断奶日龄对五指山仔猪抗氧化性能的影响*

荀文娟, 周汉林, 侯冠彧, 曹 婷, 施力光

(中国热带农业科学院 热带作物品种资源研究所，儋州 571737)

动物在正常生理状态下，机体内自由基产生和清除体系处于一种动态平衡状态，对维持生命活动具有重要的意义[1]。然而当机体受到应激刺激作用时，自由基动态平衡遭破坏，造成自由基代谢异常，从而导致了诸多疾病的发生和发展。在现代畜牧生产中，氧化应激可能是动物疾病发生、发展的主要诱因，已经成为近年来动物营养领域研究的热点之一。

随着养猪生产向集约化方向发展，为了提高母猪的繁殖率、分娩栏舍利用率，减少疾病传播和降低仔猪的生产成本等，仔猪早期断奶成为普遍采用的技术之一。然而，早期断奶同时也给仔猪生产带来诸多问题，导致仔猪易出现采食量下降、生长阻滞和腹泻、免疫功能降低等所谓的“断奶仔猪应激综合症”[2]。已有研究表明，仔猪抗氧化功能与其抗应激能力、生产性能和免疫功能等都密切相关[3]。袁施彬等研究发现仔猪遭受氧化应激可引起抗氧化酶活性下降，从而导致仔猪抗应激功能降低[4]。李留安等[5]研究发现断奶日龄影响仔猪脾脏、胸腺和胰腺抗氧化功能，且断奶日龄越早，组织抗氧化功能下降的程度越大。此外，研究还发现，断奶可导致仔猪遭受严重的氧化应激，引起肠粘膜屏障功能受损，是诱发断奶应激综合征的重要原因[6]。五指山猪是中国著名的小型猪种之一。然而，长期以来，由于养殖方式落后，技术水平低等诸多制约因素，关于不同断奶日龄对五指山仔猪影响的研究甚少。本研究通过检测不同断奶日龄五指山仔猪抗氧化酶变化规律，分析断奶日龄对仔猪抗氧化功能的影响，旨在为建立缓解仔猪早期断奶综合症的饲养管理策略提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物及分组

选择出生日龄相近，初生重相近(0.56±0.07)kg的五指山仔猪96头，随机分成4组，每组设4个重复，每个重复6头猪，公母各半，分别为21日龄断奶组(21 W)，28日龄断奶组(28 W)，35日龄断奶组(35 W)和42日龄断奶组(42 W)。试验仔猪从8日龄开始诱食，按常规程序进行免疫。断奶时间为各处理组断奶日龄当晚8:00～9:00，断奶时赶走母猪, 仔猪仍留在原处，试验期间仔猪舍温湿度、通风量及光照等均满足仔猪要求，环境卫生条件良好，五指山仔猪基础日粮的配制参照《五指山猪养殖技术规程》(2007)。

1.2 样品采集及测定

各处理组分别于28、35、42、49、56日龄晨饲前，每个重复随机抽取2头仔猪，公母各一, 每个处理组采血样8头份，每头猪从前腔静脉采血10 mL，静置30 min后，3 000 r /min 离心10 min，分装于1.5 mL离心管，-20 ℃保存。用于血清抗氧化指标测定。

测定指标及方法：采用化学比色法测定血清中谷胱甘肽过氧化物酶( GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、总抗氧化能力(T-AOC)和过氧化氢酶(CAT)含量，试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

1.3 数据分析

采用SPSS 17.0 统计软件中的ANOVA 程序进行单因素方差分析，采用Duncan's多重比较进行差异显著性检验，以P<0.05作为差异显著性标准，结果用平均值±标准差(Means±SD)表示。

2 结果与分析

2.1 断奶日龄对仔猪GSH-Px活性的影响

由表1可知，从各组别看，21日龄、28日龄、35日龄断奶组GSH-Px活性均存在显著变化，21日龄断奶组变化幅度最大，56日龄时GSH-Px活性显著高于28～42日龄(P<0.05)，35日龄断奶组仅在断奶后1周GSH-Px活性显著降低(P<0.05)，49日龄后，GSH-Px活性已恢复至断奶前水平(P>0.05)，42日龄断奶组GSH-Px活性在各个时间点都无显著差异(P>0.05)；从相同日龄看，35日龄和42日龄断奶组在28～35日龄时显著高于21日龄断奶组(P<0.05)，49日龄后，各处理组GSH-Px活性已无显著差异(P>0.05)。

2.2 断奶日龄对仔猪血清CAT活性的影响

由表1可知，21日龄、28日龄断奶组存在显著变化，21日龄断奶组42～56日龄时CAT活性显著高于28～35日龄(P<0.05)，28日龄断奶组仅在35日龄时CAT活性显著下降(P<0.05)，42日龄以后已恢复至断奶前水平(P>0.05)，35日龄和42日龄断奶组CAT活性在整个试验期差异不显著(P>0.05)；从相同日龄来看，35日龄和42日龄断奶组CAT活性在28～35日龄时显著高于21日龄断奶组(P<0.05)，49日龄后，各处理组CAT活性已无显著差异(P>0.05)。

表1 断奶日龄对仔猪抗氧化性能的影响Table 1 Effects of weaning age on antioxidant activities in serum of Wuzhishan piglets U/mL

注：同列数据肩标不同大写字母表示差异显著(P<0.05)，同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，相同或无字母表示差异不显著(P>0.05)。

Note: In the same line, values with different capital letter superscripts mean significant difference (P<0.05). In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), the same or no letter superscripts mean insignificant difference(P>0.05).

2.3 断奶日龄对仔猪血清超SOD活性的影响

由表1可知，各处理组SOD活性在整个试验期差异均不显著(P>0.05)，可见SOD活性不受断奶日龄的影响。

2.4 断奶日龄对仔猪血清MDA含量的影响

由表1可知，从各组别看， 21日龄、28日龄断奶组MDA含量存在显著变化，21日龄断奶组在56日龄时MDA含量显著低于28～42日龄(P<0.05)，28日龄断奶组在56日龄时MDA含量显著低于35～42日龄(P<0.05)，35日龄和42日龄断奶组MDA含量在整个试验期差异不显著(P>0.05)；从相同日龄看，35日龄和42日龄断奶组MDA含量在28～35日龄时显著低于21日龄断奶组(P<0.05)，在42～49日龄时，42日龄断奶组MDA含量显著低于21日龄和28日龄断奶组(P<0.05)，56日龄后，各处理组MDA含量已无显著差异(P>0.05)。

3 讨 论

动物在正常生理状态下，机体产生少量的超氧阴离子、过氧化物、氢离子等自由基，这些自由基的产生与清除处于一种动态平衡的状态。但当机体受到刺激后，产生大量的氧自由基通过攻击生物膜多不饱和脂肪酸、DNA、蛋白质和其他生物大分子，对细胞产生很强的毒性，使生物膜的结构发生改变，导致机体老化和细胞死亡[7-8]。抗氧化酶(SOD、GSH-Px和 CAT)构成的机体抗氧化防御体系是保护机体免受氧化损伤的一道屏障，对维持机体的自由基代谢平衡发挥着重要作用[9]。其中，SOD和GSH-Px是机体的天然自由基清除剂，可保护细胞膜和其他生物组织免受氧化损伤[10-11]。CAT主要作用为参与活性氧的代谢过程，可防止生物膜的脂过氧化[12]。MDA作为脂质过氧化的终产物之一，其含量的多少可反映氧自由基介导的脂质过氧化程度[13-14]。

Yin等[15]通过检测14 日龄断奶仔猪血浆抗氧化能力和空肠抗氧化酶基因表达发现，断奶应激破坏了机体的抗氧化平衡，造成仔猪的氧化损伤。孙景童等研究发现25日龄断奶仔猪在断奶 10、25和35 d后血浆SOD、GSH-Px活性比19日龄断奶仔猪显著提高，MDA含量显著降低，表明25日龄断奶仔猪的抗氧化能力比19日龄断奶仔猪强[16]。杨晶晶[17]研究发现，28日龄和35日龄断奶仔猪的血浆T-SOD、GSH-Px活性显著高于14日龄断奶组，MDA含量显著低于14日龄断奶组，表明仔猪断奶日龄越早，仔猪抗氧化能力越低。本试验结果发现，21日龄断奶组GSH-Px、CAT、MDA变化幅度较大，恢复时间较长。与21日龄断奶组相比，35日龄和42日龄断奶组GSH-Px、CAT活性在28～35日龄时显著提高，MDA含量显著降低，42日龄时，42日龄断奶组GSH-Px、CAT活性显著高于其它三个组，与前人结果相似，说明断奶可显著影响仔猪抗氧化系统，且断奶日龄越早，对仔猪抗氧化性能影响越大。仔猪可通过自身反馈调节机制恢复其抗氧化系统[15]。本试验也发现，49日龄后，各处理组GSH-Px、CAT活性已无显著差异，56日龄后，各处理组MDA含量无显著差异，说明仔猪抗氧化系统已恢复。本实验中不同断奶日龄对血清SOD活性无显著差异，其具体机制还有待进一步研究。

4 结 论

断奶显著影响仔猪抗氧化酶活性，断奶日龄越早，对仔猪抗氧化性能影响越大，21日龄断奶组GSH-Px、CAT、MDA变化幅度较大，恢复时间较长。56日龄后，各处理组抗氧化酶活性和MDA含量已无显著差异，说明仔猪可通过自身反馈调节机制恢复其抗氧化系统。

[1] RICHTER C. Biophysical Consequences of lipid peroxidation in membranes[J]. Chemistry and Physics of Lipids, 1987, 44(2/4): 175-189.

[2] BAGCHI M, MILNES M, WILLIAMS C, et al. Acute and chronic stress-induced oxidative gastrointestinal injury in rats,and the protective ability of a novel grape seed proanthocyanidin extract[J]. Nutrition Research, 2000, 19(8):1 189-1 199.

[3] 余冰，张克英，袁施彬，等．仔猪氧化应激及硒的抗氧化效应与机制[J]．饲料与畜牧，2008(6)：8-13．

[4] 袁施彬，陈代文．氧化应激对断奶仔猪组织抗氧化酶活性和病理学变化的影响[J]．中国兽医学报，2009，29(1)：74-78．

[5] 李留安，王凤云，杨晶晶，等．断奶日龄对仔猪脾脏、胸腺和胰腺抗氧化功能的影响[J]．动物营养学报，2014，26(1)：74-80．

[6] 徐健雄．不同断奶日齡仔猪的氧化应激损伤及其机理研究[D]．南京：南京农业大学，2014：23-40．

[7] YANG X-j, CHEN J, ZHANG C-x, et al. Evaluation of antioxidant activity of fermented soybean meal extract[J]. African Journal of Pharmacy and Pharmacology, 2012, 6(24): 1 774-1 781.

[8] 肖定福，唐志如，印遇龙，等．壳聚糖对大肠杆菌攻毒仔猪生长性能和抗氧化状况的影响[J]．激光生物学报，2011，20(6)：741-746．

[9] 宋志学，杜天玺，孙红国，等．红芪粗多糖对免疫应激断奶仔猪生长性能、血清生化指标和抗氧化能力的影响[J]．动物营养学报，2013，25(5)：1 062-1 068．

[10] 王全溪，林滉，贾洪强，等．乳酸菌素对肉鸡血清生化指标和抗氧化功能的影响[J]．动物营养学报，2012，24(1)：131-136．

[11] 李瑞，侯改凤，黄其永，等．德氏乳杆菌对哺乳仔猪生长性能、血清生化指标、免疫和抗氧化功能的影响[J]．动物营养学报，2013，25(12)：2 943-2 950．

[12] 刘灵芝，钟广蓉，熊莲，等．过氧化氢酶的研究与应用新进展[J]．化学与生物工程，2009，26(3)：15-18．

[13] BARTSCH H, NAIR J. Ultrasensitive and specific detection methods for exocylic DNA adducts: markers for lipid peroxidation and oxidative stress[J]. Toxicology, 2000, 153(1/3): 105-114.

[14] SARGIS R M, SUBBAIAH P V. Protection of membrane cholesterol by sphingomyelin against free radical-mediated oxidation[J]. Free Radical Biology & Medicine, 2006, 40(12): 2 092-2 102.

[15] YIN J, WU M-m, XIAO H, et al. Development of an antioxidant system after early weaning in piglets[J]. Journal of Animal Science, 2014, 92(2): 612-619.

[16] 孙景童, 李命九,史唤,等. 断奶日龄对仔猪血液生化指标和抗氧化指标的影响[J]. 饲料研究, 2015, 21: 1-5.

[17] 杨晶晶．断奶日龄对仔猪抗氧化功能,生长相关激素及功能基因表达影响的研究[D]．天津：天津农学院，2016：10-18．