细胞黏附因子1在子宫内膜异位症患者中的表达及临床意义

麦艳芬，钱怀萍，胡淑娟，陈仰新

佛山市第五人民医院1妇产科， 2病理科 广东 佛山 528211

子宫内膜异位症（EMs）是指有活性的子宫内膜细胞种植在子宫内膜以外的位置而形成[1-2]。子宫内膜异位种植后发生异位增殖生长被认为是子宫内膜异位症的主要发生机制[3]。子宫内膜异位生长虽然被视作一种良性增殖，但与恶性肿瘤一样极具有超强的侵袭浸润能力，子宫内膜的异位组织可侵袭至腹膜、卵巢和直肠阴道隔等部位[4]，子宫内膜异位增殖的分子生物学基础很可能与众多的恶性肿瘤侵袭浸润相同。子宫内膜的异位生长病变伴随着体内多种调节蛋白表达水平的变化，探讨子宫内膜组织发生异位生长和浸润侵袭的内在分子机制对临床的治疗和预后都有非常重要的意义。有研究认为MALAT1是与EMs发生、发展可能相关的一种基因[5]，另有研究发现EMs患者的同源框A10基因表达量低于正常，这可能与子宫内膜容受性减低及子宫内膜异位症的发生发展具有关系[6]。除此之外，Importin蛋白[7]、MDM2蛋白[8]以及NGF因子[9]等均被认为与EMs的发生发展有一定相关性。在EMs的发生发展的过程中，必然有多种基因共同调控，在与众多肿瘤促进基因相比，最近发现的细胞粘附分子1（CADM1）基因是一种肿瘤抑制基因[10-11]。在多种肿瘤组织与癌旁组织CADM1表达水平对比实验中，均有CADM1表达下调的结论得出，CADM1的失活或者表达下调可能是肿瘤细胞发生侵袭、浸润行为的影响因素之一[12-13]。本研究旨在探讨CADM1与子宫内膜异位症发生及发展的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2014年6～12月在我院治疗的子宫内膜异位患者45例，其中卵巢型21例，腹膜型24例，患者年龄27～41岁（36.5±3.2岁）。选取同期在我院进行治疗的未发生子宫内膜异位的其他患者30例作为对照组，患者年龄31～43岁（37.4±2.9岁），两组年龄差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 入选及排除标准

入选标准：（1）患者月经周期表现正常；（2）年龄＜50岁；（3）符合卵巢型及腹膜型子宫内膜异位症诊断标准；（4）对照组患者自愿参与病理检测。排除标准：（1）多囊卵巢综合征患者；（2）甲状腺疾病和糖尿病患者；（3）肿瘤患者。本研究经过我院伦理委员会审核批准。

1.3 研究方法

收集45例子宫内膜异位症患者的异位组织和在位组织以及30例子宫内膜正常患者的子宫内膜组织进行病理切片机检查；利用SABC法进行免疫组化染色，进行染色效果评价和CADM1阳性率结果分析，CADM1和Abcam多克隆抗体均购自美国Santa Cruz，SABC三步法试剂盒和二氨基联苯胺（DAB）购自武汉博士德生物工程有限公司；利用Western blotting印迹法考察不同组织中CADM1蛋白的相对表达量。

1.4 染色方法及效果评价

本研究采用链霉亲和素-生物素复合物（SABC）法进行免疫组化分析。对不同来源子宫内膜组织进行免疫组化染色后，需对染色强度和阳性率进行分析，用以评价CADM1的表达水平。对组织切片进行染色后，置于显微镜（Olympus）下观察并进行拍照，本研究采用的图像分析系统为HMIAS-2000型全自动彩色图像分析系统。CADM1蛋白表达于细胞的细胞质及细胞膜中，因此染色结果中细胞质或细胞膜内出现棕黄色颗粒则作为阳性结果，对染色强度评分标准定为无色为0分、浅黄色为1分、棕黄色为2分、棕褐色为3分。采用染色强度和阳性细胞百分比乘积计量阳性情况，乘积≥2分为免疫组织化学阳性，＜2分为阴性。阳性细胞百分比：高倍镜下（×400）按照随机选取每张3切片5个视野观察细胞，每个视野500个细胞，根据计算阳性细胞所占百分比：阴性为0分，阳性细胞＜10%为1分，阳性细胞10%～50%为2分，阳性细胞＞50%为3分。

1.5 统计学方法

应用SPSS21.0 软件，进行t检验和Pearson相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3种内膜组织的免疫组化染色结果

CADM1的阳性染色结果主要表现为在细胞质和细胞膜内出现成功染色的颗粒（图1），CADM1在异位内膜组织中的染色强度明显低于在位内膜组织染色强度，在位内膜组织的染色强度又明显低于正常内膜组织的染色强度。

2.2 3种内膜组织染色阳性率结果

采用染色强度和阳性细胞百分比乘积计量阳性情况：乘积≥2分为免疫组织化学阳性，＜2分为阴性，结果如表1。

2.3 Western blotting法检测CADM1的表达

异位组织中CADM1表达水平灰度值为19.331±2.239，在位组织中CADM表达水平灰度值为46.789±3.941，正常组织中CADM1表达水平灰度值为63.487±2.651，异位组织中CADM1的表达水平低于在位组织和正常组织（P＜0.05），在位组织中CADM1的表达水平低于正常组织（P＜0.05）。

表1 CADM1在不同内膜组织中染色阳性率结果统计

3 讨论

子宫内膜异位症是一种与雌性激素有关的疾病，主要表现为子宫内膜良性增殖组织的异位生长[14]。做为一种育龄妇女常见妇科疾病，子宫内膜异位发生部位主要包括腹膜、卵巢和直肠阴道隔等。痛经、慢性盆腔炎、不育或者性交困难是子宫内膜异位症的主要症状，这些症状的发生大大的降低了患病妇女的生活质量[15]。子宫内膜异位组织与子宫内膜正常组织在组织形态结构特征是具有很大的相似性，但仍在以下几个方面具有一定差异：相关基因和蛋白质表达、类固醇和细胞因子的合成和响应、免疫组件、粘附分子和蛋白水解酶等[16]。

多项研究证明CADM1在癌变组织或者其他疾病组织中因为启动子的高度甲基化而导致其表达减少或者或者缺失，从而进一步影响了癌变组织细胞的侵袭和浸润特性和能力，CADM1在肝细胞肝癌组织中的阳性表达率明显低于癌旁组织（41.7%vs58.33%）[17]，研究认为CADM1与肝细胞肝癌患者年龄、组织分型无关而与临床分期有关。CADM1在结直肠癌组织中具有维持癌变组织粘附作用且能够组织肠上皮细胞恶性转变的功能，研究表明结直肠癌组织的CADM1蛋白阳性表达率仅有25.7%，同时正常结直肠组织的阳性表达率高达80%，CADM1表达下调可能是结直肠癌发生发展的原因之一[18]。本研究显示子宫内膜异位组织中CADM1阳性表达率仅为37.78%，与正常组织93.33%相比，显著降低。CADM1作为一种细胞粘附因子，表达下调使得细胞的转移或者异位生长变得更为容易。在其他如口腔鳞状细胞癌组织[19]、卵巢癌组织[20]、食管鳞癌组织[21]以及骨肉瘤组织[22]中的均有CADM1表达下调的相关研究。

为了进一步深入研究异位组织与在位组织的差异性，以及与正常子宫内膜组织的差异性，本研究发现，子宫内膜异位症患者异位内膜腺上皮细胞中的CADM1的表达量明显低于正常内膜腺上皮细胞，这体现了CADM1与异位内膜中的表达下调或者失活与异位组织发生种植后的生长发展的相关性。进一步研究，在位内膜与正常内膜组织之间CADM1之间存在的显著差异，表明发生子宫内膜异位症的在位内膜组织仍具有较强的侵袭和浸润能力。

本研究通过免疫组化法分析了子宫内膜异位症患者的异位内膜、在位内膜及正常内膜组织中CADM1表达水平的变化，结果表明，CADM1在异位内膜和在位内膜中的表达下调与子宫内膜异位组织发生侵袭和浸润具有密切相关性，临床上对其表达水平进行分析有助于判断子宫内膜异位症的侵袭转移及预后评估。

[1]Sikora J, Mielczarek-Palacz A, Kondera-Anasz Z. Association of the precursor of interleukin-1 and peritoneal InflammationRole in pathogenesis of endometriosis[J]. J Clin Lab Anal, 2016, 30(6):831-7.

[2]林 杰, 赖志文, 林 洁, 等. EGR-1及MMP-9在子宫内膜异位症中的表达及意义[J]. 海南医学, 2017, 28(7): 1101-3.

[3]程 虹, 黄守国, 王海燕. 临床症状和妇科检查对深部浸润型子宫内膜异位症的评估价值研究[J]. 重庆医学, 2016, (3): 414-7.

[4]汪胡风, 赵 蕾. 子宫内膜异位症诊治的研究进展[J]. 浙江临床医学, 2016, 18(11): 2156-8.

[5]曹颖丽, 石 婷, 胡 蓉, 等. MALAT1在子宫内膜异位症中的表达及研究[J]. 临床检验杂志, 2017, 24(11): 849-52.

[6]温梦乔, 张 伟, 徐 琳. HOXA10在子宫内膜异位症患者在位子宫内膜中表达的Meta分析[J]. 中国妇幼保健, 2017, 32(21):5486-9.

[7]龙行涛, 王 冬, 田桂兰, 等. Importin13在子宫内膜异位症和子宫内膜癌中的表达及意义[J]. 中国癌症杂志, 2012, 22(1): 10-4.

[8]桑 琳, 赵卫东, 杜世华. p53p21MDM2蛋白在卵巢子宫内膜异位症和子宫腺肌症中的表达及意义[J]. 安徽医学, 2012,33(10): 1346-50.

[9]李晓燕, 冷金花, 郎景和. NGF及其受体trkA及p75NTR在子宫内膜异位症患者在位内膜中的表达及其与内异症疼痛的关系[J].现代妇产科进展, 2012, 21(6): 435-9.

[10]费怀君, 胡 容. 细胞间粘附分子-1在肿瘤研究中的进展[J]. 药物生物技术, 2017, 20(3): 259-62.

[11]Sabari V, Sage EK, Kolluri KK, et al. CADM1 inhibits squamous cell carcinoma progression by reducing STAT3 activity[J]. Sci Rep, 2016, 15(6): 24006-9.

[12]Iwasaki T, Matsushita M, Nonaka D, et al. Lower expression of CADM1 and higher expression of MAL in Merkel cell carcinomas are associated with Merkel cell polyomavirus infection and better prognosis[J]. Hum Pathol, 2016, 48(5): 1-8.

[13]王晓凤, 柳艳飞, 田 勇, 等. 过表达细胞黏附分子1抑制卵巢癌细胞迁移及侵袭[J]. 临床与病理杂志, 2017, 37(1): 29-34.

[14]Okamoto M, Nasu K, Abe W, et al. Enhanced miR-210 expression promotes the pathogenesis of endometriosis through activation of signal transducer and activator of transcription 3[J]. Human Reproduction, 2015, 30(3): 632-41.

[15]李雅男, 王丹波, 陈英汉, 等. 不同类型子宫内膜异位症临床特点及意义分析[J]. 实用妇产科杂志, 2015, 31(1): 34-6.

[16]黄凤英, 王焕萍, 伍 媚, 等. GnRHⅡ与GnRH Ⅰa对子宫内膜异位症患者离体间质细胞增殖抑制的影响[J]. 中南大学学报:医学版, 2011, 36(6): 554-8.

[17]隋东明. CADM1, E-cad在肝细胞肝癌组织中的表达及临床意义[J]. 中国普通外科杂志, 2015, 24(7): 1046-9.

[18]张 茹, 徐正磊, 谭庆红. CADM1与DAL-1/4.1 B在结直肠癌中的表达[J]. 中国老年学, 2014, 33(14): 3845-7.

[19]李男男, 胡 敏, 王金蕊, 等. 口腔鳞状细胞癌中CADM1蛋白的表达及意义[J]. 口腔医学研究, 2011, 27(2): 145-8.

[20]夏 芬, 胡燕玲, 李 莉. 卵巢癌组织细胞黏附分子1的表达变化及意义[J]. 山东医药, 2016, 56(29): 14-6.

[21]刘宏斌, 朱 燕, 张晓娟, 等. 食管鳞癌组织CADM1mRNA的表达及临床病理意义[J]. 江苏医药, 2015, 41(17): 2042-4.

[22]何凯元, 梁伟国. 浅谈CADM1在骨肉瘤细胞中的表达及其与MMP-2, MMP-9的关系[J]. 当代医药论丛, 2015, 32(3): 11-3.