特异性皮炎患者外周血Th1/Th2平衡的意义

胡俊青* 袁 青

（金华市中心医院检验科，浙江 金华 321000）

特异性皮炎是一种免疫紊乱的炎性皮肤病，临床表型各异，其机制可能与患者易感基因、环境因素、皮肤屏障完整性破坏及免疫失调有关。目前研究发现CD4+T细胞的自身免疫功能紊乱在其中发挥重要作用。辅助性T细胞（Th）参与介导自身免疫反应过程，因此有必要研究Th细胞平衡在特异性皮炎发病过程中的作用。

1 对象与方法

1.1 研究对象：选自2016年4月至2017年1月在我院门诊就诊的特异性皮炎患者20例作为病例组，年龄20～36岁。20例正常体检者作为对照组，年龄22～34岁采集静脉肝素抗凝血2 mL。

1.2 方法

1.2.1 Th1/Th2细胞百分率频数检测：AD患者及健康体检者均于空腹状态下抽取静脉血3～5 mL，以肝素钠抗凝。向96孔细胞培养板吸取200 μL加入含10%小牛血浆的1640细胞培养液，加入200 μL肝素抗凝血等体积稀释，充分混匀，加入植物血凝素、离子霉素及蛋白转移抑制剂莫能霉素工作液各10 μL，置二氧化碳培养箱（37 ℃，5%CO2）培养6 h后，吸取200 μL加入流式试管，以PBS缓冲液洗涤2次后，弃上清加入CD4-FITC，CD8-PE、CD3-PECY5抗体各20 μL，放暗处避光反应20 min后，加入细胞膜固定剂100 μL，充分混匀，再次放入暗处避光固定15 min后以PBS洗涤2次，倾去上清液，再加入破膜剂100PBS洗涤后，再次倾去上清液，加入IFN-γ-APC、IL-4-APC-CY7抗体各20 μL充分混匀，重悬细胞，染色后流式细胞仪上机检测。

1.2.2 Th1/Th2细胞因子检测：将以上所取静脉血3500RPM离心5 min，分离血浆。采用ELISA法测定血浆中IL-2、IFN-γ、IL-6和IL-10的表达水平。以Synergy H4全功能酶标仪（美国BioTek公司生产）检测，抗人IL-4、IFN-γ、IL-6及IL-10等ELISA试剂盒由美国Ebioscience公司生产。

1.3 统计学处理：采用最新版本的SPSS 22.0进行统计学分析，二组比较采用t检验，P＜0.05具有统计学差异。

2 结 果

2.1 二组Th1和Th2细胞频数检测：特异性皮炎患者静脉血的Th1辅助细胞水平和Th1/Th2相对比率明显高于正常人，Th2辅助细胞水平明显低于正常人，Th1/Th2比率失衡（表1）。

2.2 二组血清细胞因子水平的表达比较：特异性皮炎患者血清的白细胞介素-2和γ-干扰素蛋白含量明显高于正常人，白细胞介素-6和白细胞介素-10蛋白含量明显低于正常人（表2）。

3 讨 论

特异性皮炎发病机制是自身免疫功能紊乱，机制可能与免疫功能失调、皮肤屏障破坏、微生物变迁、环境因素及基因易感性有关。近年来，国内外报道AD发病率逐年上升，在欧美发达国家儿童患病率为10%～20%，成年人l%～3%[1]。先天性的免疫不足和后天的外界环境因素可能是导致本病发病的重要原因[2]。辅助T细胞主要功能是分泌具有免疫调节和效应功能的细胞因子，在免疫反应发挥重要作用，主要分为Th1、Th2两种功能性亚群。Thl/Th2细胞的主要功能就是调控免疫反应，Th1细胞主要分泌IFN-γ和白细胞介素-2等细胞因子，Th2细胞主要分泌白细胞介素-6和白细胞介素-4等，主要介导体液免疫[3]。国内外有学者认为Th1/Th2失衡会导致特异性皮炎发病，Th1/Th2细胞此免疫过程主要是通过分泌不同的细胞因子，相互抑制达到动态平衡。在机体正常状态下，Th1/Th2细胞处于动态平衡状态，如果动态平衡被破坏，偏向其中一方，机体便会因为Th1细胞占优势或Th2细胞占优势形成Th1/Th2“漂移”状态从而导致机体发病[4]。马蕾等通过检测外周血中Th细胞发现其高表达可能是特应性皮炎发病中免疫功能紊乱的重要原因[5]。本研究发现特应性皮炎患者体内存Th1/Th2的病理性失衡，这与文献一致。

表1 特异性皮炎患者与对照组外周血Th1和Th2细胞比率表达（%，±s）

表1 特异性皮炎患者与对照组外周血Th1和Th2细胞比率表达（%，±s）

注：a与对照组比较，P＜0.01；b与对照组比较，P＜0.05

分组 n Th1(%) Th2(%) Th1/Th2特异性皮炎组 20 12.38±5.82a 2.46±1.28a 8.64±3.28a对照组 20 7.68±3.72 5.16±3.16 4.26±1.78

表2 特异性皮炎患者与对照组外周血Th1/Th2细胞因子蛋白含量的表达比较（ng/mL，±s）

表2 特异性皮炎患者与对照组外周血Th1/Th2细胞因子蛋白含量的表达比较（ng/mL，±s）

注：a与对照组比较，P＜0.01；b与对照组比较，P＜0.05

分组 n IL-2 IFN-γ IL-6 IL-10特异性皮炎组 20 386.21±114.36a 246.76±75.32a 58.82±42.52a 48.57±24.42a对照组 20 146.72±66.32 112.74±74.26 108.25±58.64 112.54±72.82

Th1/Th2细胞病理性失衡在特异性皮炎的发病的复杂的病理过程扮演者重要角色，检测Th1/Th2细胞的平衡，有助于AD的诊断及观察患者病情变化，通过人工干预AD患者机体Th1/Th2比值让机体恢复正常免疫功能状态，达到治疗疾病的目的。

[1]黄舒燕,黄剑清,蔡蕾,等.异位性皮炎患者的血清总IgE水平和特异性IgE水平[J].福建医药杂志,2015,37(6):97-99.

[2]叶加建,黄欣,许少涵.特应性皮炎患者血清总IgE与MIF检测的临床意义[J].中国实验诊断学,2012,16(5):817-819.

[3]Magombedze G,Reddy PB,Eda S,et al.Cellular and population plasticity of helper CD4(+) T cell responses[J].Front Physiol,2013,16(4):206.

[4]蒋有让,刁庆春,史丙俊,等.特应性皮炎Th1/Th2/Th17平衡的研究[J].重庆医学,2016,45(18):2482-2483.

[5]马蕾.特应性皮炎患者外周血调节性T细胞与Th17细胞平衡状态分析[J].中华皮肤科杂志,2012,45(7):481-484.