免疫荧光法在微生物快速检验中的应用研究

郑州市妇幼保健院（450000）翟晶晶

免疫荧光法主要是利用抗原与抗体的生物反应与形态学理论相结合的一种检验技术，其具有血清学检验的特异性、荧光色素检验的敏感性以及显微镜检的优点，在临床诊断中具有较好的应用价值，在致病微生物快速检测中具有较高的特异性和敏感性[1]。本文主要针对免疫荧光法在微生物快速检验中的应用价值展开分析，报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2016年1月～12月100例上呼吸道感染患儿作为观察对象，其中有男孩51例，女孩49例，年龄为2～11岁，平均为（6.5±1.6）岁，其中咽喉感染64例、鼻部感染36例。所有患儿均对本次研究知情并自愿签署同意书。

1.2 试剂与仪器 本次研究使用的仪器为奥林巴斯 荧光显微镜BX51，使用的病毒荧光检验测试剂盒均由当地卫生部门提供，包括荧光标志抗体试剂盒、荧光标志单克隆抗体试剂盒，包括合胞病毒、腺病毒、流感病毒A及流感病毒B试剂盒。此外还有洗涤液、封闭液以及玻璃片。

1.3 方法 所有患儿均采集鼻咽分泌物进行免疫荧光法检验，观察患儿感染情况。检测方法：将采集的分泌物放置于无菌生理盐水中，以500r/min的速率离心8min，弃上清液后使用冲洗液洗涤并混匀。重复离心直至上清液不粘稠。最后将沉淀溶解于缓冲液中，使其成为细胞悬液，之后将病原体放置于玻片中的观察孔中，风干后使用冷丙酮固定10min。染色方法：在样孔细胞上滴入荧光抗体20uL，并在保湿盒中培育30min。并将荧光标志单克隆抗体作为对照。将洗涤液冲洗玻片细胞数次之后再使用蒸馏水洗涤。待蒸馏水挥发之后将1滴封闭液滴入玻片样孔中，再用显微镜进行观察。

阳性判断标准：被荧光标记的病毒特异性克隆抗体在与抗原结合之后，会形成复合物并发出绿色荧光。显微镜下观察到绿色荧光为阳性，无荧光为阴性。在400倍视距观察情况下，有≥2个荧光细胞即可判断为阳性[2]。

1.4 统计学分析 采用SPSS16.0统计学软件进行统计学分析，计量资料用(±s)表示，组间差异、组内差异采用t值检验，计数资料比较采用X2值检验 ，P＜0.05时为差异有统计学意义。

2 结果

100例患儿中病毒感染阳性有88例，其中感染合胞病毒42例、腺病毒23例、流感病毒A13例、流感病毒B10例，感染率分别为47.73%、26.14%、14.77%、11.36%。

3 讨论

免疫荧光法主要是利用患儿的血清和免疫荧光抗体进行检验，对于抗原具有较高的敏感性[3][4]。近些年来，随着临床医学在人工合成免疫原研究的进一步发展，发现沙门氏菌的特异性抗原的决定簇为双糖结构，因此可以采用人工合成高纯度双糖再与蛋白质结合形成免疫原的方法，能够制造出群特异性高的抗体，并且近些年来不断发展的克隆技术也为其的应用提供了良好的基础[5][6]。

本次研究利用免疫荧光法进行检验，观察上呼吸道感染患儿的样本与相对应的试剂盒进行反应，观察其是否能够判断患儿的感染类型，并且在观察中发现，100例患儿中病毒感染阳性有88例，其中感染合胞病毒42例、腺病毒23例、流感病毒A13例、流感病毒B10例，感染率分别为47.73%、26.14%、14.77%、11.36%，这说明免疫荧光法能够有效检查出感染病毒的类型，具有较高的安全性和可靠性。免疫荧光法能够在短时间内依靠显微镜和相应的试剂盒检测出患儿的感染类型，具有快捷、高效的优势，可以在基层医院中应用，从而为临床治疗提供科学依据。

综上所述，免疫荧光法能够快速检测患儿感染类型，在上呼吸道感染患儿中具有较好的应用效果，为临床治疗提供相应的依据。