黄体酮对大鼠外伤性脑损伤模型中18kDa转运蛋白表达的影响

包卿+卞晓星+龚幸春+王存祖

[摘要] 目的 观察和探讨黄体酮干预对大鼠外伤性脑损伤（TBI）后线粒体膜18kDa转运蛋白（TSPO）的表达变化。 方法 2017年1—7月该院选取雄性清洁型的SD大鼠共72只用作实验动物，72只SD雄性大鼠随机分为假手术组、脑损伤对照组，黄体酮治疗组。采用Feeneys自由落体打击法制作脑外伤模型，治疗组伤后给予腹腔注射黄体酮16 mg/kg，对照组给予等量生理盐水。免疫组化法检测损伤脑组织中TSPO、OX-42表达。 结果 黄体酮治疗组伤后12 h、伤后24 h、伤后3 d、伤后7 d的TSPO分别是（32.88±2.95）、（33.50±3.34）、（21.88±3.04）、（19.75±2.25），黄体酮治疗组伤后12 h、伤后24 h、伤后3 d、伤后7 d的OX-42分别是（42.13±3.84）、（38.25±4.13）、（28.25±2.49）、（26.25±1.04），黄体酮治疗组中除7 d组外，TSPO、OX-42与外伤对照组明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）。 结论TBI后早期应用外源性黄体酮，可抑制TSPO的表达及抑制小胶质细胞的活化增殖。

[关键词] 外伤性脑损伤；黄体酮；18kDa转运蛋白；小胶质细胞

[中图分类号] R651 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2017）12（c）-0044-03

[Abstract] Objective This paper tries to explore the effect on the expression of translocator protein after traumatic brain injury by using progesterone. Methods From January to July 2017， a total of 72 male clean SD rats were selected as experimental animals and were randomly divided into two groups： sham group， trauma control group and progesterone treatment group. Rat models with contusion and laceration of brain were established by Feeneys impact with free falling. Treatment group was given progesterone 16 mg/kg after injury， the control group were injected with equivalent saline. Expression of TSPO， OX-42 in brain injury region were detected by immunosihtochemistry. Results Progestin treatment group of 12 h， 24 h after injury， 3 d， 7 d after injury of the TSPO were （32.88±2.95）， （33.50±3.34）， （21.88±3.04）， （19.75±2.25）， progestin treatment group 12 h， 24 h after injury， 3 d， 7 d after injury of OX-42 （42.13±3.84）， （38.25±4.13）， （28.25±2.49）， （26.25±1.04）. Except 7 d group of progesterone treatment group， OX-42， TSPO decreased which compared with trauma control group， and there was statistical significance（P<0.05）. Conclusion By using exogenous progesterone early after TBI may inhibite the expression of TSPO， and then inhibite the activation proliferation of microglia.

[Key words] Traumatic brain injury； Progesterone； 18 kDa translocator protein； Microglia cell

近几年来，较多临床资料表示，线粒体膜相关转运蛋白对神经损伤、神经胶质细胞的活性会产生一定的反应，也是其敏感指标之一[1]。另外，黄体酮能够有效促使外伤性脑损伤之后出现的相关炎症反应降低，进而具备一定的脑保护效果，不过，其是否和線粒体膜相关转运蛋白具备一定的相关关系尚不明确。笔者2017年1—7月该院选取雄性清洁型的SD大鼠共72只对大鼠TBI模型进行构建，对行黄体酮治疗之后的伤侧相关脑组织内TSPO水平和OX-42水平情况进行测定，分析黄体酮用于治疗TBI的分子学相关机制。

1 材料与方法

1.1 大鼠TBI模型制作

该文实验资料是雄性清洁型的SD大鼠共72只，其体重是（220±30）g，随机将其分成假手术组、脑损伤对照组和黄体酮治疗组，并将对照组和治疗组再次分为12 h、24 h、3 d、7 d，区分成9组，一组8只大鼠。Feeneys自由落体相关硬膜外撞击方法将大鼠TBI模型构建。予以大鼠麻醉处理之后使其固定在立体的定向仪上面，采取40 g砝码在25 cm的高度进行落下对其产生重度的损伤，保证打击力是1 000 g/cm。对于假手术组大鼠只颅骨开窗，并不引发其出现脑损伤情况。另外，治疗组在1 h给予黄体酮（16 mg/kg）进行治疗，主要是采取腹腔注射的方法进行治疗，之后还需要在6 h、24 h、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d进行皮下注射，而对照组则采取等量生理盐水进行注射。endprint

1.2 标本采集及检测

按时间点取脑损伤区域的脑组织。经4%多聚甲醛固定后石蜡包埋，切取4 μm厚的脑组织切片，严格按照SABC免疫组化试剂盒步骤操作显色后封片。

1.3 统计方法

采用SPSS 16.0统计学软件计算大鼠数据，TSPO水平和OX-42表达水平等用均数±标准差（x±s）表示，予以t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 TSPO水平改变

TSPO于3组大鼠的脑组织内都存在表达现象，不同时间点的假手术组相对比，差异有统计学意义（P<0.01）；黄体酮治疗组的不同时间中除了伤后7d之外，不同时间点的TSPO水平比较于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2 OX-42表达变化

假手术组0X-42表达较少，黄体酮治疗组、外伤对照组大鼠的0X-42水平比较于假手术组大鼠，差异有统计学意义（P<0.01）；黄体酮治疗组的不同時间中除了伤后7 d之外，不同时间点的0X-42水平比较于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

3 讨论

黄体酮具备一定的脑保护作用，而且其在临床上或者是对动物实验均具备脑保护作用，但是其确切机理还不明确。近几年来，TSPO由于参与到中枢神经系统相关病变中逐渐受到重视，一般情况下， TBI之后，其TSPO水平会出现明显提升，于小胶质细胞中出现明显提升，和其活化以及增殖的状态具备密切相关关系[1]。黄体酮可以抑制TBI后小胶质细胞的活性，减轻炎症[2]。将脑内相关类固醇含量提升，对于TSPO含量具备降低作用，说明早期的TSPO产生提升，对于小胶质细胞的活化具备促进效果，将甾体激素增多，对增殖进行适宜调节，于后期的时候，因为甾体类激素含量存在明显提升，通过反馈作用导致TSPO的产生减少[3-6]，而且，类固醇还具备抗炎效果，导致炎症得到有效缓解[7-9]。

笔者实验结果呈现，黄体酮治疗组伤后12 h、伤后24 h、伤后3 d、伤后7 d的TSPO分别是（32.88±2.95）、（33.50±3.34）、（21.88±3.04）、（19.75±2.25），黄体酮治疗组伤后12 h、伤后24 h、伤后3 d、伤后7 d的OX-42分别是（42.13±3.84）、（38.25±4.13）、（28.25±2.49）、（26.25±1.04），黄体酮治疗组中除7d组外，TSPO、OX-42与外伤对照组明显降低，TBI之后的小胶质细胞出现活化以及增殖现象，其OX-42水平以及TSPO水平均出现明显提升，和小胶质细胞的活化以及增殖也具有一定的关系；在进行黄体酮相关治疗后，早期的OX-42水平和TSPO水平都得到显著降低。包卿等[10]实验中，正常组大鼠和假手术组大鼠的TSPO水平相对比较少，重型组大鼠0 h、12 h、24 h、3 d、7 d的TSPO水平是（0.94±0.19）、（4.08±0.47）、（3.77±0.27）、（2.71±0.23）、（1.40±0.40），轻型组大鼠0 h、12 h、24 h、3 d、7 d的TSPO水平是（0.97±0.24）、（3.06±0.18）、（3.15±0.23）、（2.35±0.21）、（1.37±0.23），和正常组相对比，轻型TBI组大鼠和重型TBI组大鼠损伤之后的TSPO水平出现显著提升，具有显著差异，重型组大鼠TSPO水平和轻型组大鼠TSPO水平相对比，具有显著差异。

综上所述，笔者将黄体酮对于TSPO产生的反馈抑制作用进行证实，外源性采取TSPO所介导产生的黄体酮用于TBI的治疗中，相关机理有可能是对TSPO产生减少，对活化的小胶质细胞进行明显减少，对于炎症具有缓解效果，对于脑保护作用具备重要影响作用。不过，对于黄体酮具体的作用通路和TSPO相关作用情况尚不明确，需要予以进一步实验探究。

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（收稿日期：2017-09-21）endprint