白藜芦醇抑制小鼠皮肤移植排斥反应研究

史小四，高 强，骞秀芳

（武警北京总队第二医院药剂科/医务处，北京 100027）

白藜芦醇（resveratrol）是一种提取自植物的多酚化合物，具有抗炎、抗氧化、抗血小板聚集、抗肿瘤和免疫调节等多种生物活性［1-2］。马丽等［3］报道白藜芦醇抗小鼠胰岛样细胞团移植排斥作用，是一种潜在的免疫抑制药物。本研究探讨白藜芦醇对小鼠异体皮肤移植排斥反应的影响，以期为白藜芦醇的深入开发及其在器官移植免疫抑制治疗的应用提供理论依据。

1 材料与方法

实验动物。12周龄BALB/c小鼠40只及C57BL/6小鼠50只，雄性，体质量18～23g，由河北医科大学实验动物中心提供。

药品与试剂。白藜芦醇（纯度大于等于98%）、二甲基亚砜（DMSO）均购自美国Sigma-Aldrich公司；白藜芦醇以DMSO溶解，用生理盐水稀释成所需浓度，现用现配。环孢素A（ciclosporin A），由瑞士诺华制药有限公司提供，使用前以生理盐水配成所需浓度。

建立异体皮肤移植模型。采用背-背皮肤移植法［4］。供体为BALB/c小鼠，受体为C57BL/6小鼠。取C57BL/6小鼠，1%戊巴比妥钠按50mg/kg腹腔注射麻醉后，于背部移植区脱毛、消毒，剪去移植区皮肤，形成植皮创基备用。将BALB/c小鼠同样条件麻醉、脱毛、消毒后，于其背部切取全层皮肤1块，刮除其皮下脂肪和肉膜层，修剪成与C57BL/6小鼠创面大小相等的皮片，移植于C57BL/6小鼠植皮创基上，四周间断缝合固定，轻压皮片，使其与创面贴紧，用创可贴包扎，分笼饲养。

分组与给药。术后受体小鼠随机分为5组各10只，模型组用等体积生理盐水，白藜芦醇组用50mg/kg［5］，环孢素A组10mg/kg［6］，白藜芦醇加亚剂量环孢素A组用白藜芦醇50mg/kg加环孢素A5mg/kg［7］。另10只C57BL/6小鼠，移去移植区皮肤后再植入原位，作为假手术组，用等体积生理盐水。各组均为手术当天开始腹腔注射给药，每天1次，连续10天。

移植皮片存活观察。术后每日定时观察小鼠一般状况和移植皮片的存活情况。若移植皮片质地柔软、颜色红润、边缘融合，有部分毛发生长则判为存活或耐受。若移植皮片毛发脱落和表皮坏死为排斥开始。若皮片发黑变硬，形成干痂脱落或溃烂大于1/2，则认为完全被排斥。记录各只小鼠移植皮片出现完全排斥反应的天数。

2 结 果

白藜芦醇对移植皮片存活时间的影响。试验期间各组小鼠均未出现感染死亡。假手术组移植皮片未出现排斥反应，不参与统计分析。白藜芦醇组、环孢素A组、白藜芦醇加环孢素A联合组小鼠移植皮片存活时间分别延长为（12.87±3.63）、（14.59±2.30）、（16.94±2.16）天，与模型组（9.75±1.28）天比较差异有统计学意义（P＜0.01）。白藜芦醇加环孢素A联合组小鼠移植皮片存活时间比白藜芦醇组长（P＜0.01），且比环孢素A组长（P＜0.05）。

3 讨 论

异体移植的皮肤因其所涉及抗原的典型性，为移植组织器官中最难以存活。采用动物皮肤移植模型来研究免疫排斥反应是一种简单而准确的免疫学方法［8］。环孢素A作为临床器官移植常用的免疫抑制剂，抗排斥反应作用强大，但有严重的毒副作用如肝肾毒性、高血压、骨质疏松、代谢紊乱等。

白藜芦醇是天然的抗氧化剂和自由基清除剂，其安全性已得到临床研究证实。白藜芦醇具有多种对机体有益的生物学作用，其中最引人注目的是抗炎、抗肿瘤和免疫调节活性，白藜芦醇对动物胰岛或肝脏的移植排斥反应具有抑制作用［3-9］，可能是一种潜在的免疫抑制药物。白藜芦醇可使移植皮片的存活率明显提高，平均存活时间延长，急性排斥反应显著减轻。白藜芦醇可增强环孢素A的抗排斥反应效果，减少免疫抑制剂的剂量以提高用药安全性。Chander等［10］研究发现，白藜芦醇对长期口服环孢素A造成的肾脏毒性有防治作用，提示白藜芦醇与环孢素A联合应用可能有减毒效果。Wu等［9］研究表明白藜芦醇和环孢素A联用比环孢素A单用免疫抑制效果要强，联用可以下调外周血T淋巴细胞的NF-κB活性和血清中的IL-2和INF-水平。

［1］SVAJGER U，JERAS M． Anti-inflammatory effects of resveratrol and its potential use in therapy of immune-mediated diseases［J］．Int Rev Immunol，2012，31（3）：202-222．

［2］NOH K T，CHAE S H，Chun S H ，et al．Resveratrol suppresses tumor progression via the regulation of indoleamine 2，3-dioxygenase［J］．Biochem Biophys Res Commun，2013，431（2）：348-353．

［3］马丽，张薇华，周光纪，等．白藜芦醇对小鼠胰岛样细胞团的抗移植排斥作用及其IL-2、IL-10表达的影响［J］．解放军医学杂志，2012，37（6）：606-609．［4］成功，陈明，孙则禹，等．建立小鼠皮肤移植排斥模型稳定获得记忆T细胞［J］．中国比较医学杂志，2008，18（4）：32-35．

［5］LAI X，PEI Q，SONG X ，et al．The enhancement of immune function and activation of NF-κB by resveratrol-treatment in immunosuppressive mice［J］．Int Immunopharmacol，2016，33：42-47．

［6］于艳秋，田伟，张海鹏，等．高压氧与环孢素A对皮肤移植小鼠脾活性氧及一氧化氮含量的影响［J］．中国病理生理杂志，2000，16（12）：1286-1288．

［7］蔡振刚，于志军，温爽，等．青藤碱对大鼠肝移植急性排斥反应的影响［J］．辽宁中医药大学学报，2010，12（4）：112-114．

［8］DUYVERMAN AM，KOHNO M，DUDA DG ，et al．A transient parabiosis skin transplantation model in mice［J］．Nat Protoc，2012，7（4）：763-770．

［9］WU SL，PAN CE，YU L， et al．Immunosuppression by combined use of cyclosporine and resveratrol in a rat liver transplantation model［J］．Transplant Proc，2005，37（5）：2354-2359．

［10］CHANDER V，TIRKEY N，CHOPRA K．Resveratrol，a polyphenolic phytoalexin protects against cyclosporine-induced nephrotoxicity through nitric oxide dependent mechanism［J］．Toxicology，2005，210（1）：55-64．