低离子强度盐溶液在交叉配血试验和不规则抗体检测中的应用

朱立新 许瑞军

不规则抗体是引起临床输血反应的主要原因之一［1-2］。为确保临床输血安全，要求对既往有输血、妊娠、血液病史［3-4］的所有受血者和供血者等都常规检测不完全抗体以及受血者和供血者交叉配血是否相容［5］。1984年Yves lapierre博士发明了微柱凝胶技术，1988年瑞士达亚美公司将专利产品推向市场。这一技术是基于游离红细胞和聚集红细胞能否通过具有分子筛作用的凝胶颗粒构成的胶体介质的原理，从而使不同状态的红细胞得以分离，是一种在微柱管中用凝胶介质进行的凝集反应。微柱凝胶广谱抗人球蛋白试剂检测卡是微柱凝胶技术和抗人球蛋白试验方法相结合的新型产品，近年来在国内外得到广泛应用。在日常工作中，对用于交叉配血的红细胞悬液或不规则抗体筛选谱的红细胞悬液，是用生理盐水还是低离子强度盐溶液配制的问题，似乎并未引起多数业务人员的足够重视，而其对微柱凝集法试验结果的影响，也未有太多报道。对此，本研究收集本院3 125例受血者交叉配血及不规则抗体筛选标本和3 125例供血者的血液标本，分别用生理盐水、低离子强度盐溶液配制的红细胞悬液进行微柱凝集法交叉配血和抗筛试验，探讨两种红细胞配制方法在微柱凝集法交叉配血试验和不规则抗体检测中的影响。

1 材料与方法

1.1 检测对象 收集2015年10月—2016年12月本院3 125例门诊与住院申请输血和手术备血患者（受血者）的交叉配血标本和红细胞不规则抗体检测标本，以及3 125例供血者的血液标本，其中受血者血样于输血前3 d内采集。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂 微柱凝集卡（IgG+C3d检测卡）和2号稀释液（ID-Diluent 2）为瑞士达亚美公司产品；低离子强度盐溶液和抗人球蛋白检测卡为长春博迅生物技术公司产品；生理盐水为四川科伦药业股份有限公司产品。仪器为瑞士达亚美公司微柱凝胶卡专用孵育器及离心机、长春博研医用离心机。

1.2.2 低离子强度盐溶液的配制 将NaCl、甘氨酸、葡萄糖和磷酸盐按设定的比例混合，加入防腐剂后，调整pH至6.6～6.8。

1.2.3 交叉配血试验 用EDTA-K2抗凝管采集患者血液2.0～3.0 mL，以3 000 r/min（离心半径为12 cm），离心5 min后分离血浆。取受血者与供血者红细胞，分别用生理盐水、低离子强度盐溶液配成0.8%的红细胞悬液。抗人球蛋白检测卡主侧管加入受血者血浆50 μL和供血者0.8%的红细胞悬液50 μL，次侧管中加入供血者血浆50 μL和受血者0.8%的红细胞悬液50 μL，置37 ℃孵育15 min，用长春博研医用离心机离心5 min，观察结果。用达亚美2号稀释液配制的0.8%红细胞悬液，达亚美微柱凝胶卡主侧管加入受血者血浆25 μL和供血者的0.8%红细胞悬液50 μL，次侧管中加入供血者的血浆25 μL和受血者的0.8%红细胞悬液50 μL，置37 ℃孵育15 min，达亚美专用离心机离心10 min，观察并记录交叉配血结果。

1.2.4 不规则抗体筛检 用无添加剂的普通管采集受血者血液3.0～4.0 mL，以3 000 r/min（离心半径为12 cm），离心5 min后分离血清，将筛选谱红细胞分别用生理盐水、低离子强度盐溶液配成0.8%的红细胞悬液。分别在标记好的抗人球蛋白检测卡微管中加入筛选谱红细胞各1滴（或50 μL），后立即加入被检者血清 1 滴（或 50 μL），置 37 ℃孵育 15 min，用长春博研医用离心机离心5 min，观察结果。用达亚美2号稀释液将谱红细胞配制成0.8%的红细胞悬液，分别在标记好的达亚美微柱凝胶卡微管中加入筛选谱红细胞各1滴（或50 μL），之后立即加入被检者血清25 μL，置37 ℃孵育15 min，用达亚美专用离心机离心10 min，观察并记录抗筛结果。

1.3 统计学处理 使用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析，计数资料以率或百分比表示，采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种介质红细胞悬液交叉配血和抗体筛检结果阳性率比较 6 250份交叉配血标本用低离子强度盐溶液配制红细胞悬液，微柱凝集法交叉配血，检测出现58例阳性反应；用生理盐水配制的红细胞悬液检测出现33例阳性反应。6 250份红细胞不规则抗体检测标本（含3 125份供血者血样）用低离子强度盐溶液配制红细胞悬液，微柱凝集法进行抗体筛检，检测出现62例阳性反应；用生理盐水配制的红细胞悬液检测出现42 例阳性反应。两种介质红细胞悬液交叉配血、抗体筛检结果阳性率比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）。见表1和表2。

2.2 两种介质红细胞悬液交叉配血和抗体筛检反应强度比较 在微柱凝胶卡的反应凝集强度用生理盐水配制的红细胞悬液较低离子强度盐溶液配制的红细胞悬液敏感性明显降低，尤其在（3+）～（4+）的凝集反应强度下，低离子强度盐溶液法较生理盐水法检测敏感性明显升高，提高了反应强度，增加了检测的准确性。两种介质红细胞悬液交叉配血、抗筛检测反应强度比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）。见表3和表4。

表1 生理盐水和低离子强度盐溶液两种介质红细胞悬液交叉配血试验结果比较

表2 生理盐水和低离子强度盐溶液两种介质红细胞悬液不规则抗体筛查结果比较

表3 生理盐水和低离子强度盐溶液两种介质红细胞悬液交叉配血试验反应强度比较

表4 生理盐水和低离子强度盐溶液两种介质红细胞悬液不规则抗体筛查反应强度比较

3 讨论

低离子强度盐溶液主要由葡萄糖，NaCl，甘氨酸及防腐剂等组成。由于低离子强度盐溶液可降低介质的离子强度，且降低红细胞的Zeta电位可增加抗原抗体结合［6-7］，从而使原来在盐水介质中不能凝集红细胞的抗体发生凝集。交叉配血试验和不规则抗体筛检试验的阳性检测率在低离子强度盐溶液介质中均显著增加，检测结果的准确性明显提高。

本研究的检测结果说明，用低离子强度盐溶液稀释红细胞时，其检测灵敏度明显高于用生理盐水。我们认为，低离子强度盐溶液用于微柱凝集法交叉配血试验和不规则抗体筛检有很多优点： ① 使用低离子强度盐溶液稀释红细胞，可使抗原抗体的结合能力增强，大大减少了孵育时间，使输血相关试验的检测效率增加［8］； ② 增加了不规则抗体的检出率，尤其是弱抗体或低浓度抗体的检出率，提高了输血安全性； ③ 提高了微柱凝集法交叉配血和抗筛检测试验的敏感性，且结果稳定［2，9-10］。值得注意的是，低离子强度盐溶液并不适合用作红细胞储存溶液，红细胞在低离子强度盐溶液的储存时间超过12 h后，会耗损部分抗原。在配制红细胞悬液时尚需注意红细胞的稀释浓度，以便获得最佳离子强度，而改变红细胞浓度可能会影响间接抗人球蛋白试验的特异性或敏感性［11］。采取适当的方法保存低离子强度盐溶液，也是确保交叉配血试验结果可靠性的重要手段［12］。总之，在实际临床输血过程中，影响因素很多且无法避免［13-15］。首先应严格按照说明书进行试验操作，以确保试验的准确性；同时应运用微柱凝集法、凝聚胺法和生理盐水法等多种方法联合配血，有助于最大限度地减少输血事故的发生，保证临床输血安全。

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