37℃恒温状态下多型疫苗热敏标签失效时间比较性研究△

周春宁，温长康

（江苏省疾病预防控制中心总务科，江苏 南京 210009）

疫苗热敏标签（简称VVM）采用新型温度监测技术，使疫苗接种管理人员无需借助其他工具即可判断疫苗有效性［1］，在高温暴露等突发事件发生后直接将失效疫苗从有效疫苗中分离出去，减少有效疫苗报废情形，节约接种成本［2，3］。目前，某国产公司可根据不同类型疫苗耐热稳定性针对性地研制对应VVM，提高VVM冷链监测的精准性。本文旨在研究37℃恒温状态下OPV、灭活甲肝、减毒乙脑等第一类疫苗与对应VVM失效变化情况，评价上述VVM的可靠性。

1 材料与方法

1.1 样品

VVM由苏州华实热敏科技有限公司生产提供，型号分别为QM5D37A（OPV疫苗）、QM9D37CA（灭活甲肝疫苗）、QM9D37CA（减毒乙脑疫苗），样本份数80份，采用随机数字表法从不同批次中抽样得到。VVM对应疫苗由国产疫苗企业生产提供，样本份数80份，用随机数字表法从不同批次中抽样得到。

VVM主要包含参照圆圈和活性区域。参照圆圈颜色固定不变，为活性区域提供参照；活性区域起始为白色，颜色随高温暴露不可逆地逐渐加深。当活性区域颜色加深至参照圆圈颜色时，VVM提示疫苗失效。

1.2 热敏标签颜色变化测量方法

采用随机数字表法，将VVM置于水浴恒温箱中，定期测量活性区域颜色。该颜色采用CIELAB色彩空间描述［4］，空间坐标包含L*（代表亮度，L*=0生成黑色而L*=100指示白色），a*（代表色度，a*负值指示绿色而正值指示品红）和b*（代表色度，b*负值指示蓝色而正值指示黄色），把活性区域颜色与参照圆圈颜色分别处理为L*a*b*三维空间的两个点，并计算在它们之间的欧几里得距离ΔE。当ΔE=0时，活性区域颜色与参照圆圈颜色相同，标签提示失效。

1.3 疫苗有效性测量方法

1.3.1 OPV滴度变化测量方法。以人喉癌细胞（Hep-2细胞）作为病毒生长的细胞基质，将OPV作10倍系列稀释，并接种人喉癌细胞，置二氧化碳培养箱35～36℃培养7天，观察和记录细胞病变，以发生50%细胞病变的最高稀释度为滴定终点，按Kar⁃ber法计算结果。进行分型病毒滴定时脊髓灰质炎抗血清完全中和其中一型，用微量法滴定第二型。

1.3.2 灭活甲肝疫苗有效性测量方法。采用体外相对效力检查法，即以酶联免疫法测试供试品甲肝病毒抗原含量，并以参比疫苗为标准，计算样本疫苗的相对效力，应不低于0.75。

1.3.3 减毒乙脑疫苗滴度变化测量方法。取样本作10倍系列稀释，至少取3个稀释度的病毒液，分别接种BHK21细胞，用蚀斑法进行滴定，疫苗病毒滴度应不低于应5.7 LgPFU/ml，病毒滴度下降应不高于1.0 Lg PFU/ml。

1.4 VVM可靠性评价

根据实验数据绘制VVM颜色和对应疫苗有效性变化拟合曲线图与统计表，横坐标为测量时间，纵坐标为失效VVM与疫苗例数。根据拟合曲线图计算VVM和对应疫苗失效时间范围，如VVM最晚失效时间早于疫苗最早失效时间，标签具有可靠性。两者时间越接近，VVM可靠性越高。

2 结果

37℃下疫苗滴度变化情况及对应样本标签失效情况：（1）OPV失效时间范围为4～5.5 d，对应标签失效时间范围为3.1～4 d（详见表1）；（2）灭活甲肝疫苗失效的时间范围为15～29 d，对应标签失效时间范围为10～12 d（详见表2）；（3）减毒乙脑疫苗失效的时间范围为14～26 d，对应标签失效时间范围为10～12 d（详见表3）。综上，所有标签最晚失效时间均早于疫苗最早失效时间，均具有可靠性。

表1 37℃下OPV样本疫苗与QM5D37A样本标签失效情况表

表2 37℃下灭活甲肝样本疫苗与对应样本标签失效情况表

表3 37℃下减毒乙脑样本疫苗与对应样本标签失效表

3 讨 论

疫苗失效时，标签是否已失效是评价VVM可靠性的方法。疫苗失效而标签未失效，VVM不可靠。VVM与对应疫苗失效速率不可能完全相同，VVM失效时间均须短于对应疫苗失效时间，才能确保标签可靠。由于VVM之间、疫苗之间失效速率均存在一定误差，两者失效时间有一定范围。因此，只有VVM最小失效速率（标签最晚失效时间）大于疫苗最大失效速率（疫苗最早失效时间），VVM才完全具备可靠性，两者时间越接近，可靠性越高。

所有疫苗的效价都会随着时间衰减，温度升高会加速效价的衰减。不同的疫苗品种对于温度的敏感性不同，不同厂家生产的产品也有着不同的热稳定性。OPV疫苗、减毒乙脑等减毒类疫苗热稳定性与选育的菌毒种类型、原液与半成品病毒滴度、储存温度、制造水平等因素有关，灭活甲肝等灭活类疫苗热稳定性与抗原类型、纯化工艺、实际抗原含量、储存温度等因素有关［5，6］。根据疫苗热稳定实验得知，37℃下OPV、灭活甲肝、减毒乙脑疫苗最早失效时间分别为4、15、14天，热稳定性远高于国家药典标准。根据VVM热稳定实验得知，37℃对应样本标签最晚失效时间分别为4、12、12天，标签均于疫苗失效前到达终点，具有可靠性；OPV热敏标签与疫苗失效时间最接近，可靠性最高；减毒乙脑热敏标签与疫苗失效时间相差2天，可靠性较高；灭活甲肝热敏标签与疫苗失效时间相差3天，可靠性最低。

目前，国家通过条例政策鼓励疫苗产品使用热敏标签，VVM的普及是当前疫苗冷链管理工作的一大趋势，VVM的正确应用将有助于提高大规模疫苗接种的安全性［7-9］。

［1］方国良，马 波，沈 峰，等.VVM标签在A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗上的应用［J］.中国生物制品学杂志，2015，28（9）：897-901.

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