多重耐药铜绿假单胞菌对头孢洛扎-他唑巴坦的敏感性和药敏试验方法的比较

由多重耐药（MDR）铜绿假单胞菌引起的感染呈现上升趋势，特别是在危重患者中，导致相关感染的发病率和病死率增加。目前对MDR铜绿假单胞菌感染的治疗可选药物很少。2014 年和2015 年，美国FDA 和欧洲药品管理局（EMA ）相继分别批准了头孢洛扎-他唑巴坦用于治疗复杂性尿路感染和腹腔感染2项适应证。该复合制剂与头孢他啶相比，对AmpC酶更稳定，对铜绿假单胞菌的青霉素结合蛋白（PBP）有较高的亲和力，可有效地穿透缺失孔蛋白的外膜蛋白，并在有外排泵存在的细胞周质中发挥抗菌作用。因此头孢洛扎-他唑巴坦可用于治疗MDR铜绿假单胞菌所致感染。但该复合制剂对产金属酶（MBL）的菌株无效。本文主要评估MDR和广泛耐药（XDR） 铜绿假单胞菌对该药的耐药率、潜在的耐药基因、克隆结构，并比较不同药敏试验方法对测试头孢洛扎-他唑巴坦的准确性。

Frieder 等收集44株MDR和68株XDR铜绿假单胞菌。其中66 株铜绿假单胞菌确定为感染，占58.9%；46 株为定植菌，占41.1%。主要分离标本为血培养、伤口拭子和尿液。采用微量肉汤稀释法（BMD）为标准方法、比较梯度扩散法（E试验法）和纸片扩散法进行头孢洛扎-他唑巴坦的药敏试验，根据EUCAST和CLSI药敏折点判断结果。微量肉汤稀释法结果显示头孢洛扎-他唑巴坦的MIC50、MIC90和MIC范围分别为2、256和0.5～＞256 mg/L。计有38 株（33.9%）铜绿假单胞菌对头孢洛扎-他唑巴坦耐药，其中17株分离自骨髓移植患者。根据卡方检验，MDR株的耐药率（4.8%）明显低于XDR株的耐药率（50%），差异有统计学意义（P＜0.000 1）。与标准方法（BMD）获得的结果相比较，BMD检测7株头孢洛扎-他唑巴坦敏感的菌株，E试验法检测为耐药；但没有BMD耐药的菌株被E试验法检测为敏感的菌株。因此E试验法检测铜绿假单胞菌对头孢洛扎-他唑巴坦的敏感性试验结果中未发生非常重大错误，但有6.3%的主要错误。Bland–Altman分析（MIC一致性分析）显示在头孢洛扎低浓度时BMD和E试验法显现很好的一致性，但当头孢洛扎高浓度时（≥128 mg/L）两者结果存在较大差异。

纸片扩散法测得71株铜绿假单胞菌对头孢洛扎-他唑巴坦敏感、7株中介和34株耐药。有1株假性耐药（与标准方法BMD相比），没有非常重大错误，分类一致率为92%（95%CI：86.5%～96.3%）。

采用恒温扩增PCR方法筛选金属β内酰胺酶编码基因（如blaVIM1-37，blaNDM1-7），常规PCR 用于筛选blaIMP基因。随机选择的77株细菌进行全基因组测序（WGS）以用于克隆结构分析。在38株头孢洛扎-他唑巴坦耐药细菌中，主要的耐药基因为blaIMP（n=25），blaVIM（n=4） 和blaGES（n=1），其余8株的基因型暂不清楚。多位点序列分型显示，主要ST型为235型、274型和395型。头孢洛扎-他唑巴坦耐药性与ST235型有很大相关性（P＜0. 001）。

综上所述，本研究中头孢洛扎-他唑巴坦对铜绿假单胞菌显示有较高的抗菌活性（敏感率66.1%）。耐药性与ST235型相关，主要携带blaIMP基因。由于XDR菌株中存在碳青霉烯酶，故XDR菌株中头孢洛扎-他唑巴坦耐药率远远高于MDR株。纸片扩散法可用于准确测定头孢洛扎-他唑巴坦的药敏结果。

SCHAUMBURG F， BLETZ S， MELLMANN A， et al.Susceptibility of MDRPseudomonas aeruginosato ceftolozane/tazobactam and comparison of different susceptibility testing methods[J]. J Antimicrob Chemother， 2017， 72（11）: 3079-3084.