霜后桑叶总酚、黄酮和总糖含量变化研究

俞燕芳 黄金枝 王军文 杜贤明

(江西省蚕桑茶叶研究所 330202)

桑叶是一种传统中药，古代众多医药典籍中的桑叶多为经霜后采收，历版《中国药典》中收录的桑叶药材也为“霜桑叶”。桑叶为何经霜后采收？国内外学者对不同品种、不同季节桑叶的黄酮、DNJ等含量进行了测定分析与比较。许多研究发现桑叶黄酮类成分在10～11月经霜后达最大值，之后桑叶黄酮类物质含量显著降低[1～3]。刘利[4]等比较了不同季节、不同品种桑叶总黄酮含量的差异，结果表明，育71-1秋季叶片总黄酮含量显著高于春夏季，并且霜前含量略高于霜后，而实钴11-6春、秋叶片总黄酮含量差异不明显。沈维治等[5]也发现在4～10月中同一品种桑叶中不同酚类物质变化不一样，不同品种桑叶相同酚类物质变化也不一样。

我国各个地区气候环境不同，而且经霜前后同一月份气温变化差异也很大，现有研究结果大都是对不同月份的桑叶中的活性物质含量进行比较，难以全面地反映霜后桑叶活性成分的动态变化规律和霜后采收桑叶的合理性。笔者对江西省“霜降”后桑叶的酚类、黄酮类及可溶性总糖等成分含量变化进行了分析，为进一步明确桑叶采收时间提供一定的科学依据，以更为科学有效地利用桑叶资源。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂

没食子酸、芦丁和葡萄糖标准品购自阿拉丁(≥98%)，无水乙醇、福林酚(2N)、无水碳酸钠、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、苯酚、浓硫酸等试剂均为分析纯。

1.1.2 仪器

UV-2600紫外分光光度计(日本岛津)，SK3310HP超声清洗器(上海科导超声仪器有限公司)。

1.1.3 桑叶样品

桑叶采自江西省蚕桑茶叶研究所桑树品种园，供试桑叶品种为强桑1号、大10、梨叶大、甜桑、黑油桑和尖头荷叶，取其枝条中上部位桑叶。采集时间为2015年10月26日、11月2日、11月9日和11月16日，采后桑叶60℃烘干，粉碎，过60目筛，备用。

1.2 方法

1.2.1 桑叶黄酮、酚类物质的提取与测定

采用超声辅助法提取桑叶多酚和黄酮。称取桑叶粉 0.5 g，置50 mL离心管中，加 70% 乙醇30 mL，超声(300W)提取2次，每次30 min，合并提取液，以70%乙醇定容至100 mL，得到桑叶酚类(黄酮)提取液。

桑叶总酚含量采用福林酚比色法测定[6]：取不同浓度没食子酸标准品溶液(0mg/mL, 0.04 mg/mL，0.08 mg/mL，0.12 mg/mL，0.16 mg/mL，0.20 mg/mL)1mL，置于25mL 试管中，分别加入福林酚溶液(0.1N)5 mL，反应5min后，加入7.5% 碳酸钠溶液 4 mL，摇匀，定容，避光放置 30 min后，在 765nm处测定吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。桑叶提取液按相同条件测定吸光总黄酮含量采用亚硝酸钠-硝酸铝法测定[7]：取不同浓度(0 mg/mL, 0.1 mg/mL，0.2 mg/mL，0.3 mg/mL，0.4 mg/mL，0.5 mg/mL，0.6 mg/mL)芦丁标准品溶液1mL，置于10mL 试管中，加 5% 亚硝酸钠0.4mL，放置 6 min 后，加 10% 硝酸铝 0.4 mL，放置 6 min，加入 1 mol/L 氢氧化钠 4 mL，加蒸馏水至刻度，摇匀，静置15min后在 510 nm 处测定吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。桑叶提取液按相同条件测定吸光度，代入标准曲线计算得到提取液总酚质量浓度，桑叶中总黄酮含量以干物质计，以芦丁当量表示(mg/g干重)。

度，代入标准曲线计算得到提取液总酚质量浓度，桑叶中总酚含量以干物质计，以没食子酸当量表示(mg/g干重)。

1.2.2 可溶性总糖含量测定

利用水浸提法从桑叶中提取桑叶可溶性总糖。称取 1 g桑叶粉，加50mL蒸馏水，沸水浴浸提 1 h，10 000 r / min离心5min，沉淀加50mL蒸馏水重复提取1次，合并2 次滤液，定容至100 mL，得桑叶可溶性总糖提取液。

总糖含量采用苯酚硫酸法测定[8]：取不同浓度葡萄糖标准品溶液(0 mg/mL, 0.02 mg/mL，0.04 mg/mL，0.06 mg/mL，0.08 mg/mL，0.10 mg/mL)1mL，置于25mL 试管中，分别加入5% 苯酚溶液 1 mL，混匀，迅速加入浓硫酸5 mL，沸水浴中反应 15 min，冷却后室温放置30min，在 490nm 处测定吸光度，以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。桑叶提取液稀释后按相同条件测定吸光度，代入标准曲线计算得到提取液总酚质量浓度，桑叶中总糖含量以干物质计，以葡萄糖当量表示(mg/g干重)。

2 结果与讨论

2.1 不同时期桑叶总酚含量变化

不同品种桑叶在霜后不同时期的总酚含量变化趋势相似(具体见表1和图1)，10月26日含量最高，在10月26日至11月2日期间总酚含量下降非常显著，大10、黑油桑、尖头荷叶、梨叶大、强桑1号和甜桑桑叶分别下降了16.46%、36.23%、41.91%、30.29%、38.51%和18.84%。11月2日至11月26日期间不同品种桑叶总酚含量均有小幅波动。

表1 不同品种桑树经霜前后桑叶成分变化

图1 霜后不同时期桑叶总酚含量变化

2.2 不同时期桑叶黄酮含量变化

由表1和图2可以看出，霜后不同品种桑叶黄酮含量变化趋势与总酚含量变化趋势(图1)相同，即10月26日最高，而后含量下降并有小幅波动。这与杨贵明等提出的霜后黄酮类物质含量显著降低一致[9]。

图2 霜后不同时期桑叶总黄酮含量变化

结合11月份南昌县的天气情况(图3)，10月28至11月2日期间有明显的降温而且是连续的阴雨天，桑树在这期间次生代谢可能停止；11月3日后天气转晴气温回升(平均气温20～24℃)，桑叶总酚和黄酮含量有小幅上升；11月8日后桑叶总酚和黄酮含量随着气温下降(下雨)而下降。总之，桑叶总酚、黄酮等物质含量可能与光照时间的长短、气温的变化有关。

图3 采样地点不同日期平均气温变化图

2.3 不同时期桑叶可溶性总糖含量变化

不同品种桑叶在霜后不同时期的可溶性总糖含量变化趋势与总酚(黄酮)明显不同，不同品种的变化趋势也不一样(表1和图4)。总体上看，同一品种桑叶在10月26日和11月2日含量接近，显著高于11月9日和11月16日含量。大10、黑油桑、尖头荷叶、梨叶大、强桑1号和甜桑，桑叶可溶性总糖的最低值与最高值相比，分别减少了44.00%、60.88%、30.87%、54.27%、41.27%和60.63%。

图4 霜后不同时期桑叶可溶性总糖含量变化

3 结论

本实验研究了霜后不同时间不同品种桑叶中内含成分动态变化，结果表明，不同时期的桑叶中总酚、黄酮和可溶性总糖含量均有一定差异，且不同成分的变化趋势不同。总酚、黄酮的含量变化，随着霜降后时间推移，呈逐渐降低趋势；桑叶可溶性总糖，经霜降后表现为前期较高，后期降低的趋势。但总酚、黄酮及可溶性糖的变化均与所处区域温度及光照时间有关，其变化机制有待进一步研究。因此认为同样是霜后桑叶，采摘时间对桑叶有效成分的含量仍然有很大影响，应根据气候变化和桑叶不同成分的功效，合理选择采收时间。

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[4] 刘利. 桑叶次生代谢产物研究[D].中国农业科学院, 2005.

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[9] 杨贵明, 薛秋生, 甄占萱, 等. 不同生长时期桑叶中黄酮类物质的含量差异研究[J]. 时珍国医国药, 2006(1): 50～51.