RhoE/Rnd3在子宫内膜样腺癌中的表达及其临床意义

杨云玲+郑秀

[摘要] 目的 分析 RhoE/Rnd3在子宮内膜样腺癌组织中的表达情况，以探讨RhoE/Rnd3在子宫内膜样腺癌发生发展中的作用及及其临床意义。方法 采用免疫组化PV-9000法检测2008年1月—2016年12月在福建医科大学附属第一医院收住院诊治的患者118例正常子宫内膜、非典型增生子宫内膜及子宫内膜样腺癌组织中RhoE/Rnd3蛋白的表达情况，并分析其表达情况与临床病理特征的相关性。结果 ①RhoE/Rnd3在正常子宫内膜（阳性率76.0%）、非典型增生子宫内膜（阳性率60.0%）、子宫内膜样腺癌组织中（阳性率42.6%）的表达阳性率呈逐渐降低趋势，三者之间阳性率差异有统计学意义（P<0.05）。②在子宫内膜样腺癌中，RhoE/Rnd3的表达阳性率与年龄、组织学分级及肌层浸润深度相关，与手术病理分期、淋巴结转移均未见相关性。结论 RhoE/Rnd3的低表达（阳性率12.5%）与子宫内膜样腺癌病变的进展和不良预后有关，对这种基因进行监测，有助于判断子宫内膜样腺癌的恶性程度及预后，从而为子宫内膜样腺癌寻找有参考意义的预测指标。

[关键词] 子宫内膜样腺癌；RhoE/Rnd3；免疫组织化学

[中图分类号] R737 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2017）10（c）-0011-04

Expression of RhoE/Rnd3 in Endometrial Adenocarcinoma and Its Clinical Significance

YANG Yun-ling1，2， ZHENG Xiu2

1.Department of Gynaecology and Obstetrics， Fujian Provincial Hospital， South Branch （Fujian Provincial Jinshan Hospital）， Fuzhou， Fujian Province， 350001 China； 2.Clinical School of Fujian Medical University， Fuzhou， Fujian Province， 350001 China

[Abstract] Objective This paper tries to analyze the expressions of RhoE/Rnd in endometrial adenocarcinoma and clinical significance in the development of endometrial adenocarcinoma. Methods From January 2008 to December 2016， 118 patients were admitted to the First Affiliated Hospital of Fujian Medical University， the expression of RhoE/Rnd3 was detected in normal endometria， endometrial atypical hyperplasias and endometrial adenocarcinoma with the method of imunohistochemistry （PV-9000）. And the relationships between their expression and the clinicopathological features in endometrial adenocarcinoma were analyzed. Results ①The positive expression of RhoE/Rnd3 was reduced gradually in the normal endometrium （positive rate was 76.0%）， the endometrial atypical hyperplasias （positive rate was 60.0%） and endometrial adenocarcinoma （positive rate was 42.6%）. The difference of postive rate between the three was statistically significant（P<0.05）；②The expression of RhoE/Rnd3 in endometrial adenocarcinoma was of great difference compared with that in the normal endometrial and the endometrial atypical hyperplasias. In endometrial adenocarcinoma， the positive expression of RhoE/Rnd3 was significantly assoeiated with age， histological grade and depth of myometrial invasion， but not with surgical stage and lymph node metastasis. Conclusion The low expression of RhoE/Rnd3 （positive rate of 12.5%） may contribute to progression and malignant behavior of endometrial adenocarcinoma cells. Joint detection of the expression of RhoE/Rnd3 can provide a reference for predicting the prognosis of endometrial adenocarcinoma patients.endprint

[Key words] Endometrial adenocarcinoma； RhoE/Rnd3； Immunohistochemistry

子宫内膜癌（Endometrial Carcinoma）是发生于子宫内膜的一组上皮性恶性肿瘤，占女性全身恶性肿瘤7%，占女性生殖道恶性肿瘤20%～30%[1]。其发病率在各地区有差异，在北美和欧洲其发生率高居女性生殖系统癌症的首位，在美国每年就有40 880例新发病例，其中7 310例死于子宫内膜癌。在我国，随着社会的发展和经济条件的改善，子宫内膜癌的发病率目前己接近甚至超过宫颈癌的发病率。但其发病机制仍不明确，该研究主要是对2008年1月—2016年12月期间收治的118例患者中RhoE/Rnd3蛋白表达在子宫内膜样腺癌发生、发展过程中的作用及其临床意义进行探论，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

方便收集在福建医科大学附属第一医院收住院诊治的临床资料和病理资料完整的病例共118例。病理诊断正常子宫内膜（增生期15例，分泌期10例）共25例，平均年龄45.7岁。非典型增生子宫内膜 25例，平均年龄 46.9岁。子宫内膜样腺癌68例 ，根据FIGO 2009手术-病理分期标准，I期44例，Ⅱ期16例，Ⅲ期8例；组织学分级：高分化24例，中分化31例，低分化13例；肌层浸润<1/2者49例，肌层浸润1/2者19例；淋巴结无转移者65例，有转移者3例；<50岁者16例，50岁者52例，年龄36～80岁，平均55.1岁。所有研究对象术前均未接受化疗、放疗和激素治疗，除外合并妊娠、子宫内膜异位症或腺肌病，其它妇科恶性肿瘤，且所有的病理诊断均经病理科专家复核。

1.2 方法及试剂

标本经10%的甲醛固定，石蜡包埋，厚度4m厚度切片，常规 HE染色。所有病例均按照 WHO标准确定病理诊断。免疫组化染色采用 Pv-9000法，兔抗人RHOE/RND3多克隆抗体原液（克隆号bs-6095R）购自北京博奥森生物技术有限公司，PV-9000二步法免疫组化检测试剂盒、DAB酶底物显色剂等均购自北京中杉金桥生物公司，以已知蛋白表达阳性的组织作为阳性对照。用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。

1.3 结果判定标准

RhoE/Rnd3阳性染色为出现淡黄色至棕褐色颗粒，RhoE/Rnd3定位于细胞浆及细胞膜上。结合半定量积分法判断蛋白表达结果，首先按染色强度打分：0分为无色，1分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色。镜下选择10个高倍视野，分别计数100个细胞，根据平均阳性细胞的百分率分为5个等级：无阳性细胞为0分，阳性细胞≤10%为1分，10%～50%为2分，50%～75%为3分，>75%为4分。染色强度与平均阳性细胞百分比的乘积>3，定为免疫反应阳性。最后用双盲法进行资料统计。

1.4 统计方法

应用 SPSS 11.0统计学软件进行统计学处理。组间阳性率的比较用 χ2检验，用[n（%）]表示，P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

RhoE/Rnd3蛋白在正常子宫内膜、不典型增生子宫内膜及子宫内膜样腺癌组織中的表达RhoE/Rnd3在正常子宫内膜（包括增生期和分泌期）、不典型增生子宫内膜及子宫内膜样腺癌组织中的表达阳性率分别为76.0%、60.0%、42.6%，呈逐渐降低趋势，3者之间阳性率差异有统计学意义（P<0.05）。见图1～5。RhoE/Rnd3蛋白在子宫内膜样腺癌中的表达阳性率与年龄、组织学分级及肌层浸润深度显著相关。年龄50岁患者RhoE/Rnd3蛋白阳性率（60.2%）明显高于年龄50岁（25.0%），差异有统计学意义（P=0.002）； 组织学分级G3期患者RhoE/Rnd3蛋白阳性率（15.4%）明显低于G1期（58.3%）、G2期（41.9%）患者，且RhoE/Rnd3蛋白在子宫内膜样腺癌中的表达阳性率按组织学分级G1、G2、G3呈依次递减趋势，差异有统计学意义（P=0.041）；肌层浸润深度无或<1/2肌层患者RhoE/Rnd3蛋白阳性率 （53.1%）明显高于肌层浸润深度≥1/2肌层（15.8%）患者，差异有统计学意义（P=0.005）。RhoE/Rnd3蛋白表达与手术病理分期、淋巴结转移均未见相关性（P>0.05），但手术病理分期Ⅲ期患者RhoE/Rnd3蛋白阳性率（12.5%）明显低于Ⅰ期（52.3%）患者，且在手术病理分期为Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期中的表达呈递减趋势。见表1。

3 讨论

RhoE是Rho家族比较独特的一个分子，Rho家族成员与肿瘤的关系是近年来肿瘤研究的热点。Rho蛋白家族在细胞的信号转导通路中起着信号转换器或分子开关的作用，通过对细胞骨架的重组，控制着细胞迁移、浸润和转移，还可通过对细胞生长周期的调控与细胞的生长、分化相联系。RhoE是在1996年被Rosemary Foster等[2]应用p190RhoGAP的cDNA为探针，从HeLa细胞cDNA文库中克隆了一个编码245个氨基酸，分子量为27kD的Ras家族蛋白，依照发现的顺序将该基因定名为RhoE，又称为Rnd3。RhoE/Rnd3的生物学功能主要表现在以下几个方面：①诱导细胞形态改变，增加细胞迁移能力；②抑制细胞的增殖，诱导细胞凋亡；③调节细胞分化；④参与信号传导；⑤参与细胞周期的调节；⑥与肿瘤细胞的耐药性有关。

近来多项研究揭示RhoE/Rnd3在多种肿瘤细中表达降低或缺失，如胃癌[3]、结肠癌[4-5]、原发性肝癌[6]、前列腺癌、乳腺癌、胶质母细胞瘤、食管癌等，因此RhoE/Rnd3被认为可能是肿瘤抑制基因之一。朱亚杰等[7]采用免疫组化的方法分析胃癌 74例、结肠癌 32例及相应癌旁组织中RhoE/Rnd3的表达水平，分析结果表明RhoE/Rnd3在胃肠道正常组织中普遍表达， 但在癌组织中低表达或缺失，在癌组织中的染色平均值为（1.99±0.28），在相应癌旁组织中为（8.64±0.39），并随肿瘤组织分化程度的降低染色强度有下降的趋势（P<0.005）。从而表明RhoE很可能是抑癌基因。刘印钦等[8]研究结果显示，RhoE在乳腺癌组织中表达率为46.48%，在癌旁组织中表达率为84.5l%，差异有统计学意义（P<0.01），RhoE表达水平与乳腺癌TNM分期、淋巴结转移有关（P<0.05），因此 RhoE/Rnd3在肝细胞肝癌发生发展过程中起着负性调控作用，表明RhoE/Rnd3可能在肝细胞肝癌中代表1个肿瘤抑制基因。endprint

该研究结果发现，低分化（阳性率15.4%）、伴有肌层浸润深度≥1/2肌层（阳性率15.8%）的子宫内膜样腺癌组织中RhoE/Rnd3蛋白的表达是下调或缺失的，提示子宫内膜样腺癌细胞通过RhoE/Rnd3的表达下调或缺失，使癌细胞分化异常，从而促进癌细胞的增殖、粘附、侵袭和迁移，近年来，几项研究对子宫内膜癌预后因素进行多因素分析，手术-病理分期、组织学分级作为最重要的两个独立预后影响因素己达成共识[9]。该研究中手术病理分期Ⅲ期患者RhoE/Rnd3蛋白阳性率（12.5%）明显低于Ⅱ期（阳性率31.3%）、Ⅰ期（阳性率52.3%）。由此可见，RhoE/Rnd3蛋白在子宫内膜样腺癌中的表达阳性率与年龄、组织学分级及肌层浸润深度显著相关。随着RhoE/Rnd3蛋白含量的减少或缺失，正常细胞向癌细胞转化速度加快，其预后不良，提示RhoE/Rnd3蛋白低表达或表达缺失是正常子宫内膜向子宫内膜样腺癌组织转化的一种趋势。因此，RhoE/Rnd3可以作为子宫内膜样腺癌患者预后良好的有用指标。RhoE/Rnd3在多种肿瘤细胞中呈现低表达或缺失，并能够通过多种途径来抑制细胞增殖，从而参与调节肿瘤细胞的凋亡，因此被认为可能是肿瘤抑制基因之一。深入了解RhoE/Rnd3、的真正作用，有助于了解子宫内膜样腺癌的发生发展机制，对于子宫内膜癌的预防、诊断、治疗及预后可发挥重大作用。

[参考文献]

[1] 曹泽毅.中华妇产科学[M].北京：人民卫生出版社，1999：1844.

[2] Foster R，Hu K Q，Lu Y，et a1.Identification of a novel human Rho protein with unusual properties：GTPase deficiency and in vivo famesylation.Mol Cell Biol，1996；16：2689-2699.

[3] Liang Chang，Fengjie Guo，Yudong Wang，et al.MicroRNA-200c regulates the sensitivity of chemotherapy of gastric cancer SGC7901/DDP cells by directly targeting RhoE.[J].Pathology oncology research： POR，2014，20（1）：93-98.

[4] 徐元成，俞晓菲，周杏元. Jagged1和CD147在大肠癌的表达及其临床意义[J].中华实验外科杂志 2015，32（6）：1413-1414.

[5] Chen GT， Dong WG. Targeting of RhoE inhibits epithelial-mesenchymal transition during colorectal cancer cell migration[J].Oncol and Transl Med. 2016（2）：119-126.

[6] 张超，李杰，张洪涛，等.RhoE/Rnd3在肝癌组织中的表达及临床意义[J].科学技术与工程，2009（9）：3980-4005.

[7] 朱亚杰，石芳， 张思源，等.RhoE 在胃腸道肿瘤组织中的表达及其临床意义[J].现代肿瘤医学，2008（16）：989-992.

[8] 刘印钦，冯庆箐，李永林，等.CD147和RhoE在乳腺癌组织中的表达及其生物学意义[J].中华实验外科杂志，2014，31（2）：411-412.

[9] 吴鸣，沈铿，郎景和，等.子宫内膜癌206例临床分析[J].中华妇产科杂志，2002，37（10）：620-621.

（收稿日期：2017-07-23）endprint