miR—205在乳腺癌患者血浆中的表达及临床意义研究

张庆玲

【摘要】 目的：研究乳腺癌患者血浆标本中miR-205的表达水平及临床意义。方法：选取本院收治的乳腺癌患者60例为乳腺癌组，乳腺良性病变患者60例为乳腺良性病变组，健康人群60例为对照组。抽取血浆标本，检测并观察三组miR-205的水平，分析其对乳腺癌的诊断价值、与患者临床病理参数的关系，分析影响乳腺癌预后因素。结果：乳腺癌组血浆中miR-205表达水平均高于对照组和乳腺良性病变组（P<0.05）；miR-205诊断乳腺癌的AUC为0.842，特异性为92.3%、灵敏度为84.6%；miR-205水平与TNM分期、肿瘤大小、分化程度及淋巴结转移关系密切（P<0.05）；Cox回归分析显示，肿瘤大小、淋巴结转移、miR-205水平均与乳腺癌预后密切相关，可作为独立的预后因子（P<0.05）。结论：乳腺癌患者血浆中miR-205呈较高表达，与临床病理学参数关系密切，对乳腺癌的诊断价值较高，且是影响腺癌预后的因子之一。

【关键词】 乳腺癌； miR-205； 临床病理参数； 诊断

【Abstract】 Objective：To study the expression and clinical significance of miR-205 in plasma of patients with breast cancer.Method：A total of 60 patients with breast cancer in our hospital were selected as breast cancer group，60 patients with breast benign lesions as breast benign lesion group，and 60 healthy people as control group.Plasma samples were extracted，the levels of miR-205 in three groups were detected and observed，the diagnostic value of miR-205 in breast cancer and its relationship with clinicopathological parameters were analyzed，the prognostic factors of breast cancer were analyzed.Result：The expression level of miR-205 in plasma of breast cancer group were higher than those of control group and benign breast lesion group（P<0.05）.The AUC of miR-205 in diagnosing breast cancer was 0.842，the specificity was 92.3% and the sensitivity was 84.6%.The level of miR-205 was closely related to TNM stage，tumor size，differentiation degree and lymph node metastasis（P<0.05）.Cox regression analysis showed that tumor size，lymph node metastasis and the level of miR-205 were closely related to the prognosis of breast cancer and could be used as independent prognostic factors（P<0.05）.Conclusion：The expression of miR-205 in plasma of patients with breast cancer is high，which is closely related to clinicopathological parameters，has high diagnostic value for breast cancer and is one of the factors affecting the prognosis of adenocarcinoma.

【Key words】 Breast cancer； miR-205； Clinical pathology parameters； Diagnosis

First-authors address：Jingzhou Chest Hospital，Jingzhou 434000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.33.002

微小RNA（microRNA，miRNA）屬于内源性非编码单链RNA，虽然其含量低，但调控人类将近33.3%的基因表达。miRNAs既可起促癌作用，也可起抑癌作用。早期报道发现在外周血中可以检测出稳定的miRNAs[1]。miRNAs在肿瘤的发生发展过程中起着非常重要的作用，很多研究学者认为其可以成为肿瘤新的诊断标志物[2-3]。近年来，研究发现血浆中含有稳定性较高的miRNA，可使得标本的获取更加方便，患者更容易接受。miR-205作为miRNA家族中重要的一员，与肿瘤的发生、发展也有密切的联系，且有研究发现miR-205与恶性肿瘤有关[4]，但其在乳腺癌中的诊断价值尚不明确。因此，本研究拟采用PCR技术检测乳腺癌患者血浆miR-205水平，并分析miR-205水平与患者临床病理特征的关系及对乳腺癌的诊断价值。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2015年3月-2017年3月本院确诊为乳腺癌的患者60例为乳腺癌组，乳腺良性病变患者60例为乳腺良性病变组。纳入标准：乳腺癌及乳腺良性病变患者入院确诊为该类疾病便被纳入研究人群，并且之前两个月内未服用任何药物；经病理切片和影像学方法确诊，入院前均未接受任何治疗；没有其他并发症、内分泌性疾病及其他恶性肿瘤；签署知情同意书。排除标准：并发有严重器官衰竭性疾病及内分泌性疾病；正在接受放化疗及拒绝参加的患者；病情加重急需马上治疗的患者。另选取同期体检中心健康人群60例为对照组。研究经本院伦理学委员会批准，并且研究对象均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 主要仪器和试剂 TRIzol试剂盒（Invitrogen公司，美国），逆转录试剂盒和2×Tap PCR MasterMix购自武汉华美生物有限公司，PCR仪（ABI公司），引物由武汉巴菲尔生物有限公司提供。

1.2.2 RNA提取及cDNA合成 清晨抽取患者空腹静脉血于肝素采血管中，收集上层血浆冻存于-80 ℃超低温冰箱待用。采用TRIzol试剂提取血浆总RNA，紫外分光光度及测其浓度及纯度。将200 ng总RNA按照逆转录试剂盒操作书完成。

1.2.3 实时定量PCR（RT-PCR）法检测miR-205表达 反应体系：10 μmol/L正、反向PCR特异引物均为0.4 μL，dNTP 1.0 μL，10×PCR引物PCR缓冲液1.0 μL，MgCl2溶液0.6 μL，Taq聚合酶0.5 U，Syber greenI 0.25 μL，ROX Reference Dye 0.2 μL，终体积8 μL。扩增条件：95℃，3 min；45个循环（95℃，15 s；55℃，20 s；72℃，20 s；75℃，20 s）。每组设置3个平行管。

miR-205引物：F 5-CACGTCCCAGGCTCCA-3，R 5-CGGGCATCGAAACTGCCAATT-3。内参β-actin引物：F 5-CTCCATCCTGGCCTCGCTGT-3，R 5-GCTGTCACCTTCACCGTTCC-3。miR-205相对表达量采用β-actin作为参照计算，并以二分位数为临界点，小于二分位数的为低表达，高于二分位数的为高表达。

1.3 观察指标 观察三组血浆中miR-205表达水平，分析miR-205对乳腺癌的诊断价值、与患者临床病理参数的关系，分析影响乳腺癌预后因素。

1.4 统计学处理 使用SPSS 20.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验；采用ROC曲线评估诊断价值，采用Cox回归分析影响乳腺癌预后的因素。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三組基线资料比较 乳腺癌组年龄33～75岁，平均（51.2±12.8）岁，<60岁25例，≥60岁35例；TNM分期：Ⅰ期11例，Ⅱ期14例，Ⅲ期22例，Ⅳ期13例；肿瘤大小：≤3 mm有34例，>3 mm有26例；分化程度：未或低分化35例，中、高分化25例；存在淋巴结转移者45例。乳腺良性病变组年龄32～78岁，平均（53.6±13.4）岁，<60岁23例，≥60岁37例。对照组年龄30～76岁，平均（51.5±12.6）岁，<60岁27例，≥60岁33例。三组年龄比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

2.2 三组血浆中miR-205表达水平及对乳腺癌的诊断价值 对照组和乳腺良性病变组血浆中miR-205表达水平分别为（2.34±0.67）和（3.47±0.86），比较差异有统计学意义（t=8.029，P<0.05）；而乳腺癌组血浆中miR-205表达水平为（7.69±1.26），均高于对照组和乳腺良性病变组（t=6.304、9.354，P<0.05），比较差异均有统计学意义。miR-205在乳腺癌的诊断ROC中，AUC为0.842，95%CI为（0.792，0.891），诊断乳腺癌的特异性为92.3%、灵敏度为84.6%，截断值为5.62。见图1。

2.3 miR-205表达与患者临床病理参数的关系 以miR-205表达水平的二分位数6.31为临界点，低表达23例，高表达37例；miR-205水平与年龄无关（P>0.05）；与TNM分期、肿瘤大小、分化程度及淋巴结转移关系密切（P<0.05）。见表1。

2.4 影响乳腺癌预后因素分析 Cox回归分析显示，肿瘤大小、淋巴结转移、miR-205水平均与乳腺癌预后密切相关，可作为独立的预后因子（P<0.05）。见表2。

3 讨论

miRNA是一种小分子的内源性非编码RNA，可以和mRNA非编码区互补结合，导致mRNA断裂或阻止其翻译，在转录后水平反向调控基因表达水平，在细胞生长、分化和凋亡过程中起着关键作用[5]。因为miRNA能在机体中稳定表达，于是对其含量的检测有助于人类癌症的早期诊断和预后观察[6]。除此之外，游离miRNA还能稳定出现在血浆中，并且其水平不受性别差异的影响，也没有个体差异性[7]。当前研究已确认miRNA在肿瘤发生发展中起着了关键的作用，并且发挥着抑癌或促癌的作用[8]。由于miRNA在外周循环血液中稳定存在，也证实了血浆miRNA可用于肿瘤的诊断及疗效预测，相对于其他传统肿瘤标志物更稳定[9]。

研究发现miR-205在癌症形成和恶化过程中的生物学作用不一致，有研究认为miR-205在食管癌细胞中的水平显著升高，并与细胞浸润迁移相关性好，而对细胞分化凋亡没有影响[10-12]。然而另有报道提示miR-205在食管鳞癌细胞中的水平低于正常组织，而高于食管腺癌[13]。前期已经证实miR-205在乳腺癌中表现出抑癌基因的效果，可通过作用于HER3诱导其下游

PI3K/Akt信号通路，进一步抑制肿瘤的发生，还对药物治疗有辅助作用[14-16]。同样有相关研究发现miR-205在前列腺癌中也表现出抑癌作用，因为癌细胞中其表达水平显著低于正常组织，诱导其表达上调能够引起前列腺癌细胞的凋亡及阻滞细胞周期[17]。本研究结果显示，乳腺癌组血浆中miR-205表达水平均高于对照组和乳腺良性病变组（P<0.05）；miR-205诊断乳腺癌的AUC为0.842，95%CI为（0.792，0.891），特异性为92.3%、灵敏度为84.6%，说明其对乳腺癌诊断的价值较好；miR-205水平与TNM分期、肿瘤大小、分化程度及淋巴结转移关系密切（P<0.05）；Cox回归分析显示，肿瘤大小、淋巴结转移、miR-205水平均与乳腺癌预后密切相关，可作为独立的预后因子（P<0.05）。

综上所述，乳腺癌患者血浆中miR-205呈高表達，与临床病理学参数关系密切，对乳腺癌的诊断价值较高，且是影响腺癌预后的因子之一。

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（收稿日期：2018-08-30） （本文编辑：董悦）