祛瘀化浊方对非酒精性脂肪肝模型大鼠脂代谢及肝功能的影响

黄鸿娜，黄晶晶，毛德文，王振常，潘 哲

(广西中医药大学第一附属医院，广西 南宁 530023)

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是指除外乙醇和其他明确的损肝因素所致的肝细胞内脂肪过度沉积为主要特征的临床病理综合征，目前研究热点是胰岛素抵抗和遗传易感性密切相关的获得性代谢应激性肝损伤，包括单纯性脂肪肝(SFL)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)及其相关病因导致的肝硬化[1-3]。绝大部分NAFLD属于可逆性疾病，早期诊断并给予饮食及运动治疗，一般预后良好。目前现代医学对 NAFLD缺乏特效的治疗药物，如何阻断NAFLD进展、改善患者预后已成为研究的热点。本研究观察了祛瘀化浊方对NAFDL大鼠脂代谢及肝功能的影响，旨在为其临床应用提供参考依据。

1 实验资料

1.1 实验动物 健康成年清洁级雄性SD大鼠80只，体质量150～180 g，购于广西医科大学动物实验中心，合格证号：SCXK(桂)2014-0009。

1.2 药物与试剂 高脂饲料主要配方由我院实验中心提供(胆固醇2%+胆酸钠0.5%+丙硫氧嘧啶0.2%+蔗糖5%+猪油10%+基础饲料82.3%)。猪油为市售；多烯磷脂酰胆碱胶囊为北京安万特制药有限公司生产(国药准字H20100418，232.5 mg×24粒)；祛瘀化浊方组成：泽泻15 g、海藻15 g、决明子10 g、浙贝母10 g、丹参15 g、山楂15 g、水飞蓟15 g、柴胡6 g，10 g/袋，均由广西中医药大学第一附属医院中药房提供本方颗粒。D-右旋糖酐,上海酶联实业有限公司，批号：140646-201002。鼠用胰岛素ELISA试剂盒,博灿生物科技(上海)有限公司。

1.3 主要仪器 PUZS-300型全自动生化分析仪，南京基蛋生物科技有限公司；HWS-24型电热恒温水浴锅，上海齐欣科学仪器有限公司；1455型拜安捷2血糖仪；血糖检测试纸( 葡萄糖氧化酶法)，拜耳医药保健有限公司，产品批号：1A6591AA；GL-20G-Ⅱ型高速冷冻离心机，上海安亭科学仪器厂生产。

1.4 造模、分组及干预 从80只大鼠中随机取20只作为正常组，给予普通饮食喂养84 d；其余大鼠均参照文献[4]方法，给予高脂饲料喂养84 d。将造模成功NAFLD大鼠随机分为模型组、多烯磷脂酰组、祛瘀化浊汤组，每组20只。多烯磷脂酰组给予多烯磷脂酰胶囊水溶液(3粒/次)灌胃56 d，祛瘀化浊汤组给予祛瘀化浊汤(剂量根据《人和动物间按体表面积折算的等效剂量比值表》计算，150～180 g大鼠用量为标准体质量人的0.018倍，即10 g×0.018=0.18 g，则每只大鼠每天中药用量为0.18 g)灌胃56 d，模型组和正常组给予等量生理盐水灌胃56 d，均3次/d。所有大鼠均提供自来水，自由饮用，并于每天傍晚给予相应饲料(1次/d)供其食用。

1.5 血清生化指标检测 灌胃结束后所有大鼠均禁食不禁水12 h，于第2天称质量后经戊巴比妥钠40 mg/kg 腹腔内麻醉，腹主动脉取血，于3 000 r/min离心15 min分离血清，测定空腹血糖、空腹胰岛素水平和肝功能(ALT、AST)、血脂(TG、TC、LDL-C、HDL-C)指标水平，计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)，HOMA-IR=空腹胰岛素水平(IU/mL)×空腹血糖水平(mmol/L)/22.5。

1.6 肝脏脂质含量的测定 取血后立即取出完整肝脏，用冷生理盐水漂洗，拭干，滤纸吸干表面水分，切取肝左叶，放入4% 多聚甲醛固定液中固定。后置于预冷的异丙醇中，参照Floch法，从液氮中取出0.5 g肝组织加入20倍体积的氯仿-甲醛(2∶1)匀浆液，充分剪碎匀浆，氯仿∶甲醛∶蒸馏水比例为2∶2∶1.8。然后向匀浆液中再加入0.1 mL 氯仿充分混匀30 s，再加入0.1 mL蒸馏水充分混匀30 s，涡旋混匀后，将匀浆液3 000 r/min离心20 min，将部分肝组织置于预冷的异丙醇(武汉市国泰化昌化工有限公司)中,冰浴匀浆为10%的匀浆液,4 ℃静置抽提48 h后3 000 r/min离心10 min,弃上清液，将剩下的肝组织研磨后置于预冷的等渗盐水中,加等渗盐水稀释至浓度为2%后,4 ℃ 3 000 r/min离心10 min,取上清液，制成10%的组织匀浆液，按试剂盒说明书方法测定TG和TC水平。

2 结 果

2.1 各组大鼠血清ALT、AST、TG、TC、LDL-C、HDL-C水平及HOMA-IR比较 模型组大鼠血清ALT、AST、TG、TC、LDL-C水平及HOMA-IR均明显高于正常组(P均<0.05)，HDL-C水平明显低于正常组(P<0.05)；多烯磷脂酰组和祛瘀化浊汤组血清ALT、AST、TG、TC、LDL-C水平及HOMA-IR均明显低于模型组(P均<0.05)，HDL-C水平明显高于模型组(P均<0.05)，且祛瘀化浊汤组各指标改善情况均明显优于多烯磷脂酰组(P均<0.05)。见表1。

表1 各组大鼠血清ALT、AST、TG、TC、LDL-C、HDL-C水平及HOMA-IR比较

注：①与正常组比较，P<0.05；②与模型组比较，P<0.05；③与多烯磷脂酰组比较，P<0.05。

2.2 各组大鼠肝组织中TC、TG水平比较 模型组大鼠肝组织匀浆中TC、TG水平显著高于正常组(P均<0.05)，多烯磷脂酰组和祛瘀化浊汤组肝组织匀浆中TC、TG水平显著低于模型组(P均<0.05)，且祛瘀化浊汤组明显低于多烯磷脂酰组(P均<0.05)。见表2。

表2 各组大鼠肝组织中TC、TG水平比较

注：①与正常组比较，P<0.05；②与模型组比较，P<0.05；③与多烯磷脂酰组比较，P<0.05。

3 讨 论

肝脏是糖原合成、分解及糖异生的主要场所，是胰岛素抵抗发生的主要器官之一。研究表明，胰岛素信号传导减弱或受阻是导致肝脏糖代谢调节能力下降的主要原因[5-6]。肝脏是胰岛素作用的主要靶器官，对机体糖代谢起重要的调节作用[7]。本研究发现模型组大鼠血清ALT、AST、TG、TC、LDL-C水平及HOMA-IR均和肝组织匀浆中TC、TG水平明显高于正常组，HDL-C水平明显低于正常组。提示NAFLD大鼠胰岛素抵抗指数升高，肝脏糖异生的调控作用减弱，输出的葡萄糖增多，肝糖原合成作用减弱，加快肝组织脂肪变性。

非酒精性脂肪肝属于中医“痞满”“积聚”“胁痛”“肝癖”“黄疸”“腹痛”等范畴，主要病因为饮食不节，过食肥甘厚味，损伤脾胃，肝气不舒，气机不畅，脾虚不运，痰瘀互结，积于胁下，日久成病[8-9]。通过临床经验并结合前人的研究理论，笔者认为本病以肝郁脾虚、痰浊血瘀证型为多见，其主要病因病机为肝木失于涵养，肝郁不舒，木郁克土，脾胃气机不畅，升清降浊不利，气血、痰浊瘀滞，闭阻肝络，且外邪内侵，正气亏虚，脏腑功能失调，日久损伤肝络[10]。祛瘀化浊方中泽泻利湿化痰，导浊下行；柴胡、郁金取逍遥散之意，针对土虚木郁之病理变化，健脾疏肝，以复脾土运化之职及肝木条达之性；丹参、海藻疏肝活血，健脾化痰，软坚散瘀；山楂、鸡内金消食导滞，化瘀散结；决明子清肝化痰，泄浊通便；诸药合用，肝脾并调，痰瘀同治，使脾土健运，肝木条达，痰消瘀祛，津液输布正常，肝癖自复有望。现代研究发现，丹参中有效成分丹参总酮和总酚酸能增强NAFLD大鼠肝组织中PPARαmRNA的表达，降低血清 TC、TG、ALT、AST水平，改善肝组织病理学形态[11]；山楂叶总黄酮可通过有效增加超氧化物歧化酶活性，降低丙二醛含量，改善肝内脂质代谢[12]。本研究结果显示，多烯磷脂酰组和祛瘀化浊汤组血清ALT、AST、TG、TC、LDL-C、HOMA-IR及肝组织匀浆中TC、TG水平均明显低于模型组，HDL-C水平明显高于模型组，且祛瘀化浊汤组各指标改善情况均明显优于多烯磷脂酰组。提示祛瘀化浊方祛瘀化浊方能够改善大鼠脂肪代谢紊乱,在一定程度上延缓大鼠肝脏脂肪沉积，纠正胰岛素抵抗，为该药的临床应用提供了一定理论依据。

[1] 吴长会，沈敏，李龙，等． PI3K /Akt /mTOR/p70S6K 信号通路在肝纤维化发生发展中的作用[J]． 临床肝胆病杂志，2015，31(11)：1928-1932

[2] 张睦清，韩，雪，郭建利，等． 脂肪肝大鼠肝脏PPARαmRNA表达的影响[J]． 河北中医药学报，2013，28(11)：1-5

[3] 李中南，方朝晖，熊园园，等． 丹蛭降糖胶囊对糖尿病大鼠肝脏PI3K/AKT信号通路的影响[J]． 上海中医药杂志，2015，49(9)：67-70

[4] 吴睿，陈征，徐亚运，等． 高脂饲料诱导的非酒精性脂肪肝大鼠模型建立及其血浆nesfatin-1 的变化[J]． 卫生研究，2016，45(3)：452-457

[5] 申甜，徐碧林，盛霞. 非酒精性脂肪肝大鼠肝组织FGF21mRNA表达与脂质沉积、胰岛素抵抗的关系[J]． 山东医药,2016, 56(6)：10-13

[6] 樊爱娟. 糖尿病脂肪肝与胰岛素抵抗的联系[J]． 实用糖尿病杂志，2016,11(6)：53-54

[7] 邓银芝，黄铁军，张明哲，等. 非酒精性脂肪肝病患者血清PTX3水平与胰岛素抵抗以及氧化应激相关分析[J/CD]． 中国肝脏病杂志：电子版，2015,7(2)：101-106

[8] 邱汉平，李尝赐，林昆明，等. 非酒精性脂肪肝的中医病因病机和证候特点分析[J]． 中外医学研究，2014，12(25)：62-64

[9] 张顺贞，石安华，姚政，等. 非酒精性脂肪肝中医病因病机探讨[J]． 云南中医中药杂志，2015，36 (1)：17-19

[10] 李宝玲. 浅析脂肪性肝病的中医辨证治疗[J]. 中国中医药现代远程教育,2011,9(2):194

[11] 张睦清，韩雪，郭建利，等． 丹参不同组分对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏PPARαmRNA表达的影响[J]． 河北中医药学报，2013，28(4)：1-5

[12] 高志强，谢美娟，陈立波． 山楂果叶对脂肪肝大鼠脂质代谢及氧化应激的影响[J]． 四川中医，2016，34(5)：50-53