CyclinA和CyclinB1在乳房外Paget病中的表达及意义

王玲，范文葛，毛敏

（江苏省常熟市第一人民医院，常熟215500）

乳房外 Paget病（Extramammary Paget’s disease,EMPD）又称乳房外湿疹样癌，是一种少见的恶性皮肤肿瘤。细胞周期的调控异常与肿瘤的发生密切相关。细胞周期调控的主要物质包括细胞周期蛋白

Cyclins、细胞周期蛋白依赖性激酶（Cyclindependent kinases,CKDs）和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白（Cyclin-dependent kinases inhibitors,CDKIs）作为细胞周期调控的正性调控因子，细胞的癌变与Cyclins的过度表达有密切关系。本研究旨在讨论CyclinA和CyclinB1在EMPD中的表达情况及其与EMPD发生发展的关系。为探讨CyclinA和CyclinB1与EMPD发生的关系，我们用免疫组化方法，检测CyclinA和CyclinB1在EMPD皮损中的表达。

1 材料与方法

1.1 临床资料 收集常熟市第一人民医院2010年1月—2017年7月经组织病理确诊为EMPD标本共28例，其中男23例，女5例，年龄54～83岁，平均69岁，皮损主要位于阴囊及腹股沟处，见图1。术前均未实施放、化疗。患者无胃肠道肿瘤或泌尿生殖系统肿瘤。另取18例正常皮肤组织作为对照。

1.2 主要试剂 兔抗人CyclinA购自武汉博士德公司。兔抗人CyclinB1和二步法免疫组化检测试剂购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 免疫组化染色 免疫组化染色按免疫组化二步法检测试剂盒操作说明书进行操作。石蜡切片常规脱蜡至水；高温法修复抗原，3%H2O2用室温孵育10min，滴加一抗（工作浓度为 1∶50），37℃孵育 1.5h，加二抗37℃孵育0.5 h，DAB显色。用已知阳性片作为阳性对照。

1.4 结果判断 CyclinA和CyclinB1阳性染色为细胞核着色，为棕黄色颗粒。结果判定标准参照Campo等[1]的标准，结合染色强度和染色百分率进行结果判定。染色强度评分标准为：基本不着色为0分，着色弱为1分，着色中度为2分，着色强为3分。染色百分率评分标准为：着色细胞占总细胞数＜5%为 0分，6%～25%为 1分，26%～50%为 2分，＞50%为3分。以染色强度和染色百分率的评分之和进行结果判定：0分为阴性（-），1～2分为弱阳性（+）,3～4分为阳性（++）,≥5强阳性（+++）。

1.5 统计学分析 应用SPSS 16.0统计软件处理，采用卡方检验。CyclinA和CyclinB1的相关性分析采用Spearman等级相关。

2 结果

2.1 CyclinA在EMPD和正常皮肤组织中的表达 28例EMPD患者标本中有22例（78.6%）CyclinA表达阳性，其中5例弱阳性，17例为强阳性，阳性表达位于细胞核，见图2；18例正常皮肤组织中有1例CyclinA表达弱阳性。两者之间差异有统计学意义（χ2=23.365，P＜0.05）。结果见表 1。

图1 EMPD的临床和组织病理图片（B：HE染色×100倍）

图2 CyclinA在EMPD中的阳性表达（A：DAB染色 ×100倍，B：DAB染色×400倍）

表1 CyclinA和CyclinB1在EMPD和正常皮肤组织中的表达 例

2.2 CyclinB1在EMPD和正常皮肤组织中的表达 28例EMPD患者标本中有24例（85.7%）CyclinB1表达阳性，其中6例弱阳性，18例为强阳性，阳性表达位于细胞核，见图3；18例正常皮肤组织中有2例CyclinB1表达阳性。两者之间差异有统计学意义（χ2=24.814，P＜0.05）。结果见表 1。

图3 CyclinB1在EMPD中的阳性表达（DAB染色A×100倍，B×400倍）

2.3 CyclinA和CyclinB1在EMPD组织中表达的相互关系 Spearman等级相关分析表明，在EMPD组织中，CyclinA和CyclinB1两者表达呈正相关，见表2。

表2 EMPD组织中CyclinA和CyclinB1表达的相关性 例

3 讨论

CyclinA是细胞周期重要的正性调控因子，它的正常表达是保证细胞S期、G2/M期顺利完成的主要因子。研究发现CyclinA与肿瘤的增殖有相关性，曾将CyclinA作为肿瘤扩增的标记[2]。CyclinA过表达，见于皮肤鳞癌、瘢痕癌、舌癌、胃癌等[3-6]。CyclinA过表达持续性激活细胞周期蛋白依赖性激酶2（CDK2），促进G1/S期转换，一旦这种机制超越了细胞周期的控制，便会导致细胞周期的循环加速和细胞过度增殖，最终导致细胞癌变。本研究结果显示，CyclinA在EMPD中的阳性表达明显高于正常组织，表明CyclinA在EMPD的发生中起重要作用，并对EMPD的早期诊断有一定的参考价值，同时可能为EMPD的治疗提供新的作用靶点和理论基础。

CyclinB1是细胞周期G2/M转换的重要正性调节因子。CyclinB1过表达使细胞周期G2/M转换时间缩短，促进细胞过度增殖，导致细胞癌变。研究表明CyclinB1与多种恶性肿瘤细胞的细胞周期调控异常密切相关，在喉鳞状细胞癌、眼睑基底细胞癌、脑胶质瘤等组织中存在CyclinB1高表达[7-9]。本研究中发现，EMPD组CyclinB1的阳性率为85.7%，明显高于对照组，提示在正常皮肤组织、EMPD中细胞增殖活性不同，细胞过度增殖可能与EMPD的发生、发展有关，CyclinB1可以作为EMPD发生发展的检测指标。

本研究结果显示，在EMPD中有CyclinA与CyclinB1的异常高表达，并呈正相关，提示CyclinA与CyclinB1的过表达可能协同调控了细胞周期，促进细胞异常增殖，最终导致肿瘤形成，提示两者在EMPD肿瘤形成机制中可能起重要作用。

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