湿润生肌膏对肛瘘术后创面肉芽组织中碱性成纤维细胞生长因子mRNA表达的影响

王世霞，陈永乐，王亚儒，吕高波

(陕西省宝鸡市中心医院肛肠外科 721008)

肛瘘是肛肠科的常见多发病之一，中医学中又称之为“肛漏”，临床对该病的治疗主要以手术为主，但因发病的病变部位多涉及括约肌，且手术的切口处因存在较多种类的菌群以及粪便的污染，故常出现切口的感染引发患者术后肛门部位的疼痛、水肿以及组织液的渗出[1]。中医学认为肛瘘患者进行手术后，切口处的肌肤筋脉受到损伤，机体气虚血亏、血行瘀滞，病变部位在魄门，湿热之邪侵扰，影响肛瘘术后患者创面的愈合[2]。有研究认为，机体在发生创伤后会通过统一的调节作用[3]，使多种生长因子包括成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板衍生生长因子及转化生长因子等发生炎性反应，刺激机体中的修复细胞激活、增殖、分化，有效地完成创面部位损伤组织的修复[4]。本研究使用湿润生肌膏促进肛瘘手术患者术后创面的愈合，并对术后创面肉芽组织中碱性成纤维细胞生长因子mRNA表达情况进行检测，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2016年1月至2016年10月于本院接受手术治疗的低位单纯性肛瘘患者95例作为研究对象。纳入标准：(1)患者年龄20～60岁；(2)术后患者的创口面积为2.5～3.0 cm2；(3)创口距离肛缘处超过3 cm。排除标准：(1)肛瘘伴随结核感染、克罗恩病以及癌性肛瘘的患者；(2)伴有精神疾病或依从性不满足研究的患者。采用随机数字表法将全部研究对象分为观察组、对照组与凡士林组。观察组患者32例，其中男23例，女9例；平均年龄(46.29±8.73)岁；平均创口面积(2.77±0.19)cm2。对照组患者32例，其中男25例，女7例；平均年龄(43.41±8.96)岁；平均创口面积(2.71±0.16)cm2；凡士林组患者31例，其中男22例，女9例；平均年龄(45.93±9.11)岁；平均创口面积(2.80±0.15)cm2。3组患者的一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。全部患者均签署知情同意书。

1.2方法

1.2.1患者的治疗 观察组患者使用由本院自制的湿润生肌油纱，对照组患者使用由龙珠软膏(马应龙药业集团有限公司，国药准字Z10950017)制成的纱条，凡士林组患者使用由凡士林(南昌白云药业有限公司，赣食药准字F20050006)制成的纱条，在术后进行定期换药。在术后24 h之内进行排便的患者应立即给予换药措施，术后24 h之后进行排便的患者应在术后24 h进行换药。在换药的过程中应注意动作轻柔，纱条的进入方向由无创区起始，自创面部终结，避免纱条对损伤创面刺激后引发患者的疼痛；在选择纱条时长短应适中，填入创道后略微留有空隙，防止切口与纱条粘连造成假愈合的情况。3组患者每日换药1次，术后应用抗菌药物静脉滴注治疗3～5 d。

1.2.2基因的检测 在术后不同时期分别提取3组患者的创面组织总RNA，使用紫外分光分析及凝胶电泳对所提取的总RNA的质量与水平进行检测，按照Poly A Tract(r) mRNA Isolation System系统对提取出的mRNA分离纯化。使用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法观察碱性成纤维细胞生长因子mRNA的表达变化，根据Promega公司的试剂盒说明书进行操作。根据引物设计原则设计引物与内参照[5]，将每份样品取出等量的mRNA置于模板中进行PCR扩增，取10 L的PCR产物在1.5%琼脂糖中电泳后使用紫外光扫描，最后应用美国BioRad公司的Gel Doc 2000型凝胶成像分析仪的图像分析系统分析目的基因PCR产物的灰密度测定。

1.3评价指标 创面愈合面积的测量方法是将透亮的薄膜轻覆盖于患者的创面上，使用特制的极细标记笔在薄膜上将创面的边界仔细描画下来，描画成功后将薄膜平铺在心电图描记纸上，计算创口的面积，面积的单位为cm2。创面愈合率根据创面愈合面积改变的情况进行计算，某天的创面愈合率=(初始创面面积-当前创面面积)/初始创面面积×100%。术后创面愈合情况根据我国中医药行业标准颁发的《中医肛肠科病证诊断疗效标准》进行评价，将创面处完全愈合，有表皮覆盖，瘢痕组织结实，创面愈合率为100%的患者评定为痊愈；将创面处肉芽愈合率超过75%，局部组织生长良好的患者评定为显效；将创面处局部生长良好，愈合率为75%～25%的患者评定为有效；将创面处肉芽颜色黯淡，生长缓慢，创口愈合率低于25%的患者评定为无效[6]。

2 结 果

2.13组患者不同时期创面愈合率比较 在术后3、7、14、21 d分别测量患者的创面面积并计算愈合率，比较结果见表1。在术后第7天起，观察组患者的创面愈合率高于对照组及凡士林组，差异有统计学意义(P<0.05)；随着术后药物使用时间的增长，观察组患者创口愈合程度越佳。

表1 3组患者不同时期创面愈合率比较

注：与对照组比较，*P<0.05；与凡士林组比较，#P<0.05

2.2术后创面愈合治疗效果比较 在术后第28天对3组患者的创面愈合疗效进行比较，结果显示，观察组患者创面愈合效果与对照组比较，差异有统计学意义(Z=-2.447，P=0.014)；与凡士林组比较，差异也有统计学意义(Z=-2.303，P=0.021)。见表2。

表2 3组患者术后创面愈合情况[n(%)]

2.33组患者碱性成纤维细胞生长因子mRNA的表达情况 3组患者的肉芽组织在术后7 d的阳性表达值最高，大量的血管内皮细胞、成纤维细胞与单核细胞的细胞质中出现较强烈的阳性表达，细胞数量较其他时期明显增多；而随着治疗的进展，碱性成纤维细胞生长因子mRNA的阳性表达强度逐渐减弱，多以纤维细胞的细胞质呈阳性表达为主。3组患者镜下图像比较，观察组患者阳性表达区域面积较大，高于其他两组患者。

3 讨 论

创面的修复过程是连续且复杂的，其生理过程主要包括结缔组织细胞增生、蛋白沉淀与重排、上皮细胞迁移、分化增殖后创面处发生再上皮化，使创口组织恢复完整性与连续性[7]。肛瘘术后的创面形成主要是因为手术过程中的切口处缺损组织较严重，容易产生感染，导致切口处的局部组织发生肿胀、渗出或者坏死等情况[8]。根据中医外科学对创口的认识，认为肛瘘术后的创面属于“金创”，术后患者易因血瘀气虚、湿热外感等原因，造成患处引流不利、湿热偏盛，最终使脓腐留滞于创面组织处不易清除[9]，引发患者的水肿、疼痛与渗出等症状。有学者认为，碱性成纤维细胞生长因子mRNA在创面的愈合中有极为关键的作用[10]，作为多效的血管生长因子，在创面愈合时可以通过刺激血管内皮细胞的迁移及增殖，加速毛细血管的生成；亦可以刺激机体分泌纤溶酶原激活物与胶原酶，进行细胞外基质的局部降解，加快毛细血管向创面部位延伸的进程[11]。但是若创面部位并未得到妥善的清洁或处理，造成感染发生甚至使局部组织发生坏死，生长因子的促修复作用则会受到极大的限制。有临床研究表明，利用中医药制剂可以对创面的愈合起到促进作用[12]，因此如何在分子生物学角度研究中医药制剂的药理效果在临床受到重视。本研究使用本院自制湿润生肌膏治疗肛瘘术后创面的愈合，方药中重用黄芪为君，取其大补脾胃的功效补气行血，祛瘀通络。地榆、当归与三七共为臣药，使和营止血，通脉行瘀，行瘀血而敛新血。丹参、乳香、没药可助当归尾活血去瘀；紫草、白芷、白芨、血竭、地龙、罂粟壳则有祛腐敛疮生肌之功；五倍子、儿茶、赤石脂、枯矾有收涩生肌之效，以上诸药均为佐药。整首方剂配伍严密，功能益气活血、去腐生肌、收涩敛疮，促进肛瘘术后创面的症状改善及愈合。

本研究结果显示，在术后第7天起，观察组患者的创面愈合率便高于对照组及凡士林组(P<0.05)；而随着术后药物使用时间的增长，观察组患者创口愈合程度越佳。观察组痊愈29例(90.63%)，显效3例(9.37%)，治疗效果明显优于对照组及凡士林组患者(P<0.05)。对患者术后不同时期的碱性成纤维细胞生长因子mRNA表达情况进行观察比较，发现在术后7 d时，阳性表达最强烈，而观察组患者镜下血管内皮细胞、成纤维细胞与单核细胞等大量细胞的细胞质中出现碱性成纤维细胞生长因子mRNA阳性表达区域多于其他两组。根据本研究的结果提示，在术后应用湿润生肌膏治疗的第7天碱性成纤维细胞生长因子mRNA表达达到峰值，联系其他结果可知，在术后第7天创口愈合程度与术后第3天比较有较大的进步，说明在创口愈合的过程中，碱性成纤维细胞生长因子mRNA的阳性表达可以促进修复细胞的迁移与增殖，加速创面的修复能力[13-15]，而随治疗时间的推移，碱性成纤维细胞生长因子mRNA阳性表达情况逐渐下降，说明随着术后创面的逐渐的恢复，对创伤刺激的反应降低，也可能与组织生长的自限性有一定的关联[16-18]。刘小飞[13]认为在治疗皮肤软组织创面时，碱性成纤维细胞生长因子mRNA的阳性表达可以有效降低炎症的发生，并促进创面的愈合，与本研究对碱性成纤维细胞生长因子mRNA表达对创面愈合的影响认识相符。

综上所述，在肛瘘术后应用湿润生肌膏治疗对创面肉芽组织中碱性成纤维细胞生长因子mRNA的表达有影响，并可以促进创面的愈合。

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