恢复。

表4　不同溶剂不同含量伊维菌素长效透皮剂稳定性试验结果

表5　A3溶剂配方3种含量伊维菌素长效透皮剂的稳定性试验结果

2.3　伊维菌素长效透皮剂中伊维菌素含量测定结果

2.3.1标准曲线由所测数据可知，伊维菌素在10～100 μg/mL时呈良好的线性关系。以伊维菌素标准品质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准曲线。如图1所示，标准曲线的回归方程为y=31 172x+137 536，R2=0.999 6，r=0.999 8，结果符合要求。

图1　伊维菌素标准溶液标准曲线

2.3.2精密度测定3个样品的日内精密度和日间精密度均小于1%，表明样品精密度良好(表6)。

2.3.3回收率经测定含伊维菌素0.5%、1.0%、1.5% 的透皮剂的回收率为90%左右(85.94%～95.50%)，均在80%～120%(表7)。

表6　3个样品的日内精密度和日间精密度　%

表7　样品的及含量与回收率

2.3.4不同批次间伊维菌素含量将3个批次0.5%、1.0%、1.5% 的伊维菌素长效透皮剂依次标记为样1、样2、样3，每个样品重复2次，测定其伊维菌素含量，结果显示，除20160401批次伊维菌素含量为122.48%外，其他含量在99.23%～108.02%，符合兽药典所规定范围在90%～110%的要求(表8)。

表8　不同批次药品含量的测定结果　%

2.3.5含水量将 0.5%、1.0%、1.5% 的伊维菌素长效透皮剂依次标记为样品1、样品2、样品3，每个样品重复3次，测定其含水量，结果0.5%制剂的3次测定和平均含水量均大于1%，而1.0%、1.5%制剂的3次测定和平均含水量均在1%以内，符合要求(表9)。

表9　伊维菌素长效透皮剂中的水分测定　%

3　结论与讨论

依据伊维菌素不溶于水，易溶于有机溶剂的特性，选用无水乙醇、丙二醇、N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，并加入适量的透皮吸收剂氮酮制备出伊维菌素透皮剂，通过稳定性试验证明本溶剂配方能够使伊维菌素完全溶解且无析出。依据前期筛选出的伊维菌素溶剂配方，加入适量α-吡咯烷酮制备伊维菌素长效透皮剂，并制备含伊维菌素分别为0.5%、1.0%、1.5%的伊维菌素长效透皮剂，通过常温观察、高温试验、冷冻试验、药物析出度试验等稳定性试验，研制、筛选出稳定性最优的伊维菌素长效透皮制剂。

在广东理工学院担任《中级财务会计》课程的这几年教学实践中进行了一些尝试，对于学生主体与老师主导的关系，组织教学形式多样、教学过程及教学内容三个方面做了一些探索，这些方法的确可以调动学生自主学习的积极性。前提必须要保证《中级财务会计》课程的教学模式改革方向应该和本单位的人才培养方案一致，同时需要我校领导、教师和学生一起共同努力才能完成，所以教学改革是一项长期的，艰巨的道路。

本研究研制的伊维菌素长效透皮剂符合国家相关标准且工艺安全、制备方便、稳定性好。用高效液相色谱法检测研制的0.5%、1.0%、1.5%伊维菌素长效透皮吸收剂精密度试验结果表明，日内精密度和日间精密度均小于1%；回收率试验结果表明，伊维菌素回收率均在90%左右；不同批次间伊维菌素含量测定结果表明，除20160401批次(1.5%伊维菌素长效透皮剂)伊维菌素含量过高，其他批次的伊维菌素含量在99.23%～108.02%；含水量测定结果表明，除0.5%制剂外，1.0%、1.5%制剂的含水量均在1%以下，符合中国兽药典(2015版)伊维菌素含水量不超过1%的规定。

长效伊维菌素透皮剂主要是根据药剂学的理论进行配方设计，选取大分子物质α-吡咯烷酮为长效剂，由于其独特的化学结构特点，在透皮溶液中不仅起到较长时间内持续释放药物的特点，还避免药物的水解和降解，提高了药物的稳定性。配方设计前的基础工作，如测定药物的理化性质等，做到了程序化、规范化，为最终配方的确定提供了有力的依据。综上，本研究研制的工艺简单、安全，可望为兽医临床防控动物体外寄生虫病和线虫病提供更为方便有效的伊维菌素制剂。

参考文献:

[1]Mckellar Q A，Benchaoui H A.Avermectins and milbemycins[J].Journal of Veterinary Pharmacology & Therapeutics,1996，19(5):331-351.

[2]Campbell W C，Benz G W.Ivermectin:A review of efficacy and safety[J].Journal of Veterinary Pharmacology and Therapeutics，1984，7(1):1-16.

[4]扈洪波，朱蓓蕾，李俊锁.阿维菌素类药物的研究进展[J].畜牧兽医学报，2000，31(6):520-529.

[5]Lespine A，Martin S，Dupuy J，etal.Interaction of macrocyclic lactones with P-glycoprotein:Structure-affinity relationship[J].European Journal of Pharmaceutical Sciences Official Journal of the European Federation for Pharmaceutical Sciences,2007,30(1):84-85.

[6]刘耀川，赵刚，宁静，等.阿维菌素的研究进展[J].现代畜牧兽医，2012,21(1):60-62.

[7]吴仲达，李光裕，程霞，等.伊维菌素的驱虫应用研究进展[J].兽药与饲料添加剂，2002,7(2):21-23.

[8]韩启真，陈瑞杰，郑晓云，等.伊维菌素治疗人体寄生虫病的研究进展[J].中国寄生虫病防治杂志，2005，18(5):47-49.

[9]Bishop B F，Bruce C I，Evans N A.Selamectin:A novel broad-spectrum endectocide for dogs and cats[J]．Veterinary parasitology，2000，91(3/4):163-176.

[10]李有业.寄生虫对伊维菌素的抗药性及其应对措施[J].兽药与饲料添加剂，2003,8(5):11-12.

[11]李春生.伊维菌素片剂对犊牛新蛔虫病的治疗效果观察[J].畜牧兽医杂志,2009,28(5):117-118.

[12]Lo P K，Fink D W，Williams J B，etal.Pharmacokinetic studies of ivermectin：Effects of formulation[J]．Veterinary Resesrch Communications,1985,9(4):251-268.

[13]陈小军,孙志良,杨惠麟.伊维菌素制剂在动物医学中的研究进展[J].湖南畜牧兽医,2005(1):1-3,11.

[14]Megha，Sawatzki P，Kolter T，etal.Effect of ceramide N-acyl chain and polar headgroup structure on the properties of ordered lipid domains(lipid rafts) [J].Biochimica et Biophysica Acta(BBA)-Biomembranes，2007，1768(9):2205-2212.

[15]Wartewig S，Neubert R H.Properties of ceramides and their impact on the stratum corneum structure:A review [J].Skin Pharmacology & Physiology，2007，20(5):220-229.

[16]方世平，杨宝玉.药剂学促进透皮吸收技术的机制[J].中国医院药学杂志，2000，20(12):750-752.

[17]刘成，胡晋红，朱全刚.透皮吸收制剂基质的研究进展[J].中国新药杂志，2002，11(8):601-604.